凉山州引进油橄榄品种初榨油品质分析

苏光灿++何兴莉++邓龙++向春蓉++刘捷

摘要 采用高效液相色谱法对凉山州引进油橄榄品种初榨油的多酚含量、α-生育酚含量、甾醇含量进行分析，采用气相色谱-质谱法（GC-MS）对橄榄油脂肪酸组成进行分析。结果表明：凉山州引进油橄榄品种初榨油的4种多酚类化合物含量均较高，分别为没食子酸2.76 μg/g、羟基酪醇1.69 μg/g、儿茶素0.19 μg/g和阿魏酸1.43 μg/g；α-生育酚、豆甾醇、β-谷甾醇的含量分别为166.39、492.03、822.90 μg/g；棕榈酸、硬脂酸、油酸和亚油酸的相对含量分别为15.50%±0.17%、1.70%±0.09%、63.70%±0.78%和9.20%±0.71%。凉山州引进油橄榄初榨油具有较好的品质，达到了优质保健型食用油的标准，值得推广食用。

关键词 油橄榄；引进品种；初榨油；品质分析；四川凉山

中图分类号 TS221 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）24-0262-02

油橄榄（Olea europaea L.）是木犀科木犀榄属常绿乔木，为世界著名油料作物，原产地中海沿岸国家[1]。橄榄油是用适当的机械方法从油橄榄鲜果中提取出来的油脂。初榨橄榄油富含不饱和脂肪酸、角鲨烯、多酚以及维生素，具有抗氧化、调节胆固醇、预防癌症和心血管疾病、美容等功效，利于促进幼儿骨骼和神经系统发育[2-3]。

多酚类化合物是一类活性较强的抗氧化物质，其中生育酚具有抗不孕、抗氧化等生理功能，在多种异构体中，α-生育酚的生理活性和抗氧化能力最强[4-6]。天然甾醇是一种存在于植物中的天然活性物质，对人类无毒副作用，具有降血糖、降胆固醇等功能[7]。脂肪酸组成是橄榄油的重要特征指标，具有较好的抗氧化稳定性。本试验以凉山州引进油橄榄品种的初榨油为研究对象，从多酚含量、生育酚含量、甾醇含量、脂肪酸组成4个方面进行分析，以了解凉山州引进油橄榄品种初榨油的品质特性。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 原料与试剂。初榨橄榄油由凉山州中泽新技术开发有限责任公司提供；甲醇（用于提取）、正己烷、正己烷（含0.01%BHT）、去离子水（含0.5%冰醋酸）、KOH-95%乙醇溶液、饱和氯化钠溶液、石油醚、1 mol/L KOH-甲醇溶液、无水碳酸钠、硝酸、过氧化氢、1%硝酸为分析纯；甲醇（用于流动相）、异丙醇为HPLC级。

1.1.2 仪器与设备。Agilent1260型高效液相色谱系统（美国Agilent公司）；真空旋转蒸发仪；微量移液枪；电子天平；空心阴极灯，AS-I·Pb-SR；原子吸收分光光度计（AA-6880系列，日本Shimadzu公司）；气相色谱质谱仪，GCMS-QP2010配有Aoc-20i进样器，日本Shimadzu公司。

1.2 试验方法

1.2.1 多酚含量的测定。包括色谱条件、标准品溶液的制备、样品溶液的制备3个步骤。

（1）色谱条件。色谱柱：ZORBAX SB-C18柱（4.6×150 mm，5.0 μm）；DAD检测器；检测波长、柱温、流量分别为280 nm、35 ℃、1.0 mL/min；流动相：A、B、C分别为0.5%乙酸、甲醇、异丙醇；梯度洗脱顺序：0～14 min，92%A，4%B，4%C；14～30 min，82%～92%A，4%～9%B，4%～9%C（表1）。

（2）标准品溶液的制备。分别称取适量的没食子酸、羟基酪醇、儿茶素、阿魏酸加入甲醇溶解，定容于25 mL容量瓶中得标准品溶液。分別吸取一定量的标准品溶液配制成混合标准品溶液。将该混合标准品溶液稀释2.5、5、10、15、20倍，经0.45 μm微孔滤膜过滤，按上述色谱条件进样分析。

