高效液相色谱法同时测定参苏止咳糖浆中葛根素、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷含量

杨兵

(湖南省怀化市食品药品检验所，湖南 怀化 418000)

·检验检测·

高效液相色谱法同时测定参苏止咳糖浆中葛根素、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷含量

杨兵

(湖南省怀化市食品药品检验所，湖南 怀化 418000)

目的建立同时测定参苏止咳糖浆中葛根素、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷含量的高效液相色谱（HPLC）法。方法色谱柱采用VenusilMP C18柱(250mm×4．6mm，5 m)，流动相为甲醇-水(25∶75)，流速为1．0mL／min，柱温为35℃，检测波长为283 nm，进样量为10 L。结果 葛根素、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的线性范围分别为6．401 3～64．012 8 g／m L(r＝0．999 6)，4．295 6～42．955 9 g／m L(r＝0．999 8)，3．853 9～38．539 3 g／mL(r＝0．999 7)，0．562 5～5．625 4 g／m L(r＝0．999 8)，平均回收率分别为99．46%，99．64%，99．55%，99．45%，RSD分别为0．59%，0．63%，0．50%，0．67%(n＝9)。结论 该方法操作简便、灵敏度高、重复性好，能排除其他成分的干扰，提供了更好地控制该药质量的方法。

高效液相色谱法；参苏止咳糖浆；葛根素；柚皮苷；橙皮苷；新橙皮苷

参苏止咳糖浆是由葛根、陈皮、枳壳、甘草等13味中药提取制成的医院制剂，具有益气解表、止咳化痰的功效，用于体气虚弱、外患风寒、内有湿痰之症，症见咳嗽痰稀，鼻塞流涕，胸膈胀满，苔白，脉浮无力。其现行质量标准仅规定了性状、理化鉴别及糖浆剂通则的检查项，未对该制剂处方中的任何药物所含成分进行定量测定，尚无文献报道该制剂的含量测定。葛根、陈皮和枳壳为方中主要药物，葛根解肌退热，生津止渴，透疹，升阳止泻，通经活络[1]；陈皮理气健脾，燥湿化痰[2]；枳壳理气宽中，行滞消胀[3]。葛根中主要有效成分为葛根素，陈皮中为橙皮苷，枳壳中为柚皮苷和新橙皮苷，还含少量橙皮苷。为了更好地控制本品质量，本试验中参考文献[4-6]，采用高效液相色谱(HPLC)法同时测定参苏止咳糖浆中葛根素、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的含量，为参苏止咳糖浆质量标准的提高提供有效依据。

1 仪器与试药

1．1 仪器

Agilent 1260型高效液相色谱仪(安捷伦科技＜中国＞有限公司)；SK3300H型超声仪（上海科导超声仪器有限公司）；AB135-S型电子分析天平(梅特勒-托利多中国公司)。

1．2 试药

葛根素对照品(批号为 110752-200912，含量为96．0%)，柚皮苷对照品(批号为110722-201312，含量为94．7%)，橙皮苷对照品(批号为110721-201316，含量为 95．3%)，新橙皮苷对照品(批号为 111857-201102，含量为99．6%)，均购自中国食品药品检定研究院；参苏止咳糖浆(湖南省洪江区中医院，批号分别为20160819，20160923，20161104)；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Venusil MP C18柱(250 mm×4．6 mm，5μm)；进样量：10μL；柱温：35℃；波长：283 nm；流速：1．0 m L／min；流动相：甲醇-水(25∶75)。按葛根素峰计算，理论板数均不低于4 000。在此色谱条件下的色谱图见图1。

2．2 溶液制备

供试品溶液：精密量取已摇匀的本品 1 m L，置20 mL容量瓶中，加入适量甲醇，超声处理30 min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

阴性对照品溶液：取缺葛根、陈皮和枳壳的阴性制剂适量（约相当于供试品的量），按供试品溶液制备方法制备。

对照品溶液：取葛根素对照品16．67mg、柚皮苷对照品11．34 mg、橙皮苷对照品10．11 mg，精密称定，置50mL容量瓶中，加甲醇适量溶解；取新橙皮苷对照品14．12 mg，精密称定，置10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释到刻度，摇匀，即得新橙皮苷对照品溶液；精密吸取新橙皮苷对照品溶液1 m L，置上述50 m L容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，再精密量取20 mL，置100 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液。

2．3 方法学考察

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：分别精密量取上述混合对照品溶液1，2，4，6，8mL，置10m L容量瓶中，分别加甲醇稀释至刻度。将稀释后的对照品溶液按拟订色谱条件进样测定峰面积，以峰面积（Y）为纵坐标、质量浓度（X）为横坐标绘制标准曲线。结果见表1。

表1 线性关系考察结果(n＝5)

稳定性试验：精密吸取同一批（批号为20161104）供试品溶液10μL，按拟订色谱条件，分别于0，1，2，4，8，12，24 h时进样测定。结果葛根素、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷峰面积的 RSD分别为0．80%，0．35%，0．36%，0．88%(n＝7)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

