PTEN、AKT2、NF-кB 在肺癌组织表达及价值评价

闾少冬李志刚

PTEN、AKT2、NF-кB 在肺癌组织表达及价值评价

闾少冬1李志刚2

目的 研究PTEN、AKT2以及NF-кB在肺癌组织中的表达含量以及其实际价值。方法 随机选取我院收治的90例肺癌患者，选取其患者肺癌组织作为肺癌组以及肺癌远端（距离肺癌组织距离大于5 cm）的正常肺组织作为正常对照组，使用蛋白免疫印迹以及RTPCR技术检测PTEN、AKT2以及NF-кB蛋白以及mRNA表达含量，分析PTEN、AKT2以及NF-кB表达的相关性以及临床价值。结果 肺癌组织中AKT2以及NF-кB蛋白阳性表达率显著高于正常对照组组织；肺癌组织中PTEN蛋白阳性表达率显著低于正常对照组组织。在肺癌组织中PTEN、AKT2以及NF-кB三个基因的mRNA表达含量。肺癌组织中AKT2以及NF-кB的mRNA表达含量显著高于正常对照组组织；肺癌组织中PTEN的mRNA表达含量显著低于正常对照组组织。在肺癌组织中PTEN、AKT2以及NF-кB三个基因的mRNA表达含量。肺癌组织中AKT2以及NF-кB的mRNA表达含量显著高于正常对照组组织；肺癌组织中PTEN的mRNA表达含量显著低于正常对照组组织。PTEN阳性表达与AKT2阳性表达之间呈负相关；PTEN阳性表达与NF-кB阳性表达之间呈负相关；AKT2阳性表达与NF-кB阳性表达之间呈正相关。结论 肺癌患者组织中PTEN表达含量比较低，AKT2以及NF-кB表达含量比较高，PTEN、AKT2以及NF-кB三者与肺癌的发生和发展密切相关，可以作为临床诊断和治疗肺癌的重要参考指标。

PTEN；AKT2；NF-кB；mRNA；蛋白

由于我国具有庞大的吸烟人群以及比较严重的空气污染，因而我国的肺癌患者数量巨大而且呈现逐年递增的趋势。有效掌握肺癌患者的病情以及发病机理对于治疗肺癌病症非常必要。现有的研究结果显示，肺癌的发生与发展和基因功能的异常具有内在联系。PTEN作为肿瘤抑制基因，其表达含量与多种癌症密切相关，当PTEN基因表达失活时患者出现乳腺癌、肺癌、神经胶质瘤以及前列腺癌等恶性肿瘤的概率大大增加[1]。AKT2和NF-кB基因则与细胞增殖密切相关，其可以介导细胞转移与凋亡，在恶性肿瘤的发生以及发展过程中扮演重要作用[2]。现有的研究较少涉及PTEN、AKT2以及NF-кB在肺癌组织中的表达以及意义，本研究探究了PTEN、AKT2以及NF-кB在肺癌组织中的表达含量以及实际意义，现将研究结果阐述如下。

1 资料和方法

1.1 一般资料

选取我院2014年9月—2016年8月收治的90例肺癌患者，选取原发性肺癌标本，手术切除的病理标本作为肺癌组，所有患者的均含有临床资料以及手术记录，手术前的患者均不存在化疗、免疫治疗以及放疗历史。取少量肺癌远端（距离肺癌组织距离大于5 cm）的正常肺组织作为正常对照组。所有患者均签署知情同意书，整个研究符合《主要伦理问题的审查指南》。90例肺癌患者中62例男性和28例女性，年龄43～75岁，平均年龄（56.12±7.89）岁。90例肺癌患者中42例鳞癌、48例腺癌；46例低分化肺癌以及44例中高分化肺癌；60例Ⅰ～Ⅱ期肺癌，21例Ⅲ～Ⅳ期肺癌；52例淋巴转移；38例无淋巴转移。

1.2 方法

随机选取我院收治的90例肺癌患者，选取肺癌组织作为肺癌组以及肺癌远端（距离肺癌组织距离大于5 cm）的正常肺组织作为正常对照组，使用蛋白免疫印迹以及RT-PCR技术检测PTEN、AKT2以及NF-кB蛋白以及mRNA表达含量，分析PTEN、AKT2以及NF-кB表达的相关性以及临床价值。PTEN使用单克隆抗体，AKT2使用兔单克隆抗体，NF-кB使用鼠单克隆抗体。兔单克隆抗体全部购自CST公司，鼠单克隆抗体购自Abcam公司。RT-PCR试剂盒购自TAKARA公司。Western按照常规操作进行，使用ECL发光法显色。RT-PCR方法检测PTEN、AKT2以及NF-кB的mRNA检测，所有样品置于-80℃中保存，样品提取过程按照试剂盒说明进行，提取mRNA后进行逆转录合成cDNA，使用Primer 6.0设计PCR primer，在72～95℃环境进行RT-PCR，使用琼脂凝胶电泳进行分析，最后进行凝胶成像扫描，β-actin最为内参。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 在肺癌组织中PTEN、AKT2以及NF-кB三个基因的蛋白表达情况