（3）样品溶液的制备。称取20.0 g橄榄油样品置于具塞锥形瓶中，加入50 mL正己烷充分振摇3 min，加入20 mL 60%甲醇充分振摇5 min，再于125 mL分液漏斗中静置20 min，收集下层滤液于旋转蒸发仪中40 ℃浓缩，加甲醇定容至3 mL得试样溶液，经0.45 μm微孔滤膜过滤，进样20 μL进行HPLC分析。进行3次重复。采用标准曲线法，根据HPLC色谱图峰面积及标准曲线方程求其含量。

1.2.2 α-生育酚含量的测定。包括色谱条件、标准品溶液的制备、样品溶液的制备3个步骤。

（1）色谱条件。色谱柱：ZORBAX SB-C18柱（4.6×150 mm，5.0 μm）；DAD检测器；检测波长、柱温、流量分别为295 nm、35 ℃、1.0 mL/min；流动相为100%甲醇。

（2）标准品溶液的制备。称取α-生育酚标准品，加入正己烷溶解，定容于25 mL容量瓶中得标准品溶液，依次稀释2.5、5、10、15、20倍，经0.45 μm微孔滤膜过滤，按上述色谱条件进样分析。

（3）样品溶液的制备。称取1 g橄榄油样溶于5 mL正己烷中，经0.45 μm微孔滤膜过滤后进样分析，进行3次重复试验。采用标准曲线法进行定量分析，根据HPLC色谱图峰面积及标准曲线方程求其含量。

1.2.3 豆甾醇、β-谷甾醇含量的测定。包括色谱条件、标准品溶液的制备、样品皂化处理、HPLC分析4个步骤。

（1）色谱条件。色谱柱：ZORBAX SB-C18柱（4.6×150 mm，5.0 μm）；DAD检测器检测波长、柱温、流量分别为210 nm、50 ℃、1.0 mL/min；流动相：A为98.5%甲醇，B为1.5%去离子水。

（2）标准品溶液的制备。称取适量豆甾醇标准品与β-谷甾醇标准品溶于异丙醇中得混合标准品溶液，依次稀释2、4、6、8、10、12、14倍，经0.45 μm微孔滤膜过滤，按上述色谱条件进样分析。

（3）样品皂化处理。称取2 g橄榄油样加入5 mL KOH-95%乙醇溶液80 ℃水浴皂化1 h，皂化液冷却至室温，加饱和氯化钠水溶液25 mL，移至分液漏斗分3次用石油醚30 mL提取，合并石油醚提取液，蒸馏水25 mL多次洗石油醚至中性，石油醚层用无水硫酸钠脱水过滤，滤液70 ℃旋转蒸发至近干，残渣用无水乙醇定容至5 mL待HPLC分析。

（4）HPLC分析。将溶液混匀，经0.45 μm微孔滤膜过滤后HPLC分析，进行3次重复试验。采用标准曲线法进行定量，根据HPLC色谱图峰面积及标准曲线方程求其含量。

1.2.4 脂肪酸组成的测定。包括甲酯化预处理、GC-MS分析2个步骤。

（1）甲酯化预处理。移取50 μL橄榄油于试管中，加入4.5 mL正己烷溶解，再加入4.5 ml 1 mol/L的KOH-甲醇溶液，混匀后静置10 min，待分层，取上清液，无水碳酸钠过滤除水，待GC-MS分析。

（2）GC-MS分析。色谱柱：Rtx-wax（30 m×0.25 mm ID，0.25 umdf）；GC：柱箱温度60 ℃，进样口温度245 ℃，分流比1∶10；升温程序：60 ℃持续5 min；150 ℃持续1.0 min，230 ℃持续7 min；MS：离子源温度230 ℃，接口温度245 ℃；质谱扫描范围45～550 m/z。取上清液过0.22 μm微孔滤膜后GC-MS分析。进行3次重复试验。

