苗药野棉花不同部位多糖含量比较△

李 香 李晓艳 许义红 孙晓惠 刘 杰 严 锐 田 敏

(黔南民族医学高等专科学校，贵州 都匀 558003)

野棉花为毛茛科银莲花属植物打破碗花花的根(Anemone hupehensis Lem.)或全草，多年生草本植物，苗药野棉花又称米花棍。主要含白头翁素、多糖等成分，由于采集方便、疗效显著，在贵州黔南苗族聚集区被广泛用于脚气肿痛、风湿骨痛、跌打损伤、痈疽肿毒、蜈蚣咬伤等症候的治疗[1]，通过查阅相关文献资料，其多糖具有一定生物活性，不同药用部位多糖比较未见相关报道。本实验测其不同部位多糖含量，为其扩大药用资源研究提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器：Cary100型双光束紫外可见分光光度计(北京安捷伦公司)；AE240型电子天平(瑞士METTLER)；SG-4050C型数显水浴锅(上海硕光公司)；100g手摇式高速中药粉碎机(DTT-100)；HS10260D型超声清洗机。

1.2 药材：野棉花采自贵州省都匀市，经黔南民族医学高等专科学校魏学军教授鉴定为毛茛科银莲花属植物打破碗花花(Anemone hupehensis Lem.)全草。药材采集后干燥粉碎过筛，备用。

1.3 试剂与试药：葡萄糖对照品(天津市化学试剂供销公司)；浓硫酸(济南试剂总厂)；苯酚(上海试剂三厂)；所用试剂均为分析纯；实验用水为蒸馏水等。

2 方法与结果

2.1 葡萄糖对照品溶液的制备：精密称取干燥于1050C至恒重的葡萄糖对照品10.02mg，于105℃干燥至恒重，置50mL容量瓶中，加蒸馏水溶解稀释定容至刻度，摇匀，得浓度为0.2004mg·mL-1的葡萄糖对照品溶液。

2.2 苯酚试剂的配制[2]：称取苯酚约200g，加0.2g碳酸氢钠和0.3g铝片，进行蒸馏，收集182℃处馏分。称取蒸馏苯酚10g，加蒸馏水溶解并稀释至250mL，摇匀置棕色瓶中避光保存。

2.3 供试品溶液的制备[3-6]：精密称量0.9218g野棉花根粉末置具塞锥形瓶中，精密加入1mol·L-1NaOH溶液50mL，精密称定，进行超声45min，取出放冷称重，加入同浓度NaOH溶液补足损失的重量，摇匀滤过，精密吸取续滤液10mL置50mL容量瓶中，加蒸馏水稀释定容至刻度，即得试样溶液。

2.4 测定波长的选择： 取0.2004mg·mL-1的葡萄糖对照品溶液0.1 mL，置具塞试管中，加入4%的苯酚溶液1.0mL，5.0mL浓硫酸，摇匀放置40 min。蒸馏水同法操作空白对照，在400-700nm波长范围内扫描，取样品液0.2mL，同法操作。样品与葡萄糖对照品在488nm波长处有最大吸收，因此选取488nm为该实验多糖含量测定波长。

2.5 标准曲线的绘制： 取已配置好的葡萄糖对照品溶液10 mL置容量瓶中，加蒸馏水稀释制得0.1mg·mL-1葡萄糖对照品溶液。精密吸取该对照品溶液0.1，0．2，0．3，0．4，0．5，0．6，0．7，0．8mL，分别置具塞试管中，加入4%的苯酚溶液1mL，浓硫酸5mL，加蒸馏水补足至8mL刻度，摇匀，放置40min。取蒸馏水2.0mL同法操作空白对照，测定吸光值，以吸光度A为纵坐标，浓度C为横坐标(μg·mL-1)，绘制标准曲线。回归方程：A=0.0745C+0.0109，R=0.9996。表明在浓度1.430～10.00μg·mL-1范围内浓度与吸光度有良好线性关系。

2.6 精密度实验：精密量取0.5mL样品溶液，置具塞试管中，加入4%的苯酚溶液1mL，浓硫酸5mL，加蒸馏水补至8mL刻度，摇匀放置40min后测定吸光值，重复测定6次，RSD=1.01%，结果表明精密度良好。

2.7 重复性实验：精密称取干燥至恒重野棉花根样品6份，每份约0.9g，同2.3项下制备供试液，精密吸取该供试液0.5mL，置具塞试管中，加入4%的苯酚溶液1mL，浓硫酸5mL，加蒸馏水补至8mL刻度，摇匀放置40min，测定吸光值。RSD=1.91%,表明仪器重复性较好。

结果见表1。

表1 重复性实验(n=6)

2.8 稳定性实验：精密称取干燥至恒重的样品约0.9g，1份，同2.7项操作，在20，40， 60，80，100,120min，分别测定其吸光度。RSD=0. 28%，结果表明供试液显色后2h内稳定性良好。

2.9 加样回收率实验[6]：精密称定干燥至恒重的样品约约0.45g，9份，分为3组，依2.3项法制备供试液,分别加入80%，100%，120%葡萄糖对照品溶液，按2.7项操作，依次测定吸光度，计算回收率，结果见表2。

表2 加样回收率实验(n=9)

注：回收率%=(测得总量-样品含量)/加样量×100%。

实验结果表明试验方法可行。

2.10 样品不同部位多糖含量测定：取干燥至恒重的野棉花不同部位即根、茎、叶约0.9g，每个部位各3份，按“2.3”方法制备供试品溶液，按2.7项操作，依次测定吸光度，结果见表3。

表3 不同部位野棉花多糖的含量测定结果(n=9)

3 结果

野棉花为毛茛科银莲花属植物打破碗花花的根(Anemone hupehensis Lem.)或全草，苗药亦称米花棍。主要含白头翁素、多糖等成分，由于其采集方便、疗效显著，在贵州苗族聚集区被广泛应用，通过比较不同药用部位多糖含量，为其下一步药效学研究及药用资源扩大应用提供依据。本实验采用超声技术提取野棉花多糖，测定野棉花不同药用部位药多糖的含量。结果表明野棉花根多糖含量最高，3个不同药用部位多糖的含量有差异。

[1]邱德文，杜江.中华本草苗药卷[M].贵阳：贵州科技出版社，2005,12：503-504.

[2] 舒晓燕,刘慧,梁静,等.川附子粗多糖提取工艺的研究[J].中药材,2006,29(12): 1349-1352.

[3] 林丽清,黄丽英,钟添华, 等.金线莲多糖的分离纯化与含量测定[J].中国医院药学杂志, 2007,27(8): 1037-1039.

[4] 张玉萌.紫草多糖的研究概况[J].中国新医药,2004,3(4):54-55.

[5] 李香，彭小冰，汪云伟.黔产不同产地马齿苋多糖的含量测定[J].黔南民族医专学报, 2013,26(1):6-8.

[6] 李香，彭小冰，汪云伟,等.黔产马齿苋多糖的含量测定[J].贵州科学,2012,30(5):27-29.