长链非编码RNA LOC285194在乳腺癌组织中的表达及临床意义

黄秋霞，陈 罡，冯震博，韦康来，陈 皓

(广西医科大学第一附属医院病理科，南宁 535021)

长链非编码RNA LOC285194在乳腺癌组织中的表达及临床意义

黄秋霞，陈 罡△，冯震博，韦康来，陈 皓

(广西医科大学第一附属医院病理科，南宁 535021)

[摘要] 目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA) LOC285194在乳腺癌及癌旁组织中的表达及其临床意义。方法 选取石蜡包埋的乳腺癌组织42份及癌旁组织16份，用实时荧光定量PCR技术检测lncRNA LOC285194的表达，分析其与临床病理特征的相关性。结果 lncRNA LOC285194在乳腺癌组织中表达水平明显低于癌旁组织(P<0.01)；lncRNA LOC285194在人类表皮生长因子受体2(HER2)过表达乳腺癌组织较HER2阴性乳腺癌组织表达水平上调(P=0.013)，二者呈正相关(r=0.385,P=0.012)。结论 lncRNA LOC285194可能在乳腺癌起抑癌基因的作用，可能是通过与HER2的关联参与乳腺癌的发生，其有可能成为乳腺癌治疗的靶基因。

乳腺肿瘤；长链非编码RNA；LOC285194；肿瘤发生； 人类表皮生长因子受体2

乳腺癌是危害女性健康常见的恶性肿瘤，其具有异质性强的特点，具有多种组织学分类，有研究显示，通过基因谱改变进行分子分类，相对组织学分类更为精确、有效，因此寻求特异性强的分子诊治靶标可为乳腺癌的诊疗提供更有效的新方案。长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)是一类长度大于200 bp，无编码蛋白质功能的RNA，参与肿瘤的发生、发展[1]。lncRNA在乳腺癌中有异常表达，影响乳腺癌细胞的增殖、转移等。lncRNA LOC285194是近年来新发现在肿瘤中异常表达的基因，其在乳腺癌中表达情况少见报道。本研究通过检测lncRNA LOC285194在乳腺癌及癌旁组织中的表达，分析其与各临床病理特征的相关性，探讨lncRNA LOC285194在乳腺癌发生、发展中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取本院病理科2012年1-12月行乳腺癌根治术的石蜡标本，包括42份癌组织及16份癌旁组织，患者术前均未进行辅助性的放疗或化疗。病理类型为浸润性导管癌，癌旁组织距离肿瘤至少5 cm。并收集相关临床病理资料，包括年龄、肿瘤TMN分期、免疫组化结果等。

1.2 方法

1.2.1 总RNA提取 在本组实验中癌组织成分大于等于50%的，切片厚度为6 μm 3片；癌组织成分小于50%及癌旁组织，均为切片厚度8 μm 5片。当脂肪面积达大于等于30%的癌及癌旁组织，需将切片置于玻片上，根据HE镜下定位，用盖玻片剔除多余的脂肪组织，尽量保证提取总RNA为腺体的。其后操作步骤按miRNeasy FFPE Kit (QIAGEN)的试剂盒说明书进行。经用核酸检测仪检测总RNA达使用标准(A260∶A280为1.9～2.1)的标本方能使用。

1.2.2 cDNA合成 使用miScript Ⅱ RT Kit (QIAGEN)试剂盒，按20 μL反应体系，经普通PCR 37 ℃ 60 min，95 ℃ 5 min逆转录，4 ℃保存。其中5×miScript HiFlex Buffer 4 μL，10×Nucleics Mix 2 μL，RNase-free water variable，miScriptReverse Transcriptase Mix 2 μL，Template RNA variable，总容积总容量20 μL。

1.2.3 qRT-PCR 检测 使用LightCycler®480 SYBR Green I Master(Roche)试剂盒，按20 μL反应体系，参照说明书步骤进行。其中dH2O 6 μL，SYBR Green I Master 10 μL，PCR Forward Primer 1 μL，PCR Reverse Primer 1 μL，DNA 模板2 μL，总容积总容量20 μL。引物序列 lncRNA LOC285194上游：5′- TGT GCC TGT TTG ACC TCT GA-3′， 下游：5′-AGG AAG GAT AAA AGA CCG ACC A-3′。

1.3 统计学处理 数据采用SPSS16.0统计软件进行分析。本实验采用计算2-△Ct值的方法来进行各标本的相对定量检测[2]。组间比较采用秩和检验。记数资料采用χ2检验，lncRNA LOC285194表达与各临床病理特征的相关性采用Spearman相关分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 qRT-PCR扩增曲线和溶解曲线 GAPDH及lncRNA LOC285194 Ct值为25～35。扩增曲线出现平台期，各组扩增效率相近。

2.2 qRT-PCR检测结果 以癌和癌旁2-△Ct的中位数分界，将lncRNA LOC285194表达分为高表达组及低表达组。经秩和检验分析，在癌组织中lncRNA LOC285194的表达水平较癌旁组织明显降低(P<0.01)，见表1。lncRNA LOC285194的表达水平在HER2过表达，即HER2(3+)的乳腺癌组织中较HER2阴性的乳腺癌组织表达明显上调(P=0.013)，见图1。相关性分析显示，lncRNA LOC285194的表达水平与HER2过表达呈正相关(r=0.385,P=0.012)，其余临床病理特征指标中lncRNA LOC285194的表达水平差异无统计学意义(P>0.05) ，见表2。

