峨眉黑鸡粪源大肠杆菌的耐药性分析

姚彩霞，廖 娟，谢玉梅，张鑫焱，王 钢

（乐山师范学院，川南地方品种鸡产业化四川省高等学校工程研究中心，四川 乐山 614004）

峨眉黑鸡粪源大肠杆菌的耐药性分析

姚彩霞，廖 娟，谢玉梅，张鑫焱，王 钢*

（乐山师范学院，川南地方品种鸡产业化四川省高等学校工程研究中心，四川 乐山 614004）

为分析峨眉黑鸡粪源大肠杆菌对常用抗菌药物的耐药性，本试验采集峨眉黑鸡直肠拭子样本，分离并鉴定大肠杆菌，采用Kirby-Bauer法对细菌菌株进行18种抗生素的药敏试验。结果表明：峨眉黑鸡粪源大肠杆菌对环丙沙星和复方新诺明具有极强的耐药性，而对诺氟沙星和氯霉素的敏感性较高；峨眉黑鸡粪源大肠杆菌对18种常用抗菌药物具有耐药性的占22.2%，而具有敏感性的占77.7%，其中高度敏感占11.1个百分点，中度敏感占22.2个百分点，低度敏感占44.4个百分点。

峨眉黑鸡；大肠杆菌；药敏试验；耐药性

峨眉黑鸡属兼用型地方品种，原产地及中心产区为四川省峨眉山市。70年代被列入四川地方畜禽品种志。峨眉黑鸡饲养管理粗放，采食性广，适应性强，且具有体大、肉嫩、油多、蛋重等特点，相传古代为纳贡的珍品[1]。近年来，随着峨眉黑鸡的集约化生产和大规模养殖，鸡大肠杆菌病已成为危害其健康的细菌性疾病之一[2]。防治该病主要使用抗生素，但药物的大量和频繁使用，容易导致耐药性增强，同时也破坏鸡肠道菌群平衡。张俊丰[3]、郝永正[4]等对鸡大肠杆菌的耐药性进行了鉴定分析，却少有研究峨眉黑鸡大肠杆菌耐药性的文献报道。因此，本文对峨眉黑鸡粪源大肠杆菌的耐药情况进行了调查分析，为本地区峨眉黑鸡大肠杆菌病的防治提供理论依据。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 试验菌株 试验菌株采集自峨眉山市某养殖基地的峨眉黑鸡直肠拭子。

1.1.2 培养基 麦康凯琼脂、营养琼脂培养基均购自杭州滨和微生物试剂有限公司。

1.1.3 细菌生化鉴定管 肠杆菌科细菌生化编码鉴定管购于杭州滨和微生物试剂有限公司。

1.1.4 药敏纸片 共18种供试药物，包括头孢菌素类4种：头孢唑啉（CEZ）、头孢噻肟（CTX）、头孢曲松（CRO）、头孢哌酮（CFP）；氨基糖苷类5种：庆大霉素（GEN）、卡那霉素（KAN）、链霉素（STR）、阿米卡星（AMK）、妥布霉素（TOB）；氟喹诺酮类4种：诺氟沙星（NOR）、环丙沙星（CIP）、恩诺沙星（ENR）、氧氟沙星（OFL）；酰胺醇类2种：氯霉素（CHL）、氟苯尼考（FFN）；磺胺类：复方新诺明（SXT）；利福霉素类：利福平（RFP）；四环素类：强力霉素（DOX）。以上药敏纸片均购自杭州滨和微生物试剂有限公司。

1.2 方法

1.2.1 细菌的分离与纯化 将无菌采集的峨眉黑鸡直肠拭子置于灭菌的普通营养肉汤中，37℃培养16～18h。用无菌接种环挑取菌液划线接种于麦康凯琼脂平板上，37℃下培养24h，观察菌落的生长情况；挑取单个光滑粉红色菌落再经麦康凯培养基纯培养，革兰氏染色、镜检，观察细菌的形态及染色特性，对分离菌进行初步鉴定；将符合大肠杆菌特点的菌落接种于营养琼脂平板上，37℃下培养24h，4℃冰箱中保存备用。

