高效液相色谱法测定舒肝和胃丸中芍药苷含量

王祯旭

（1．重庆市食品药品检验检测研究院，重庆 401121； 2．重庆市药物过程与质量控制工程技术研究中心，重庆 401121）

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高效液相色谱法测定舒肝和胃丸中芍药苷含量

王祯旭1，2

（1．重庆市食品药品检验检测研究院，重庆 401121； 2．重庆市药物过程与质量控制工程技术研究中心，重庆 401121）

目的优化舒肝和胃丸中芍药苷含量的测定方法。方法色谱柱采用AgilentZobax SB C18柱(250mm×4．6mm，5μm)，以乙腈-0．1%磷酸（14∶86）为流动相，流速为2．0 mL／min，检测波长为230 nm，柱温为30℃。结果芍药苷进样量在0．061 26～1．225 2 g范围内与峰面积积分值线性关系良好（r＝0．999 9）；平均加样回收率为97．98%，RSD为1．64%（n＝6）。结论该方法简便、快速，可为提高舒肝和胃丸质量控制方法提供参考。

高效液相色谱法；舒肝和胃丸；芍药苷；含量测定

舒肝和胃丸由醋香附、白芍、佛手等13味中药组方，具有舒肝解郁、和胃止痛的功效，主要用于肝胃不和、两胁胀满、胃脘疼痛、食欲不振、呃逆呕吐、大便失调等症[1]1603。舒肝和胃丸收载于 2015年版《中国药典（一部）》[1]105，445，465，其中芍药苷的高效液相色谱（HPLC）含量测定法采用乙腈-0．05mol／L磷酸二氢钾溶液（14∶86）为流动相，含缓冲盐，对液相仪器系统和色谱柱损伤较大。现参考文献[2-13]，经试验研究，对流动相组成进行了优化，以0．1%磷酸溶液替代0．05 mol／L磷酸二氢钾溶液，同时简便了流动相配制的操作，为提高舒肝和胃丸的质量标准提供参考。

1 仪器与试药

1．1 仪器

Agilent 1100型高效液相色谱仪(美国Agilent公司)；BP211S型电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；Simplicity-185型超纯水机（美国Millipore公司）。

1．2 试药

芍药苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号为110736-201035，含量为96．5%）；乙腈（色谱纯，美国Fisher公司），水为超纯水，其他试剂均为分析纯；舒肝和胃丸（市售品，批号分别为150901，150902，1510028，水蜜丸，规格为每袋9 g）。

2 方法与结果

2．1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Agilent Zobax SB C18柱(250mm×4．6mm，5μm)；流动相：乙腈-0．1% 磷酸（14∶86）；流速：2．0m L／min；检测波长：230 nm；柱温：30℃；进样量：对照品溶液5μL，供试品溶液10μL。在此色谱条件下，供试品中溶液芍药苷色谱峰分离良好，其色谱图见图1。

2．2 溶液制备

称取芍药苷对照品0．010 58 g，精密称定，置50m L容量瓶中，加稀乙醇溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取3 m L，置10 mL容量瓶中，加稀乙醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。另取舒肝和胃丸，研碎，取0．55 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25mL，密塞，称定质量，超声处理30min，放冷，再称定质量，用稀乙醇补足减失的质量，摇匀，静置，取上清液用微孔滤膜（0．45μm）滤过，取续滤液，作为供试品溶液。再取缺白芍的阴性对照品，按照供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2．3 方法学考察

专属性试验：取阴性对照品溶液10μL，注入液相色谱仪。结果阴性对照品溶液色谱中，在与芍药苷对照品色谱峰相应位置上无色谱峰出现，表明阴性对照无干扰。色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：分别精密吸取2．2项下对照品溶液1，5，10，15，20μL，按拟订色谱条件进样测定，记录峰面积。以进样量（X，μg）为横坐标、峰面积积分值（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程 Y＝746．59X-5．237 7，r＝0．9999（n＝5）。结果表明，芍药苷进样量在0．06126～1．225 2μg范围内与峰面积积分值线性关系良好。