精密度试验：精密吸取同一混合对照品溶液10μL，按拟订色谱条件连续进样6次，记录峰面积。结果葛根素、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷峰面积的 RSD分别为0．44%，0．46%，0．44%，0．45%(n＝6)，表明仪器精密度良好。

重复性试验：取同一批(批号为20161104)样品，按2．2项下方法制备供试品溶液，平行制备6份，进样测定含量。结果葛根素、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷含量的RSD分别为1．13%，1．25%，1．22%，1．40%(n＝6)，表明该方法重复性良好。

加样回收试验：精密量取已知含量（葛根素0．452 2 g／L、柚皮苷0．260 7 g／L、橙皮苷0．290 7 g／L、新橙皮苷0．036 23 g／L）的样品(批号为20161104)1mL，共9份，置20 mL容量瓶中，分别精密量取质量浓度为64．012 8，42．955 9，38．539 3，5．625 4μg／mL的葛根素、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷混合对照品溶液 4．0，4．0，4．0，6．0，6．0，6．0，8．0，8．0，8．0m L，按2．2项下方法制备供试品溶液，用0．45μm微孔滤膜滤过，取滤液，按拟订色谱条件进样测定含量，并计算回收率。结果见表2。

2．4 样品含量测定

取3批样品，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件分别进样测定。结果见表3。

表2 加样回收试验结果(n＝9)

表3 样品含量测定结果(g／L)

3 讨论

3．1 指标性成分选择

葛根、陈皮和枳壳为方中主要药物，葛根中主要有效成分为葛根素，陈皮中为橙皮苷，枳壳中为柚皮苷和新橙皮苷，以及少量橙皮苷[7-10]。故测定参苏止咳糖浆中葛根素、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷这几种成分含量能更好地控制本品质量。

3．2 检测波长选择

对葛根素、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷对照品溶液进行紫外扫描，结果柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷在283 nm波长处有最大吸收，葛根素在283 nm波长处有较大吸收。本研究中采用283 nm作为其检测波长，葛根素、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷能同时成为主要吸收峰，峰形良好，重复性较好，且其他物质对葛根素、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的测定无干扰，故选择283 nm作为检测波长。

3．3 流动相选择

曾比较甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0．1%磷酸水溶液、乙腈-0．2%磷酸水溶液、甲醇-乙腈(1∶1)与0．1%冰醋酸溶液不同比例为流动相构成的洗脱系统[2，11-14]，优选出最佳比例的洗脱流动相。结果表明，甲醇-水按25∶75进行等度洗脱，各色谱峰的分离度和理论板数均能达到要求。

3．4 样品处理方法选择

考察甲醇、75%甲醇、无水乙醇、70%乙醇4种提取溶剂[15-17]，其中甲醇和无水乙醇的提取回收率都很高，但无水乙醇提取样品的杂质峰较多，干扰大，而甲醇提取样品的杂质峰少，干扰少，故最后确定甲醇为提取溶剂。考虑到制剂生产时检验的便捷性，采用超声（功率100W，频率40 kHz）提取，并考察不同提取时间（20，30，45min）的提取效果，最终选择了超声30min进行提取，提取完全，且耗时少。

综上所述，高效液相色谱法测定参苏止咳糖浆中葛根素、柚皮苷、橙皮苷和新橙皮苷的含量，方法稳定可行，分离效果强，灵敏度高，重复性好，其他组分干扰小，回收率高，且操作简便、快速，可为参苏止咳糖浆的质量评价和质量标准的提高提供理论依据。

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Sim u ltaneous Content Determ ination of Puerarin,Naringin,Hesperidin and Neohesperidin in Shensu Zhike Syrup by HPLC

Yang Bing
(Huaihua Institute for Food and Drug Control,Huaihua,Hunan,China 418000)

Objective To establish an HPLC method for the content determination of puerarin,naringin,hesperidin and neohesperidin in Shensu Zhike Syrup．M ethods The Venusil MP C18column(250 mm×4．6 mm,5μm)was used with Methanol-water(25∶75)as mobile phase,the flow rate was 1．0 m L／min,the column temperature was 35℃,the detection wavelength was 283 nm and the injection volume was 10μL．Results The linear ranges of puerarin,naringin,hesperidin and neohesperidin were 6．401 3-64．012 8μg／m L (r＝0．999 6),4．295 6-42．955 9μg／m L(r＝0．999 8),3．853 9-38．539 3μg／mL(r＝0．999 7)and 0．562 5-5．625 4μg／m L (r＝0．999 8)respectively．Their average recovery rates were 99．46%,99．64%,99．55% and 99．45%,RSD＝0．59%,0．63%,0．50% and 0．67%(n＝9)respectively．Conclusion The method is simple and accurate with high sensitivity and good repeatability and can exclude the interference of other components,which can be used for the quality control of the product．

HPLC;Shensu Zhike Syrup;puerarin;naringin;hesperidin;neohesperidin

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2017)03-0018-04

2016-10-07；

2016-11-09)

10．3969／j．issn．1006-4931．2017．03．006

杨兵，男，硕士研究生，工程师，研究方向为食品药品检验及食品药品质量标准，（电子信箱）ybwuwu＠163．com。