2 结果与分析

2.1 多酚含量

在本试验的色谱条件下，标准品中的没食子酸、羟基酪醇、儿茶素、阿魏酸均能较好的分离，且峰型较好。没食子酸、羟基酪醇、儿茶素、阿魏酸的质量浓度分别为5.87、11.99、99.88、4.25 μg/mL，以峰面积（mAU）为纵坐标，4种多酚类化合物的含量（μg/g）为横坐标进行线性回归，得其线性方程和相关系数（表2），各物质的峰面积和浓度之间呈良好的线性关系。经计算，橄榄油样品中没食子酸、羟基酪醇、儿茶素、阿魏酸的含量分别为2.76、1.69 、0.19、1.43 μg/g。结果表明，样品橄榄油中没食子酸含量最高，儿茶素含量最低。

2.2 α-生育酚含量

α-生育酚标准品的质量浓度为1.61 μg/mL，在本试验的色谱条件下峰型较好。以峰面积（mAU）为纵坐标，含量（μg）为横坐标进行线性回归，得α-生育酚的线性方程为y=268.51x-13.01，相关系数R2=0.999 9，峰面积和含量之间呈正相关，线性关系良好。计算3次进样测定的α-生育酚的峰面积平均值为165.70 mAU，根据上述线性方程计算得橄榄油样品中α-生育酚的含量为166.39 μg/g。

2.3 豆甾醇和β-谷甾醇含量

在混合标准品溶液中，甾醇类化合物的质量浓度分别为豆甾醇1 170.68 μg/mL、β-谷甾醇890.36 μg/mL，以峰面积（mAU）为纵坐标，甾醇类化合物的含量（μg/g）为横坐标进行线性回归，得甾醇类化合物的线性方程和相关系数具体见表3，得出各物质的峰面积和浓度之间呈良好的线性关系。

经计算，3次进样测定的样品橄榄油中，豆甾醇和β-谷甾醇的峰面积平均值为1 138.92 mAU和817.57 mAU，根据表3中线性方程计算得橄榄油样品中甾醇类化合物的含量分别为豆甾醇492.03 μg/g，β-谷甾醇822.90 μg/g。

2.4 脂肪酸組成

利用GC-MS技术，对样品橄榄油的脂肪酸组成进行分析，计算各成分的相对含量（表4）。结果表明，样品橄榄油主要由10种脂肪酸组成，其中相对含量较高的4种脂肪酸分别是棕榈酸（15.5%±0.17%）、硬脂酸（1.7%±0.09%）、油酸（63.7%±0.78%）和亚油酸（9.2%±0.71%），10种脂肪酸的相对含量均在国际橄榄油理事会制定的标准范围内。

3 结论与讨论

本研究的试验结果表明，凉山州引进油橄榄初榨油的4种多酚类物质（没食子酸、羟基酪醇、儿茶素、阿魏酸）、α-生育酚、豆甾醇和β-谷甾醇的含量均较高；样品橄榄油主要由10种脂肪酸组成，其相对含量均在国际橄榄油理事会制定的标准范围内，其中亚油酸含量为9.20%，超过了世界卫生组织（WHO）对保健型营养油脂的亚油酸含量8.00%[8]。因此，凉山州引进油橄榄初榨油具有较好的品质，达到了优质保健型食用油的标准，值得推广食用。

4 参考文献

[1] 邓明全，俞宁.油橄榄引种栽培技术[M].北京：中国农业出版社，2011.

[2] 邢立民.橄榄油的加工技术与开发利用研究[J].内蒙古科技与经济，2008（4）：82-83.

[3] 钟诚，王兴国，金青哲，等.国内初榨橄榄油品质特性研究[J].中国油脂，2013，38（10）：35-38.

[4] 张彩丽，贺学礼.天然生育酚的结构、生物合成和功能[J].生物学杂志，2005，22（4）：38-40.

[5] ANGELO A，ACHIM S.Vitamin E：non-antioxidant roles[J].Progress in Lipid Research，2000，39：231-255.

[6] 胡传荣，谷文英.高d-α-生育酚的研制[J].中国油脂，2003，28（11）：45-47.

[7] 赵国志，刘喜亮，刘智锋.植物甾醇及其产品开发利用[J].粮食与油脂，2006（2）：3-6.

[8] 李铎.脂肪酸和脂质与人体健康[J].国际学术动态，2008（5）：12-13.