一种处理脂血标本的脂蛋白脂肪酶方法

崔晓蕾 位冒冒

一种处理脂血标本的脂蛋白脂肪酶方法

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目的 探讨脂蛋白脂肪酶处理脂血标本的效果，及其对关键生化指标的影响。方法 分别向健康人混合血清（A组）中加入一定比例脂肪乳，制备成轻（B组）、中（C组）、重（D组）度脂血标本，使用脂蛋白脂肪酶（LPL）处理4组标本，测定各组标本7项生化指标（TG、AST、ALT、TP、TBil、LDH、CK-MB），比较组间和脂肪酶处理前后差异；并用临床高脂血症患者（E组）混合血清验证该方法。结果 脂肪乳会干扰C组和D组的生化指标检测，与A组比较差异有统计学意义（P＜0. 05）；C组与D组经LPL处理后，除TG外生化指标均较直接测定组降低（P＜0.05）；LPL对D组的处理效果明显优于生理盐水稀释法（P＜0.05）；LPL使E组脂血标本处理前后检测结果的差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 脂蛋白脂肪酶处理脂血标本，能有效消除脂血对标本生化指标的干扰，且不影响甘油三酯的测定，是一种简单有效的脂血标本处理方法。

脂蛋白脂肪酶 脂血 甘油三酯

脂血主要是由血清中乳糜微粒增多和甘油三酯升高引起，可影响光的透射和散射，从而对利用比色法和比浊法原理进行检测的项目产生严重干扰，导致检验结果准确性降低，是日常生化检验工作中最常见的标本影响因素之一[1]。目前，针对消除脂血干扰的方法主要有沉淀法、有机溶剂提取法、高速离心法和盐水稀释法等，但这些处理方法均不能完全解决脂血对检验结果的干扰问题。脂蛋白脂肪酶（lipoprotein lipase，LPL）是参与体内脂质和脂蛋白代谢的主要成分之一，能催化血清乳糜微粒（CM）和极低密度脂蛋白（VLDL）中的甘油三酯（TG）分解，有报道该酶活性的降低可引起高脂血症[2]。故此本实验在前期研究基础上，应用脂蛋白脂肪酶前处理脂血标本，观察对脂血标本的处理效果及其对标本其他关键生化指标的影响，尝试建立一种简单可行的处理脂血方法。

材料与方法

1 标本来源 随机选取本院健康体检者60例，其中男性34例，女性26例；年龄26～65岁，平均年龄46岁。另随机选取本院高脂血症（Ⅰ型）患者60例，其中男性27例，女性33例；年龄38～69岁，平均年龄53岁；患者于采血前3 d内未服任何降脂药物。研究对象均禁食12 h取清晨静脉血3 ml，4 000 r/min离心15 min留取血清，标本要求无溶血、黄疸，将上述血清标本充分混合，备用。

2 仪器与试剂 Olymus AU2700型全自动生化分析仪及相关配套试剂，脂蛋白脂肪酶（≥2 000 U/ L）购自北京博艾尔科技有限公司，甘油三酯（脂肪乳注射液，主要成分：精制大豆油100 g、甘油25 g、卵磷脂12 g，加水至1 000 ml）购自华瑞制药有限公司。

3 脂血模型制备和标本分组 全部健康体检者混合血清外观清亮，为正常对照组（A组）。取A组血清，等分为4份，其中3份分别加入与血清体积比为1∶100、1∶30、1∶20的脂肪乳，充分混匀后制成血清外观为轻度混浊（B组）、中度混浊（C组）和重度混浊（D组）。高脂血症患者混合血清外观混浊（E组）。留取以上各组血清备用。

4 脂肪乳对正常血清标本的影响 对Olymus AU2700型全自动生化分析仪进行定标和校准，分别测定4组血清的TG值和生化指标AST、ALT、 TP、TBil、LDH、CK-MB，根据加入脂肪乳体积换算最终结果，每项结果重复测量3次。

5 LPL对各组血清标本的影响 脂蛋白脂肪酶试剂（0.5 mg/ml）分别与各组血清以1∶50混合，充分混匀，置37℃水浴30 min；再分别测定各组血清的TG、AST、ALT、TP、TBil、LDH、CKMB，根据加入脂肪乳体积换算最终结果，每项结果重复测量3次。通过比较LPL处理组与直接测定组，观察脂蛋白脂肪酶对各组血清标本生化指标测定的影响。

6 LPL酶解法与生理盐水稀释法处理血清标本的效果比较 观察D组内LPL法与生理盐水（NS）稀释法处理血清的效果，比较两法消除脂血干扰的情况。生理盐水稀释法是血清标本与生理盐水以1∶9混合[3]。每项结果重复测量3次，所测定的结果需根据稀释倍数进行换算。

