电化学发光法与时间分辨荧光免疫法检测AFP的临床应用

邬登敏，陈启红，柳兵，曾同祥

长江大学第二临床医学院 荆州市中心医院皮肤科，湖北 荆州 434023

电化学发光法与时间分辨荧光免疫法检测AFP的临床应用

邬登敏，陈启红，柳兵，曾同祥

长江大学第二临床医学院 荆州市中心医院皮肤科，湖北 荆州 434023

目的：分析电化学发光法(ECLIA)与时间分辨荧光免疫法(TRFIA)检测AFP的临床应用。方法： 釆用ECLIA和TRFIA两种方法同时检测5组血清甲胎蛋白(AFP)含量，其中肝癌120例，胃癌48例，乳腺癌32例，卵巢癌45例；健康人群50例。观察两者的准确率、稳定性、线性范围与相关性回归分析。结果：肝癌组AFP值(ECLIA法: 520.36±354.26ng/mL;TRFIA 法: 558.48±360.27ng/mL)，胃癌组(ECLIA法:15.38±2.34ng/mL;TRFIA法: 18.63±1.42ng/mL)，乳腺癌组(ECLIA法:10.35±3.51ng/mL;TRFIA法: 18.63±1.42ng/mL),卵巢癌组(TRFIA法:11.81±4.36ng/mL;ECLIA法:13.53±2.96ng/mL)。正常组(ECLIA法:6.32±5.14ng/mL；TRFIA法:6.51±5.42ng/mL)，两种方法检测结果无显著差异(P>0.05),其相关系数为0.992,呈正相关。ECLIA法与TRFIA法批内批间变异系数分别低于2.9%和5.7%,前者优于后者。结论： TRFIA法和ECLIA法检测AFP具有较好的准确率、稳定性及相关性,可应用于临床血清AFP的检测。

电化学发光法； 时间分辨荧光免疫法； 甲胎蛋白

本研究通过TRFIA法和ECLIA法检测不同肿瘤患者血清AFP含量，并对结果进行统计分析，旨在进一步了解TRFIA法和ECLIA法的应用特点及对各类良、恶性肿瘤AFP测定值的影响。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 标本来源

各类良、恶性肿瘤标本共245例,其中原发性肝癌120例,胃癌48例，乳腺癌32例,卵巢癌45例；健康对照组50例。均为2015年7月至2016年7月在我院住院与体检人群,年龄和性别无统计学差异,符合美国癌症联合会 (AJCC2002＇6th)提出的恶性肿瘤TNM的临床诊断与分期指标。

采集标本均为晨起空腹静脉血3mL，并于2h内分离血清，置-70℃冰箱保存备用。

1.2 仪器与试剂

上海新波生物技术公司ANYTEST2000时间分辨荧光测定仪及配套试剂，美国雅培公司i2000SR全自动微粒子化学发光免疫分析仪及配套试剂。

1.3 实验方法

实验操作过程均严格按照试剂盒说明书和仪器操作规程进行。AFP≤20ng/mL为阴性，AFP>20ng/mL为阳性。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 ECLIA与TRFIA法测定AFP值

用ECLIA和TRFIA两种方法同时检测5组血清甲胎蛋白(AFP)含量数值，见表1。

表1 ECLIA与TRFIA法检测AFP含量结果比较

注：与同组ECLIA法测定平均值比较，*P>0.05；与健康对照组比较，#P<0.01。

2.2 线性试验

将AFP测定值在(500～520)ng/mL范围内的5份血清混合，重复测定5次取平均值。将混合血清6点倍比稀释，重复测定3次，以平均值为标准计算理论值，再根据理论值的稀释倍数与6种浓度血清实际测定值作对比，进行线性回归分析。ECLIA法回归方程为：Y= 0.9903X-3.7131,r2=0.9998；TRFIA法回归方程为：Y=1.0171X-0.2211,r2=0.9946。

ECLIA法在(0～1000)ng/mL范围内线性良好，TRFIA法在(2.85～680)ng/mL范围内线性良好。ECLIA法比TRFIA法具有更宽的检测范围。

