癌超甲基化基因1蛋白和卵巢癌基因1蛋白在卵巢癌组织中的表达及意义研究*

张文竹，魏振彤

(吉林大学第一医院妇产科，长春 130021)

论著·临床研究

癌超甲基化基因1蛋白和卵巢癌基因1蛋白在卵巢癌组织中的表达及意义研究*

张文竹，魏振彤△

(吉林大学第一医院妇产科，长春 130021)

目的 研究卵巢癌组织中癌超甲基化基因1蛋白和卵巢癌基因1蛋白的表达情况及其与卵巢癌病理特点的关系，探讨其在卵巢癌中的意义。方法 选择2014-2015年在该院妇产科手术切除卵巢癌组织标本63例和正常卵巢组织标本63例作为研究对象。采用Western blot法测定卵巢癌组织和正常卵巢组织中癌超甲基化基因1蛋白和卵巢癌基因1蛋白的表达情况，并分析其与卵巢癌病理特点的关系。结果 卵巢癌组织中癌超甲基化基因1蛋白、卵巢癌基因1蛋白的表达量明显低于正常卵巢组织(P<0.05)。癌超甲基化基因1蛋白在不同卵巢癌分期、不同分化程度和不同病理类型中的表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。在卵巢癌Ⅰ期中卵巢癌基因1蛋白的表达高于卵巢癌Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期(P<0.05)，Ⅱ期的表达量高于Ⅲ～Ⅳ期(P<0.05)；高分化的表达量高于中分化和低分化(P<0.05)，中分化和低分化的表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)；卵巢癌基因1蛋白在卵巢癌不同病理类型中的表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 癌超甲基化基因1蛋白失活可能只参与卵巢癌的发生，卵巢癌基因1蛋白和卵巢癌的发展有一定关系。

卵巢肿瘤；癌超甲基化基因1；卵巢癌基因1

卵巢癌多发生于中老年女性，发病早期症状不明显，发病比较隐匿，并且缺乏早期诊断卵巢癌的有效方法，大多卵巢癌发现时已为晚期，治疗效果欠佳，预后差，对女性的健康和生命造成严重威胁[1]。目前卵巢癌的发病机制尚不明确，卵巢癌的发生可能和染色体的突变有关，癌超甲基化基因1位于17号染色体上，和散发性卵巢癌的发生关系密切[2]。癌超甲基化基因1蛋白为转录抑制物，能够调控SIRT启动子，抑制SIRT启动子转录，其失活能够上调SIRT，使肿瘤细胞不能凋亡，引起肿瘤的发生[3-4]。卵巢癌基因1蛋白为核内蛋白，能够调节细胞的增殖和分化，调节肿瘤的发生和胚胎的发育[5-6]，在卵巢癌中卵巢癌基因1蛋白表达缺失或表达减少，对卵巢癌的发生有一定作用。本研究对卵巢癌组织中癌超甲基化基因1蛋白和卵巢癌基因1蛋白的表达情况及其与卵巢癌病理特点的关系进行研究，探讨其在卵巢癌中的意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2014-2015年本院妇产科手术切除卵巢癌组织标本63例和正常卵巢组织标本63例作为研究对象。卵巢癌者年龄(49.7±3.8)岁，正常卵巢者年龄(47.9±5.3)岁，两组年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。卵巢癌患者为卵巢癌首次手术治疗，手术治疗前没有进行过放化疗治疗，所有卵巢癌患者均进行卵巢癌肿瘤细胞减灭术，术后病理证实为卵巢癌。卵巢癌临床分期Ⅰ期20例，Ⅱ期19例，Ⅲ期21例，Ⅳ期3例；低分化24例，中分化27例，高分化12例；病理类型为浆液性卵巢癌36例，黏液性卵巢癌14例，子宫内膜样卵巢癌13例。正常卵巢组织来源于良性卵巢囊肿手术切除的卵巢标本。

1.2 主要试剂和仪器 鼠抗人癌超甲基化基因1 一抗(美国Sigma 公司)、鼠抗人卵巢癌基因1一抗(美国Sigma 公司)；显微镜(上海精宏实验设备有限公司)、电泳仪(上海精宏实验设备有限公司)、切片机(上海精宏实验设备有限公司)。

