银屑病不同证候血清细胞因子的表达差异研究❋

龙剑文，皮先明，涂亚庭

(1.湖北中医药大学第一临床医学院皮肤性病学教研室，武汉 430061; 2.湖北省中医院皮肤科，武汉 430061;3.华中科技大学协和医院皮肤科，武汉 430000)

银屑病不同证候血清细胞因子的表达差异研究❋

龙剑文1，2，皮先明2，涂亚庭3

(1.湖北中医药大学第一临床医学院皮肤性病学教研室，武汉 430061; 2.湖北省中医院皮肤科，武汉 430061;3.华中科技大学协和医院皮肤科，武汉 430000)

目的:观察银屑病不同证候(血热证、血瘀证、血虚证)患者及健康人群血清中TNF－α、IFN－γ、CRP、IL－17 A、IL－6、IL－8、VEGF含量的变化，探讨其与银屑病不同证候的关系。方法:入选寻常型银屑病患者共90例，其中血热证、血瘀证、血虚证各30例，另取健康人30名作为对照。ELISA法检测不同证候银屑病患者血清中主要细胞因子TNF－α、IFN－γ、CRP、IL－17 A、IL－6、IL－8、VEGF水平，并对银屑病患者皮损面积和严重程度指数(PASI)评分。结果:血热证组银屑病患者血清中TNF－α、IFN－γ、IL－6、IL－8、CRP含量较正常组明显升高，血瘀证组TNF－α、IFN－γ、IL－6血清含量较正常组明显升高，血虚证组TNF－α血清含量较正常组明显升高差异有统计学意义，血热证组血清TNF－α、IFN－γ含量与其PASI值正相关。结论:银屑病不同证候患者血清中细胞因子的表达存在差异，某种或某几种细胞因子可被用于判断银屑病的证候。

银屑病;证候;血清;细胞因子

银屑病是一种常见的慢性炎症性皮肤病，特征性皮损为银白色鳞屑和边界清楚的红色斑块。在病理上表现为炎症细胞的浸润和角质形成细胞过度增殖。免疫学认为本病是通过T淋巴细胞介导，以角质形成细胞异常增殖和血管重构为特征的自身免疫性疾病［1］。在以往体外实验中，已揭示了许多细胞因子在银屑病发生发展中发挥重要作用［2］。寻常性银屑病属于中医学“白庀”范畴，临床辨证认为本病属血分，常分为血热型、血瘀型、血燥型［3］。目前尚未见不同证候银屑病患者血清细胞因子表达的相关报道。所以，本文观察了几种有重要意义的细胞因子肿瘤坏死因子－α(TNF－α)、干扰素－γ(IFN－γ)、C反应蛋白(CRP)、白介素－17A(IL－17A)、白介素－6 (IL－6)、白介素－8(IL－8)、血管内皮生长因子(VEGF)在不同证候银屑病患者血清中的含量，并研究与临床参数银屑病皮损面积和严重程度指数(PASI)之间的联系，以期发现其中的联系和差异。

1 临床资料

1.1 一般资料

选取2014年3月至2015年3月湖北省中医院皮肤科门诊或住院的银屑病患者，按中医辨证分为血热证组30例(男13例，女17例)，血瘀证组30例(男14例，女16例)，血燥证组30例(男10例，女20例)。血热证组年龄20～65岁，平均年龄(43.8 ±13.12)岁，病程1个月～5年，平均年龄(2.93± 1.36)年;血瘀证组年龄 20～62岁，平均年龄(43.03±12.96)岁，病程1～10年，平均年龄(3.67 ±1.91)年;血燥证组年龄20～65岁，平均年龄(42.9±13.51)岁，病程1～8年，平均病理(3.80± 2.18)年。3组年龄、性别和病程比较差异无统计学意义(P＞0.05)。所有患者均进行银屑病皮损面积和严重程度指数评分(PASI评分)，血热证组PASI评分(18.94±5.60)分，血瘀证组PASI评分(10.45 ±2.98)分，血燥证组PASI评分(8.02±3.05)分。正常对照组来自湖北省中医院健康体检中心体检正常人员30例(男15例，女15例)，年龄20～65岁，平均年龄(42.6±13.41)岁。与前3组性别、年龄上比较差异无统计学意义，患者和正常对照组均签署知情同意书。