精密度试验：精密吸取对照品溶液5μL，连续进样测定5次，记录峰面积。结果芍药苷峰面积的 RSD为0．86%(n＝5)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取新制备的同一供试品溶液（批号为150901），分别于0，2，4，8，12 h时进样10μL测定，记录峰面积。结果芍药苷峰面积的 RSD为1．31%（n＝5），表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

重复性试验：取同一批（批号为150901）样品适量，混匀，按2．2项下方法平行制备供试品溶液6份，照拟订色谱条件进样测定含量。结果芍药苷平均含量为1．2mg／g，RSD为1．62%(n＝6)，表明方法重复性良好。

加样回收试验：称取已知含量的同一批（批号为150901）样品0．27 g，精密称定，共6份，分置具塞锥形瓶中，分别精密加入芍药苷对照品稀乙醇溶液5mL，再精密加入稀乙醇20m L，密塞，依法制备供试品溶液，照拟订色谱条件进样测定，计算加样回收率。结果见表1。

表1 芍药苷加样回收试验结果（n＝6）

2．4 样品含量测定

取 3批舒肝和胃丸样品（批号分别为 150901，150902，1510028)，分别按本试验改进的含量测定方法和2015年版《中国药典（一部）》收载方法测定芍药苷的含量。两种方法测定结果相同，即3批样品测得含量分别为1．2，1．9，1．4mg／g。

3 讨论

2015年版《中国药典（一部）》收载的舒肝和胃丸中芍药苷的HPLC含量测定供试品溶液制备方法、检测波长均与《中国药典(一部)》白芍药材含量测定相同，供试品溶液制备方法简单、快捷，检测波长灵敏。故本研究中仅参照白芍药材和文献报道的芍药苷HPLC法测定所用流动相乙腈-0．1%磷酸对舒肝和胃丸进行了考察，结果样品中芍药苷峰峰形对称，分离度良好，阴性对照无干扰。

经DAD检测，样品中芍药苷色谱峰与芍药苷对照品色谱峰UV光谱一致。色谱柱分别采用Waters SunFire C18柱（150 mm×4．6 mm，5μm），Agilent Zobax SB柱(250mm×4．6 mm，5μm)和Phenomenx Gemini-NX柱(250mm×4．6mm，5μm)对样品进行检测，芍药苷含量结果一致，方法耐用性良好。

综上所述，本试验改进方法与2015年版《中国药典（一部）》白芍药材中芍药苷含量测定方法完全一致，有利于大生产中舒肝和胃丸的质量控制。

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Content Determ ination of Paeoniflorin in Shugan Hewei Pills by HPLC

Wang Zhenxu1，2
(1．Chongqing Institute for Food and Drug Control,Chongqing,China 401121; 2．Chongqing Engineering Center for Pharmaceutical Process and Quality Control,Chongqing,China 401121)

Objective To improve the HPLC method for the content determination of Paeoniflorin in Shugan Hewei Pills．M ethods A C18column was used with the mobile phase of acetonitrile-0．1% phosphoric acid(14∶86)at the flow rate of 2．0 mL／min．The detection wavelength was 230 nm and the column temperature was 30℃．Resu lts The linear range of Paeoniflorin was 0．061 26-1．225 2μg(r＝0．999 9)．The average recovery was 97．98% with RSD＝1．64%(n＝6)．Conclusion The improved method is simple,rapid and accurate,which can be used for the quality control of Shugan Hewei Pills．

HPLC;Shugan Hewei Pills;paeoniflorin;content determination

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2017)03-0025-03

2016-10-05；

2016-11-05)

10．3969／j．issn．1006-4931．2017．03．008

王祯旭，男，工程师，研究方向为药品、保健食品和化妆品质量检测和控制方法，（电子信箱）35668808＠qq．com。