肺癌组织中，AKT2以及NF-кB蛋白阳性表达率高于正常对照组组织（P＜0.01）；肺癌组织中PTEN蛋白阳性表达率低于正常对照组组织（P＜0.01）。见表1。

2.2 在肺癌组织中PTEN、AKT2以及NF-кB三个基因的mRNA表达含量

肺癌组织中，AKT2以及NF-кB的mRNA表达含量高于正常对照组组织（P＜0.05）；肺癌组织中PTEN的mRNA表达含量低于正常对照组组织（P＜0.01）。见表2。

2.3 在肺癌组织中PTEN、AKT2以及NF-кB三个基因表达的相关性

PTEN阳性表达与AKT2阳性表达之间呈负相关（r=-0.612，P=0.034）；PTEN阳性表达与NF-кB阳性表达之间呈负相关（r=-0.865，P=0.012）；AKT2阳性表达与NF-кB阳性表达之间呈正相关（r=0.655，P=0.027）。

3 讨论

研究PTEN、AKT2以及NF-кB在肺癌组织中的表达含量以及其实际价值。PTEN基因又称为MMC1基因，自1997年被发现以来受到密切关注，其作为新的抑癌基因是缺失染色体10的张力蛋白同源物基因，在多种进展期癌中容易发生突变，可以有效调节上皮细胞富含磷酸酶基因[3-4]。PTEN既具有蛋白的活性也具有磷酸酶活性，存在磷酸酶双重特异活性，可以有效水解D 3磷酸，存在D 3磷酸3，4，5三磷酸活性当PTEN基因突变或者丢失，PTEN的mRNA表达含量降低或者不表达都可以引发机体抗肿瘤功能的丧失[5]。PTEN基因抗肿瘤机制主要表现为：通过FAK去磷酸化有效阻止肿瘤细胞浸润和转移；通过PIP3的去磷酸化有效促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞生长；有效降低MAPK细胞信号通路表达[6]。AKT2作为肿瘤生存的重要通路，在癌症组织中可以检测到AKT2高表达。NF-кB作为一种核转录因子，其通过与Iк B有效结合，在细胞浆中发挥作用[7-8]。肿瘤坏死因子等信号分子可以有效激活I кB激酶，随后I кB激酶有效激活I кB，NF－кB随之转入细胞核，通过与DNA结合启动基因的转录，活化的NF－кB可以有效介导转录抑制癌细胞的凋亡，癌细胞转移和浸润随之增加[9-12]。检测PTEN、AKT2以及NF-кB的表达可以反映组织细胞的健康程度，检测三者的含量可以指导临床的诊断与治疗。

我们的研究发现，在肺癌组织中PTEN、AKT2以及NF-кB三个基因的mRNA表达含量。肺癌组织中AKT2以及NF-кB的mRNA表达含量显著高于正常对照组组织；肺癌组织中PTEN的mRNA表达含量低于正常对照组组织。PTEN阳性表达与AKT2阳性表达之间呈负相关；PTEN阳性表达与NF-кB阳性表达之间呈负相关；AKT2阳性表达与NF-кB阳性表达之间呈正相关。Ⅰ～Ⅱ期、中高分化以及无淋巴转移的肺癌组织PTEN的含量低于Ⅲ～Ⅳ期、低分化组以及有淋巴转移的肺癌组织；无淋巴转移以及Ⅰ～Ⅱ期肺癌组织AKT2的含量低于有淋巴转移和Ⅲ～Ⅳ期的肺癌组织；Ⅰ～Ⅱ期、中高分化以及无淋巴转移的肺癌组织阳性表达率低于Ⅲ～Ⅳ期、低分化组以及淋巴转移的肺癌组织。PTEN、AKT2以及NF-кB三个基因在肺癌组织的淋巴转移以及临床分期中表达差异显著，PTEN以及NF-кB的表达含量与肺癌的分化程度密切相关，AKT2的表达含量则与肺癌的分化程度关系不密切。PTEN在肺癌组织中低表达预示肺癌患者临床分期的增加，患者更易出现淋巴结转移；AKT2以及NF-кB的高表达则预示临床分期的增加。肺腺癌AKT2表达概率高于肺鳞癌，因而可以解释为什么腺癌更容易发生淋巴转移。PTEN、AKT2以及NF-кB三个基因的表达则与患者的性别、年龄以及组织学类型没有明显关系。

表1 PTEN、AKT2、NF-кB在肺癌组织表达[（蛋白阳性表达数／研究个体数）%]

表2 PTEN、AKT2、NF-кB在肺癌组织中的mRNA表达含量（）

表2 PTEN、AKT2、NF-кB在肺癌组织中的mRNA表达含量（）

组别nPTENAKT2NF-кB肺癌组9022．42±2．6959．78±1．5779．32±1．34正常对照组9060．17±3．129．89±1．4344．16±2．51t-5．788．344．97P-0．009 50．005 70．010 2

因而，肺癌患者组织中PTEN表达含量比较低，AKT2以及NF-кB表达含量比较高，PTEN、AKT2以及NF-кB三者与肺癌的发生和发展密切相关，可以作为临床诊断和治疗肺癌的重要参考指标。