1.2.2 细菌鉴定 采用肠杆菌科细菌生化编码微量鉴定管进行细菌鉴定[5]，对不确定菌株进一步作生化鉴定予以判断。

1.2.3 药敏试验 采用美国临床和实验室标准协会（CLSI）推荐的Kirby-Bauer法。取已鉴定为大肠杆菌的菌液，采用涂布接种法，将其均匀地涂布于琼脂平板表面，37℃培养18～24h，观察纸片周围有无抑菌圈，并用三线法测量药物纸片的抑菌圈直径（取平均值）。结果判定：抑菌圈直径大于20mm为高度敏感，抑菌圈直径在16～20mm为中度敏感，抑菌圈直径在11～15mm为低度敏感，抑菌圈直径小于10mm为耐药。

2 结果

2.1 细菌的分离与鉴定 菌落在麦康凯平板上的形态为鲜桃红色或微红色、圆形、扁平、边缘整齐、表面光滑、湿润不透明，革兰氏染色后镜检呈红色、两端钝圆、粗短的小杆菌，结果表明所分离的菌株为大肠杆菌。

2.2 药敏试验 18种抗生素的药敏试验结果见表1。

表1 峨眉黑鸡肠道细菌药敏试验结果 mm

药敏试验结果表明，峨眉黑鸡粪源大肠杆菌对环丙沙星和复方新诺明具有极强的耐药性，对四环素类的强力霉素和酰胺醇类的氟苯尼考具有较强的耐药性，而对诺氟沙星和氯霉素的敏感性较高，对头孢唑啉、头孢噻肟、卡那霉素和妥布霉素为中度敏感。峨眉黑鸡粪源大肠杆菌对18种常用抗菌药物具有耐药性的占22.2%，而具有敏感性的占77.7%，其中高度敏感占11.1个百分点，中度敏感占22.2个百分点，低度敏感占44.4个百分点。

3 结论

试验结果表明，峨眉黑鸡粪源大肠杆菌对多种药物具有耐药性，尤其是环丙沙星和复方新诺明。而对诺氟沙星、氯霉素（两者现已禁用）、头孢唑啉、头孢噻肟、卡那霉素和妥布霉素等具有较高的敏感性。因此，若在鸡群中发生大肠杆菌病，应先进行药敏试验，选择几种比较敏感的药物联合使用或交替使用，以减少耐药菌株的产生。■

[1] 陈元昌，夏淑文.峨眉黑鸡[J].养禽与禽病防治，1987（5）：32.

[2] 李哲，葛慎峰，朱俊静，等.天津地区鸡大肠杆菌分离鉴定及药物敏感性试验[J].畜牧兽医科技信息，2014（8）：18.

[3] 张俊丰，黄东璋，陈琳，等.鸡肠道大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析[J].中国畜牧兽医，2013，40（11）：179-184.

[4] 郝永正，李广香.鸡致病性大肠杆菌的分离鉴定及耐药性试验[J].当代畜禽养殖业，2014（11）：12-13.

[5] 王钢，伏秦超，曹成全.峨眉山藏猕猴粪源大肠杆菌耐药性的调查研究[J].四川动物，2013，32（1）：82-85.

Drug Resistance of Escherichia coli Strains Isolated From Emei Black Chicken

Yao Caixia，Liao Juan，Xie Yumei，et al.
（Leshan Normal University，Engineering Research Center of Sichuan Higher School for Local Chicken Breeds Industrialization in South Sichuan，Sichuan Leshan 614004，China）

In order to analyse the drug resistance of Escherichia coli strains isolated from Emei black chicken to common antibiotics，the rectal swabs of Emei black chicken were collected for isolation and identification of E.coli.Antimicrobial sensitivity test were conducted by using the Kirby-Bauer method to examine the susceptibility against 18 antibiotics.The results showed that Emei black chicken′s E.coli had extremely strong resistance to CIP and SXT，and high susceptibility to NOR and CHL.The drug resistance account for 22.2%in 18 common antibiotics，but the sensitivity account for 77.7%，including 11.1 percent points of high susceptibility，22.2 percent points of moderate susceptibility，44.4 percent points of low susceptibility.

Emei black chicken；Escherichia coli；Drug sensitivity test；Drug resistance

S859.796

：B

：1001-8964（2017）04-0034-02

2017-01-11

乐山师范学院校地合作项目（Z1530）

姚彩霞（1992-），女，四川南充人，本科在读，动植物检验检疫专业。

*通讯作者：王钢（1979-），男，副教授，硕士，研究方向：动物疫病检测与防控，养殖业废弃物处理与资源化利用。