表1 lncRNA LOC285194在乳腺癌和癌旁组织中的表达比较[n(%)]

A：HER2 (-)；B：HER2 (3+)。

表2 LOC285194的表达水平与乳腺癌临床病理特征的相关性[n(%)]

3 讨 论

乳腺癌近年来发病率不断上升，患者发病年龄呈年轻化趋势。在美国2014 年乳腺癌的新发病例为234 190例，其中女性231 840例；死亡人数40 730例，其中女性为40 290例，死亡率在女性恶性肿瘤中位居第2位[3]。《2014年中国肿瘤登记年报》显示，乳腺癌的发病人数约为25万，居女性恶性肿瘤发病率第1位，死亡率在女性恶性肿瘤中占第4位，严重威胁女性健康和生命[4]。随着分子病理学技术的发展，研究发现多个lncRNA与乳腺癌的发生、发展具有密切关联[5-13]，如HOTAIR影响乳腺癌的转移，H19影响乳腺癌细胞周期，Gas5、Zfas1、LSINCT5影响乳腺癌细胞增殖等，这些研究提示lncRNA可能为乳腺癌的诊治带来新的思路，发现对乳腺癌细胞特异性高的lncRNA对推动乳腺癌精准治疗具有重大意义。

LOC285194是位于染色体3q13.31的一个反义lncRNA，Pasic等[14]首次在骨肉瘤组织中发现并命名。在骨肉瘤[14]、结直肠癌[15]、食管癌[16]、胰腺癌[17]、胶质瘤[18]的研究中，均显示在肿瘤组织中LOC285194表达水平降低或缺失，且与患者的不良预后相关，起着抑癌基因的作用。其低表达与肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移和远处转移相关[14-18]。LOC285194抑癌作用的机制，在骨肉瘤中，主要通过对细胞周期、细胞凋亡及VEGF/VEGFR1的调节，进而影响骨肉瘤细胞的增殖性[14]。在结直肠癌中，LOC285194受到抑癌基因P53的调节，且和潜在癌基因miRNA-211竞争靶点抑制细胞增殖[19]。在胶质瘤的研究中，上调LOC285194可增加P53蛋白的表达量[18]。由此可见，LOC285194在肿瘤中可能通过与P53相互作用，调控相关基因的表达，抑制肿瘤细胞的增殖性，从而起到抑癌的作用。

本研究结果显示，LOC285194在乳腺癌中的表达，较癌旁组织表达水平明显下降，与之前在其他肿瘤中的结果一致。同时，试验结果显示，LOC285194在HER2过表达较HER2阴性的乳腺癌组织表达上调。而HER2作为乳腺癌靶向用药的临床指标，与LOC285194存在相关性的发现，使LOC285194进一步深入研究具有重大的意义。而其是否也通过P53、miRNA-211影响乳腺癌细胞的增殖性，需要进一步的研究证实。

综上所述，LOC285194在乳腺癌中可能起着抑制癌的作用，与HER2的表达存在相关性，可望成为乳腺癌诊断的分子标记物及治疗的靶点。

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Expression and clinical significance of long chain non-coding RNA LOC285194 in human breast cancer tissue

HuangQiuxia,ChenGang△,FengZhenbo,WeiKanglai,ChenHao

(DepartmentofPathology,FirstAffiliatedHospitalofGuangxiMedicalUniversity,Nanning,Guangxi530021,China)

[Abstract] Objective To investigate the expression of long chain non-coding(lnc) RNA LOC285194 in breast cancer tissue and paracancerous tissue and its clinical significance.Methods Forty-two samples of paraffin embedded breast cancer tissue and 16 samples of paraffin embedded paracancerous tissue were selected.The expression of lncRNA LOC285194 in these tissue were detected by using quantitative real-time polymerase chain reaction(PCR).Then its correlation with clinicopathological features was analyzed.Results The expression level of lncRNA LOC285194 in breast cancer tissue was significantly lower that in the paracancerous tissue (P<0.01);the level of lncRNA LOC285194 in human epidermal growth factor receptor-2(HER2)overexpression tissues was up-regulated compared with HER2 negative breast cancer tissue(P=0.013),there was a positive correlation between them(r=0.385,P=0.012).Conclusion lncRNA LOC285194 may play the role of cancer suppressor gene and may be involved in the generation of breast cancer by HER2 association,which may become a target gene of breast cancer treatment.

breast neoplasms;long chain non-coding RNA;LOC285194;tumorigenesis;human epidermal growth factor receptor-2

黄秋霞(1981-)，主治医师，硕士研究生，主要从事肿瘤病理诊断及基础研究。△

，E-mail:1055668952@qq.com。

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.09.024

R73-35

A

1671-8348(2017)09-1223-03

2016-07-20

2016-11-18)

论著·临床研究