1.3 方法

1.3.1 组织标本的处理 将卵巢癌组织和正常卵巢组织用剪刀剪碎，加入组织裂解液，匀浆到没有组织块，离心机中离心，取上清液置于EP管中，紫外分光光度计上测量595 nm波长的吸光度值，计算蛋白浓度，把蛋白样品加入到缓冲液中煮沸，冷却后备用。

1.3.2 卵巢癌组织和正常卵巢组织中癌超甲基化基因1蛋白和卵巢癌基因1蛋白表达测定 采用Western blot对组织中癌超甲基化基因1蛋白和卵巢癌基因1蛋白的表达进行测定，癌超甲基化基因1蛋白阳性为在76×103处出现显色单一条带，卵巢癌基因1蛋白阳性为在50×103处出现显色单一条带，显影条带采用Bandscan软件进行灰度分析，癌超甲基化基因1蛋白的相对表达水平为癌超甲基化基因1蛋白的灰度值和GAPDH灰度值的比值；卵巢癌基因1蛋白的相对表达水平为卵巢癌基因1蛋白的灰度值和GAPDH灰度值的比值。

2 结 果

2.1 卵巢癌组织和正常卵巢组织中癌超甲基化基因1蛋白、卵巢癌基因1蛋白的表达情况比较 卵巢癌组织中癌超甲基化基因1蛋白、卵巢癌基因1蛋白的表达量明显低于正常卵巢组织(P<0.05)。见表1。

2.2 卵巢癌组织中癌超甲基化基因1蛋白、卵巢癌基因1蛋白的表达和病理特点的关系 癌超甲基化基因1蛋白在不同病理分期、不同分化程度和不同病理类型中的表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。卵巢癌基因1蛋白在不同病理分期中的表达量差异有统计学意义(P<0.05)，在Ⅰ期中的表达量高于Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期(P<0.05)，Ⅱ期中的表达量高于Ⅲ～Ⅳ期(P<0.05)；在不同分化程度中的表达量差异有统计学意义(P<0.05)，高分化的表达量高于中分化和低分化(P<0.05)，中分化和低分化的表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)；在不同病理类型中的表达量差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表1 卵巢癌组织和正常卵巢组织中癌超甲基化基因1 蛋白、卵巢癌基因1蛋白的表达情况±s)

表2 卵巢癌组织中癌超甲基化基因1蛋白、卵巢癌基因1 蛋白的表达和病理特点的关系±s)

3 讨 论

卵巢癌恶性程度比较高，进展比较快，诊断时多为晚期，预后比较差[7-8]。近年来卵巢癌的发病率有上升趋势，卵巢癌细胞的增殖、侵袭和远处转移时卵巢癌治疗失败和术后复发的主要原因，也是卵巢癌患者死亡的主要原因[9]，卵巢癌的侵袭转移是卵巢癌和机体之间比较复杂的相互作用过程，涉及卵巢癌细胞的迁移、黏附、生长、免疫逃避等步骤。卵巢癌的发病机制尚不清楚，探讨其发病机制对卵巢癌的诊治具有重要意义。卵巢癌的发生、发展与抑癌基因和癌基因的变化有关，癌基因在卵巢癌的发病过程中发挥重要作用，一个等位基因的变化可以引起癌基因的激活，两个等位基因的改变能够使抑癌基因失活，和卵巢癌相关的抑癌基因有很多种。癌超甲基化基因1含有3个外显子，是一种抑癌基因，在各种组织中广泛存在[10-11]，在乳腺癌、结肠癌等癌症中表达下降，癌超甲基化基因1的启动子甲基化能够抑制其转录，并能够抑制P53,活化SIRT1，促进肿瘤的发生、发展。在卵巢癌组织中，癌超甲基化基因1存在异常甲基化，其发生率高于正常卵巢组织，低分化卵巢癌中的癌超甲基化基因1甲基化发生率高于中分化和高分化卵巢癌[12-13]。卵巢癌基因1含有12个内含子和13个外显子，是一种抑癌基因，在所有正常组织中有表达，能够调节细胞的增殖分化及肿瘤的发生和胚胎的发育[14]。卵巢癌和17号染色体短臂上杂合性丢失有关，17号染色体上可能存在和卵巢癌有关的基因，卵巢癌基因1是位于17号染色体的抑癌基因，其表达下调能够影响白喉酰胺的合成，感染蛋白的合成，和卵巢癌的发生有关[15]。