7 LPL酶解法对患者脂血标本的影响 通过测定LPL酶解法对脂血标本（E组）各项指标的影响，观察LPL酶解法在实际检验工作中的应用，每项结果重复测量3次。

8 统计学处理 应用SPPS 22.0软件，定量数据用±s表示，采用独立样本t检验进行组间比较，P＜0.05表示差异有统计学意义。

结 果

1 脂肪乳对正常血清标本的影响 在健康人混合血清标本中，B组的各项指标几乎不受脂血的影响，与A组比较差异无统计学意义（P＞0.05）； C组的各项指标结果与A组相比均有一定程度的升高，差异有统计学意义（P＜0.05）；D组的各项指标表明，血清中较高浓度的TG会严重干扰其他生化指标，与A组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）（见表1）。

2 LPL对各组血清标本的影响 各组血清经过LPL的处理，B组、C组和D组血清肉眼外观由浑浊变得清亮，处理前后各组TG水平的差异无统计学意义（P＞0.05）。除TG外，A组与B组血清的其他生化指标均无明显变化（P＞0.05），表明LPL并不会影响正常血清标本生化指标，能够保持整个反应体系的稳定。C组与D组血清经LPL处理后，其他各项指标均较各自组内直接测定值降低（P＜0.05），与A组处理或未处理血清相比差异均无统计学意义（P＞0.05），提示LPL可较好地消除脂血对标本生化指标的干扰（见表1）。

3 LPL酶解法与生理盐水稀释法的效果比较 LPL酶解法与生理盐水稀释法处理D组血清，生理盐水稀释法与直接测定法测定指标的差异有统计学意义（P＜0.05）；生理盐水稀释法与LPL酶解法的差异也有统计学意义（P＜0. 05）（见表1）。

4 LPL酶解法对脂血标本的影响 LPL处理与直接测定法相比，TG的差异无统计学意义（P＞0.05），而其他各项指标均出现一定变化（P＜0.05）。表明LPL酶解法处理实际检验工作中的脂血标本，能一定程度上降低脂血对检测指标的干扰（见表2）。

表2 LPL酶解法对高脂血标本（E组）的影响

讨 论

随着我国步入老龄化社会以及人们生活水平的不断提高，高脂血症人群日益增多；另外，以静脉注射脂肪乳维持营养的患者也逐年增加。因此脂血标本在生化检验工作中越来越常见。脂血标本中存在大量的CM和VLDL悬浮颗粒，主要成分是甘油三酯，这些悬浮颗粒通过影响光的透射和散射，对生化检验的许多指标造成一定干扰，导致结果的准确性下降。

随着生化仪器性能的提高和检验方法学的进步，已经可以使用双波长的方法排除轻、中度脂血对检测指标的影响，但重度脂血仍会对检验结果产生严重干扰[4]。因此，简单有效的去干扰方法对生化检验工作具有重要意义。消除脂血干扰的方法主要有沉淀法[5，6]、有机溶剂提取法[7]、高速离心法[8]和盐水稀释法[3]等，这些方法都是根据脂血标本的不同特性设计的，存在各自的优缺点。沉淀法是利用磷钨酸镁试剂和聚乙二醇-硫酸葡聚糖试剂，结合血清中乳糜微粒形成沉淀，使ALT、AST、ALP等指标得到明显纠正，但是标本的体积被放大了4倍，且未对实验误差进行评估。有机溶剂提取法是利用乙醚、氯仿等，直接与血清混合，提取脂血标本中的TG成分，对ALT、AST、TP、Cr等指标效果较好，但乙醚会干扰血清中的成分，特别是对血清中酶的活性产生严重干扰。高速离心法是利用脂血标本成分的沉降系数不同而进行物理分离的方法，方便快速，然而设备价格昂贵，无法普及。盐水稀释法将生理盐水与标本按一定比例稀释后测定，整个反应体系能保持稳定，脂血的浊度会明显改善，即TG浓度降低，对其他指标的干扰相对减弱。但该方法仍不能完全消除脂血的干扰，一方面会放大实验误差，另一方面可能会使其他指标被稀释后的浓度超出各自的线性范围。