1.2 诊断及辨证标准

银屑病诊断标准符合《皮肤病学》［1］寻常性银屑病的诊断标准，中医证候分型符合《中医皮肤病学》［3］诊断标准。

1.3 纳入和排除标准

纳入标准:符合上述诊断标准;年龄18～60岁;病程0.1～20年;所选病例均为初发或最近2个月未作任何治疗且无其他疾病史者。排除标准:近2个月内曾采用系统治疗;合并有心、脑血管、消化、泌尿和造血系统等严重原发性疾病;精神病患者;哺乳期、妊娠或拟妊娠妇女。

1.4 主要试剂和仪器

分光光度仪为芬兰雷勃公司产品(Multiskan MS，LabsystemsOy，Helsinki，Finland);罗 氏MODULAR P－800全自动生化分析仪。细胞因子试剂盒采购于U－Cytech公司:血清TNF－α(U－CyTech－CT209A)、IFN－γ(U－CyTech－CT201A)、IL－17A(UCyTech－CT516A)、IL－8(U－CyTech－CT212A)、IL－6 (U－CyTech－CT205A)、VEGF(Biovision－K5363－100)。

2 方法

2.1 样本的采集与预处理

取患者及健康人外周静脉血5 ml，1000 r/min离心10 min后取血清，－20℃冰箱冻存备测，ELISA检测血清中细胞因子TNF－α、IFN－γ、IL－17A、IL－6、IL－8、VEGF水平。具体实验步骤根据相关试剂盒操作说明进行，分光光度仪450 nm读值。CRP检测方法按罗氏MODULARP－800全自动生化分析仪检测规程进行。

2.2 统计学方法

采用SPSS 13.0统计软件进行统计分析，成组比较符合正态分布采用t检验，不符合正态分布采用Mann－Whitney U非参数检验，相关性比较采用Spearman相关分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

3 结果

3.1 银屑病患者与正常对照组血清中相关细胞因子表达的比较

表1显示，银屑病患者血清 TNF－α、IFN－γ、CRP、IL－8、IL－6含量与正常对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)，血清IL－17 A、VEGF含量与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。

表1 银屑病患者与对照组血清TNF-α、IFN-γ、CRP、IL-17 A、IL-8、IL-6、VEGF含量比较(±s)

3.2 3组银屑病患者与正常对照组血清中相关细胞因子表达比较

表2显示，血热证、血瘀证、血燥证银屑病患者与对照组血清TNF－α含量较正常对照组均有显著性提高，且血热证组TNF－α含量高于血燥证组，差异有统计学意义(P＜0.05);血热证组、血瘀证组IFN－γ血清含量较正常对照组有显著性提高，且血热证组IFN－γ含量高于血瘀证组，差异有统计学意义(P＜0.05);血热证组血清CRP、IL－8含量较正常对照组有显著性提高(P＜0.05);血热证组、血瘀证组血清IL－6含量较正常对照组有显著性提高，且血热证组IL－6含量高于血瘀证组(P＜0.05)。血热证、血瘀证、血燥证银屑病患者与对照组血清IL－17 A、VEGF和正常对照组比较差异无统计学意义(P ＞0.05)。

3.3 3组银屑病患者血清相关细胞因子含量与其PASI评分的相关性

表3显示，血热证银屑病患者血清TNF－α、IFN－γ含量与其PASI值呈正相关(P＜0.05)，其余各组PASI及血清细胞因子之间无明显相关性。

4 讨论

银屑病是皮肤科临床常见的一种炎症性皮肤疾患，属于中医“干癣”“顽癣”“松皮癣”等范畴。中医辨证主要分为血热证、血瘀证、血虚证3型。寻常性银屑病初期多为血热所致，日久必瘀，瘀久耗伤营血则表现为血燥。许多细胞因子被认为在银屑病的发生发展中扮演重要角色，如TNF－α、IFN－γ、IL－17等［4］一直是银屑病免疫炎症研究领域中的热点，还有一些与银屑病的并发症有关，如CRP［5］。

表2 3组证候银屑病患者与对照组血清TNF-α、IFN-γ、CRP、IL-17 A、IL-6、IL-8、VEGF含量比较(±s)

表2 3组证候银屑病患者与对照组血清TNF-α、IFN-γ、CRP、IL-17 A、IL-6、IL-8、VEGF含量比较(±s)