本研究以现：卵巢癌组织中癌超甲基化基因1蛋白、卵巢癌基因1蛋白的表达量明显低于正常卵巢组织。癌超甲基化基因1蛋白在不同卵巢癌分期、不同分化程度和不同病理类型中的表达量比较差异均无统计学意义(P>0.05)。在卵巢癌Ⅰ期中卵巢癌基因1蛋白的表达量高于卵巢癌Ⅱ期和Ⅲ～Ⅳ期，Ⅱ期中的表达量高于Ⅲ～Ⅳ期；高分化的表达量高于中分化和低分化，中分化和低分化比较差异无统计学意义(P>0.05);卵巢癌基因1蛋白在卵巢癌不同病理类型中的表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。卵巢癌组织中癌超甲基化基因1蛋白表达降低可能和癌超甲基化基因1蛋白失活，使其转录沉默，也可能和癌超甲基化基因1蛋白启动子异常甲基化有关，癌超甲基化基因1蛋白的表达量和卵巢癌的临床分期、分化程度和病理类型无关，表明癌超甲基化基因1蛋白失活可能只参与卵巢癌的发生。卵巢癌基因1蛋白的表达量和卵巢癌的临床分期和分化程度有关，临床分期越高，卵巢癌基因1蛋白的表达量也越高；卵巢癌的分化程度越高，卵巢癌基因1蛋白的表达量越高，表明卵巢癌基因1蛋白和卵巢癌的发展有一定关系。

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Expression and significance of hypermethylation in cancer 1 protein and ovarian cancer gene 1 protein in ovarian cancer tissue*

ZhangWenzhu,WeiZhentong△

(DepartmentofObstetricsandGynecology,theFirstHospitalofJilinUniversity,Changchun,Jilin130021,China)

Objective To study the expression of hypermethylated gene 1 protein and ovarian cancer gene 1 protein in ovarian cancer and its relationship with the pathological features of ovarian cancer,and to explore its significance in ovarian cancer.Methods Sixty-three cases of ovarian cancer specimens and 63 cases of normal ovarian tissue were taken from January 2014 to December 2015 at the First Hospital of Jilin University.Western blot was used to detect the expression of hypermethylated gene 1 protein and ovarian cancer gene 1 protein in ovarian cancer tissues and normal ovarian tissues,and to analyze the relationship between the expression of two proteins and ovarian cancer.Results The expression of hypermethylated gene 1 protein and ovarian cancer gene 1 protein in ovarian cancer tissues were significantly lower than that in normal ovarian tissues (P<0.05).There was no significant difference in the expression of hypermethylated gene 1 protein in different staging,different degree of differentiation and different pathological types in ovarian cancer (P>0.05).The expression of ovarian cancer gene 1 protein in ovarian cancer stage Ⅰ was higher than that in stage Ⅱand Ⅲ-Ⅳ (P<0.05).The expression of ovarian cancer gene 1 protein in ovarian cancer stage Ⅱ was higher than that in stage Ⅲ-Ⅳ (P<0.05).The expression of ovarian cancer gene 1 protein in high differentiation of ovarian cancer was significantly higher than that in moderately differentiated and poorly differentiated (P<0.05).There was no significant difference between ovarian cancer gene 1 protein expression and poorly differentiated ovarian cancer (P>0.05).There was no significant difference in the expression of ovarian cancer gene 1 protein in different pathological types of ovarian cancer (P>0.05).Conclusion Hypermethylatel gene,protein participate in the occurrence of ovarian cancer,the ovarian cancer gene 1 protein is only related to ovarian cancer clinical stage and degree of differentiation.

ovarian neoplasms;hypermethylation in cancer 1;ovarian cancer gene 1

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.11.007

吉林省教育厅项目(2015-503)；吉林省科技厅项目(20140520032JH)。 作者简介：张文竹(1991-)，在读硕士，主要从事妇科肿瘤研究。△

，E-mail:zhentongwei2009@163.com。

R711.75

A

1671-8348(2017)11-1466-03

2016-10-27

2017-01-13)