2.3 相关性分析

图1 ECLIA法与TRFIA法相关性回归分析

两种方法测得结果取平均数比较(配对t检验)无差异性(P>0.05)；两种方法回归分析，以ECLIA结果为自变量X，以TRFIA结果为因变量Y,计算相关系数和回归方程，直线回归方程为Y=0.9891X+1.5623,r2=0.992，两者呈显著正相关。见图1。

2.4 精密度试验

表2 ECLIA与TRFIA法重复检测AFP标准品结果比较

3 讨论

甲胎蛋白由胚胎肝、卵黄囊和胃肠上皮细胞产生,成人的甲胎蛋白由肝脏产生，是单链多肽糖蛋白，在血清中的半衰期为3.5～6d。肝细胞癌、卵黄囊和胚胎性肿瘤及部分肝外肿瘤可重新合成甲胎蛋白，在妊娠早期胎儿血清中浓度很高，出生后6个月～1年可降至健康成人水平。以后在没有疾病的情况下，终身将维持低水平。但在细胞恶变过程中，某些细胞基因被重新激活，细胞重新开始合成AFP，以致其含量在肿瘤患者体内明显增加，故测定血清AFP浓度对各相应恶性肿瘤的早期诊断和治疗监测具有重要参考价值[1]。

时间分辨荧光免疫测定的基本原理是以镧系元素铕(Eu)螯合物作为荧光标记物，利用这类荧光物质寿命长的特点，延长荧光测量时间，待短寿命的自然本底荧光完全衰退后再行测定。所得信号完全为长寿命的镧系螯合物的荧光，从而有效排除非特异性本底荧光的干扰而提高灵敏度[2]。

另外TRFIA的线性范围宽，也是因为TRFIA采用铕离子(Eu3+)作为标记物。由于铕离子(Eu3+)发光信号具有宽线性，同时采用独特的荧光解离增强技术，有非常优良的可检测性，大大提高了TRFIA的检测线性[3]。

TRFIA与传统的方法相比较，具有灵敏度高、操作简便、示踪物稳定、标准曲线范围宽、不受样品自然荧光干扰、无放射性污染、标记物储存时间长的优点[4，5]。TRFIA法也有其缺点，如果一次实验的标准没做好，这批的结果可能都会受影响，甚至完全出不了结果。TRFIA法更适合大批量标本检测[6]。

ECLIA法是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，包括电化学和化学发光两个过程，可对反应进行精确控制，能对各种物质进行快速分析，是目前最先进的标记免疫检测技术[7]。采用电促化学发光，使用非同位素金属三联吡啶钌作为标记物，但电极激发在三丙胺的参与下迅速稳定发光，使得检测结果稳定可靠，磁性微珠包被技术的应用提高了检测的灵敏度[8]。

电化学发光免疫法检测采用磁性微珠包被技术，由于微珠体积小可以吸附更多的抗原或抗体，同时磁珠的核心是铁，在磁场中很快下沉，因此容易进行洗涤和固相载体分离[9]。发光信号检测的宽线性加上独特的标记物本身循环发光，使电化学发光检测的线性范围更宽。

试剂稳定性好、有效期长，是由于同位素金属三联吡啶钌在自然环境下非常稳定，因此用它标记的试剂也非常稳定[10]。但检测仪器试剂大多需进口，成本昂贵。

本研究釆用两种方法同时检测4种不同肿瘤患者血清AFP含量，对比检测结果无显著差异(P>0．05)，其相关系数为r2=0.992，结果呈正相关。重复试验ECLIA法和TRFIA法批内批间变异系数CV%均≤6% ，两种方法略有不同。电化学发光免疫法检测结果的稳定性、灵敏度、精密度均优于时间分辨荧光免疫法，两种仪器在临床中可结合实际需要同时或交替使用。

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[编辑] 何勇

2016-12-05

邬登敏(1984-)，女，检验师，主要从事临床检验诊断工作，794948832@qq.com。

R730.23

A

1673-1409(2017)08-0044-03

[引著格式]邬登敏，陈启红，柳兵，等.电化学发光法与时间分辨荧光免疫法检测AFP的临床应用[J].长江大学学报(自科版) ,2017,14(8):44～46.