注:与正常对照组比较:▲P＜0.05;与血热证组比较:△P＜0.05

表3 不同证候银屑病患者血清TNF-α、IFN-γ、CRP、IL-6、IL-8含量与其PASI评分的相关性

之前的研究表明，T辅助细胞1(Th1细胞)在介导或维持银屑病的发生发展［6－7］起重要作用。本研究数据支持这种观点。如Th1型细胞因子(如TNF－α，IFN－γ)和一些促炎细胞因子(如IL－6，IL－8)在银屑病患者血清中含量明显提高，且血热证组TNF－α、IFN－γ含量与其PASI值呈正相关。IL－17A是由活化的Th17细胞产生的，在IFN－γ的协同作用下，能促进人类角质形成细胞表达促炎细胞因子，如IL－6 和IL－8，从而增强T细胞向皮肤的迁移［4］。临床上，IL－17mRNA在银屑病皮损中可以检测到［8］。关于患者血清中IL－17A的含量，以前的研究结果并不相同［9］。本次研究并未发现银屑病患者血清中 IL－17A含量与正常人有明显差异，这可能提示IL－17主要来源于组织而非血液中。血管增生是银屑病患者皮损的一个重要变化，VEGF是血管内皮细胞高度特异性分裂原，能诱导皮肤血管生成和重构。以前的研究表明，VEGF在银屑病皮损、血清中高表达［10］。本研究中，银屑病患者血清VEGF含量较正常组高，但差异无统计学差异，其原因可能与病例的选择及统计学方法有关。同时，不同证候银屑病患者组间血清VEGF含量比较差异无统计学意义。这些可能说明用血清IL－17、VEGF含量来区别银屑病不同证候意义不大。CRP一直被认为是银屑病患者心血管疾患的一个危险因素之一［5］。本次研究发现，银屑病组与正常对照组之间血清CRP含量有明显差异，与Uysal S［11］等报道一致，而且血热证CRP含量高于血瘀证和血虚证，说明血热证银屑病患者出现心血管疾患的概率较高。

综上所述，血热证组TNF－α、IFN－γ、IL－6、IL－8、CRP血清含量明显升高，血瘀证组TNF－α、IFN－γ、IL－6血清含量明显升高，血虚证组TNF－α血清含量明显升高，说明不同证候银屑病患者血清中细胞因子的表达是有差异的，这为进一步研究银屑病中医证候的实质提供了线索，同时应在不同证候银屑病患者中进行更大样本和更多细胞因子的检测，以便为银屑病中医证候量化提供依据。

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Study on Serum Levels of Cytokines in Patients with Psoriasis Vulgaris of Different Chinese Medicine Syndromes

LONG Jian－wen1，2，PI Xian－ming2，TU Ya－ting3

(1．Department of Dermatovenerology，The first clinical medical college of Hubei University of Chinese Medicine．Wuhan 430061，China;2．Department of dermatology，Hubei Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine，Wuhan 430061，China; 3．Department of dermatology，Union hospital of Huazhong University of Science and Technology，Wuhan 430061，China)

Objective:To observe serum levels of cytokines in the healthy individuals and the psoriatic patients diagnosed of blood－stasis syndrome(BSS)，blood－dryness syndrome(BDS)and blood－heat syndrome(BHS).Meanwhile，the relationship between cytokine expression and psoriasis of different syndromes was investigated.Methods:A total of 90 psoriatic patients were recruited and assigned to 3 groups according to their CM syndromes，including 30 patients of BSS，30 of BDS and 30 of BHS.Another 30 sex－and age－matched healthy subjects were enrolled into the control group.Serum concentrations of multiple cytokines，including tumor necrosis factor－α(TNF－α)，interferon γ(IFN－γ)，C－reactive protein (CRP)，interleukin－17A(IL－17 A)，interleukin－6(IL－6)，interleukin－8(IL－8)and vascular endothelial growth factor (VEGF)，were measured by a ELISA.The Psoriasis Area and Severity Index(PASI)is used to quantify the extent of the disease.Results:Serum levels of TNF－α，IFN－γ、IL－6、IL－8、CRP were substantially increased in the BHS group compared with the control group;Serum levels of TNF－α，IFN－γ、IL－6 were elevated in the BSS group compared with the control group;Meanwhile，Serum levels of TNF－α were substantially increased in the BDS group compared with the control group. Serum levels of TNF－α and IFN－γ had correlation with PASI scores in the BHS group.Conclusions:The expression profiles of cytokines in serum were different in psoriatic patients with different CM syndromes.The serum concentrations of one or more cytokines could be determined for TCM syndromes of psoriasis.A larger sample of clinical research is necessary.

psoriasis vulgaris;syndromes;serum;cytokines

R758.63

A

1006－3250(2017)02－0234－03

2016－09－15

武汉中青年医学骨干人才培养工程项目

龙剑文(1979－)，男，湖北天门人，副教授，副主任医师，医学博士，从事中西医结合防治皮肤病的临床与研究。