脂蛋白脂肪酶（lipoprotein lipase，LPL）是由脂肪细胞、心肌细胞和骨骼肌细胞等实质细胞的粗面内质网合成的一种糖蛋白，含3%～ 8%碳水化合物，是参与体内脂质和脂蛋白代谢的关键酶。LPL主要催化血清CM和VLDL中的TG分解，生成脂肪酸和甘油两种代谢产物。本实验在前期研究基础上，根据LPL分解TG特性，选取TG、AST、ALT、TP、TBil、LDH、CK-MB这7个指标，从新的角度观察LPL处理脂血标本的效果。结果显示，在健康人血清标本中加入甘油三酯替代品脂肪乳后，中、重度浑浊的脂血均出现生化检测结果升高，提示中、重度脂血均可影响生化指标的测定。C组和D组经LPL处理后，生化指标与A组对照，差异无统计学意义（P＞0.05），提示LPL不仅有良好的除脂效果，还能够基本保持整个反应体系的稳定性。与生理盐水稀释法相比，LPL对重度脂血标本的处理效果优于生理盐水稀释法，这可能与生理盐水稀释标本放大误差，及其本身无法彻底消除重度脂血的影响有关。LPL酶解法对患者脂血标本的影响结果显示，LPL分解TG的方法可能在生化检验的实际工作中有一定的应用价值，在不影响TG检测的前提下，能排除高脂血对其他生化指标检测的干扰。从使用酶法测定TG的检测原理分析，因为LPL分解TG后生成甘油，并不影响TG指标的后续反应及测定TG的分解产物[9]。因此应用LPL方法处理标本，并不会影响标本中TG指标的测定结果，此点优于其他脂血处理方法。

综上所述，LPL通过分解脂血标本中的TG成分，同时消除脂血对部分生化指标检测造成的影响，保证了整个反应体系基本稳定[10]。但是血清标本成分十分复杂，LPL对更多生化指标的影响需要进一步验证。

1 彭华，戴盛明. 高脂血标本对临床检验项目的干扰及消除[J]. 国际检验医学杂志，2010，31（10）：1140-1142.

2 Fujita K，Maeda N，Kozawa J，et al .A case of adolescent hyperlipoproteinemia with xanthoma and acute pancreatitis，associated with decreased activities of lipoprotein lipase and hepatic triglyceride lipase[J]. Intern Medicine，2010，49（22）：2467-2472.

3 张蕴秀，石育英，盛惠光，等. 稀释法消除血脂对生化检测结果干扰的效果评价[J]. 武警医学，2012，23（4）：281-283.

4 董立杰. 标本脂血对临床生化检测结果的评估及其对策[J]. 实用医技杂志，2010，17（4）：344-346.

5 熊俊，石文静，闪全忠. 磷钨酸-镁-PEG法消除脂血干扰的方法学评估[J]. 现代检验医学杂志，2008，23（1）：50-52.

6 刘万彬，隆维东. 聚乙二醇4000处理脂血后对生化结果的影响[J]. 国际检验医学杂志，2012，33（4）：504-506.

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8 张帆.高速离心对临床常规生化项目测定结果的影响[J].国际检验医学杂志，2010，31（8）：887-888.

9 Jun JC，Shin MK，Yao Q，et al. Acute hypoxia induces hypertriglyceridemia by decreasing plasma triglyceride clearance in mice[J]. Am J Physiol Endocrinol Metab，2012，303（3）：377-388.

10 Shirakawa T，Nakajima K，Yatsuzuka SI，et al.The role of circulating lipoprotein lipase and adiponectin on the particle size of remnant lipoproteins in patients with diabetes mellitus and metabolic syndrome[J]. Clinica Chimica Acta，2015，440（2）：123-132.

Lipoprotein Lipase Treatment Effect on Biochemical Indicators of Lipemia Samples

CUI Xiao-lei，WEI Mao-mao.
Department of Quality Control，Anyang Blood Center 455000

Objective To explore the effects of lipoprotein lipase on biochemical indicators in lipemia samples. Methods Simulated low，moderate and high lipemia were made by adding the triglyceride into normal sera, TG，AST，ALT，TP，TBil，LDH and CK-MB were detected following lipoprotein lipase treatments. Results No significant difference was seen between the samples of lipoprotein lipase treatments and the sera control（P＞0.05）. The method of lipoprotein lipase treatment was better than that of normal saline dilution in detection of severe lipemia（P＜0.05）. lipoprotein lipase treatment showed a potential in practical detection of severe lipemia （P＜0.05）. Conclusion Lipoprotein lipase treatment benefits to reducing the interference of lipemia but has not obvious impact on triglyceride in serum detection.

Lipoprotein lipase Lipemia Triglyceride

R446.1

A

1671-2587（2017）02-0154-04

2016-09-20）

（本文编辑：王虹）

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.02.018

455000 河南省安阳市中心血站质控科（崔晓蕾）；河南省安阳市人民医院检验科（位冒冒）

崔晓蕾（1983–），女，河南安阳人，主管技师，学士，主要从事临床生化检验工作，（Tel）13569076866。

位冒冒，男，主管技师，学士 ，主要从事临床生化研究工作，（E-mail)707443664@qq.com。