[1] 丛玲华，高志安，钟国平，等． 人肺癌组织E-cadherin和PTEN及HIF-1α蛋白表达临床意义的探讨[J]． 中华肿瘤防治杂志，2013，20（3）：196-199．

[2] 张嘉玲，木其尔，斯蒂芬·斯坦尼斯·史帕思． SEMA3B对人非小细胞肺癌NCI-H1299细胞Akt磷酸化调控作用的实验研究[J]．现代肿瘤医学，2016，24（12）：1854-1857．

[3] 陈杰，庞江琳，覃燕梅，等． 5F对人高转移巨细胞肺癌PGCL3细胞PTEN、MMP-9表达的影响[J]． 华中科技大学学报（医学版），2012，41（2）：147-151．

[4] 黄爱丽，刘曙光，盛文杰． TGF-β1和PTEN在非小细胞肺癌组织中的表达及相关关系定量分析[J]． 中国体视学与图像分析，2014，19（1）：63-69．

[5] 张旭，王芳，邓玲，等． PTEN基因缺失与EGFR突变型非小细胞肺癌患者EGFR-酪氨酸激酶抑制剂疗效的关系[J]． 解剖学研究，2015，27（5）：421-424，426．

[6] 龚青，王茜，陈浩宇，等． 结直肠癌组织中PTEN、PI3K的表达与其病理特点及预后的相关性研究[J]． 胃肠病学和肝病学杂志，2016，25（5）：547-553．

[7] 张刚，李中，林晓萌，等． 乳腺组织中PTEN表达及其与PI3K/ Akt信号通路的关系[J]． 临床与实验病理学杂志，2015，31（9）：1037-1039．

[8] 刘娟妮，李俊海，白国栋． PI3K/AKT信号通路相关蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义[J]． 癌症进展，2016，14（5）：438-440．

[9] 许斌，孟媛，姜彦多． 自噬相关基因Beclin-1与抑癌基因PTEN、p53在大肠癌中的表达和意义[J]． 现代肿瘤医学，2015，23（4）：530-534．

[10] 眭怡群，冯一中． 自噬相关基因LC3、Beclin-1与凋亡相关基因p53、BCL-2在大肠癌中的表达及意义[J]． 临床与实验病理学杂志，2012，28（3）：282-286．

[11] 汤元佳，何卫阳，苟欣． 自噬相关基因LC3、 Beclin-1与凋亡相关基因BCL-2在膀胱尿路上皮癌中的表达[J]． 国际泌尿系统杂志，2014，34（1）：11-15．

[12] 李小东，孙晓晨，李新梅，等． 自噬相关基因Beclin-1和MAP1LC3表达与口腔癌生物学特征的关系[J]． 海南医学院学报，2016，22（6）：524-527．

The PTEN, AKT2, NF-кB Expression and Value in the Evaluation of Lung Cancer

LV Shaodong1LI Zhigang21 Thoracic Surgery Department, Chinese PLA 113 Hospital, Ningbo Zhejiang 315100, China; 2 Esophageal Surgery Department, Shanghai Chest Hospital, Shanghai 200030, China

Objective To study the expression of PTEN, AKT2 and NF-кB in lung cancer tissues and their practical value. Methods 90 cases of lung cancer patients were randomly selected from lung cancer tissue as lung cancer group and lung cancer group (distant lung cancer tissue distance greater than 5cm) normal lung tissue as a normal control group, using protein immunoblotting and RT-PCR detection PTEN, AKT2 and NF-кB protein and mRNA expression, and to analyze the correlation and clinical value of PTEN, AKT2 and NF-кB expression. Results The positive expression rate of AKT2 and NF-кB protein in lung cancer tissues was significantly higher than that in normal control group. The positive expression rate of PTEN protein in lung cancer tissues was significantly lower than that in normal control group. MRNA expression of PTEN, AKT2 and NF-кB genes in lung cancer tissues. The expression of AKT2 and NF-кB in lung cancer tissues was significantly higher than that in normal control group. The expression of PTEN mRNA in lung cancer tissues was significantly lower than that in normal control tissues. MRNA expressionof PTEN, AKT2 and NF-кB genes in lung cancer tissues. The expression of AKT2 and NF-кB in lung cancer tissues was significantly higher than that in normal control group. The expression of PTEN mRNA in lung cancer tissues was significantly lower than that in normal control tissues. There was a negative correlation between PTEN positive expression and positive expression of AKT2. There was a negative correlation between PTEN positive expression and positive expression of NF-кB. Positive expression of AKT2 was positively correlated with NF-кB expression. Conclusion The expression of PTEN and the expression of NF-кB in lung cancer tissues are relatively high. The expression of PTEN, AKT2 and NF-кB is closely related to the occurrence and development of lung cancer and can be used as an important reference for clinical diagnosis and treatment of lung cancer index.

PTEN; AKT2; NF-кB; mRNA; protein

R361

A

1674-9316（2017）08-0125-03

10．3969/j．issn．1674-9316．2017．08．076

1 中国人民解放军第113医院胸外科，浙江 宁波 315100；2 上海市胸科医院食管外科，上海 200030