高效液相色谱法测定复方石栗喷雾剂中盐酸小檗碱含量

吕本强，范积平，张贞良 ，林东贤

（中国人民解放军第421医院药剂科，广东 广州 510318）

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高效液相色谱法测定复方石栗喷雾剂中盐酸小檗碱含量

吕本强，范积平，张贞良 ，林东贤

（中国人民解放军第421医院药剂科，广东 广州 510318）

目的建立测定复方石栗喷雾剂中盐酸小檗碱含量的高效液相色谱(HPLC)法。方法色谱柱采用Zorbax300 SB-C18柱（250 mm× 4．6 mm，5 m），流动相为乙腈-0．1%磷酸溶液（50∶50，每100m L加十二烷基磺酸钠0．1 g），检测波长为265 nm，流速为1．0m L／min，柱温为30℃。结果 盐酸小檗碱质量浓度在6．4～64．0 g／mL范围内与峰面积线性关系良好（r＝0．999 8），平均回收率为98．01%，RSD为1．63%（n＝9）。结论 该方法测定结果准确、稳定，重复性好，简便易行，可用于该制剂中盐酸小檗碱的含量测定。

高效液相色谱法；盐酸小檗碱；含量测定；复方石栗喷雾剂

复方石栗喷雾剂是我院临床应用多年的医院制剂，由石栗、黄柏、冰片等中药材提取精制而成，主要用于治疗Ⅰ°和Ⅱ°烧烫伤、表皮擦伤、伤筋（急性软组织损伤）所导致的瘀肿疼痛等症，临床效果满意[1]。为进一步提高该制剂质量的可控性、稳定性，保证临床用药安全、有效，根据2010年版《中国药典(一部)》[2]及文献[3-8]，本研究中考察了测定该制剂中盐酸小檗碱含量的高效液相色谱(HPLC)法，现报道如下。

1 仪器与试药

1．1 仪器

LC-20AT型高效液相色谱仪（日本岛津公司，包括SPD-20A检测器）；HT-220A型柱温箱（天津市恒奥科技发展有限公司）；UV-1800型紫外分光光度仪（日本岛津公司）。

1．2 试药

盐酸小檗碱对照品（中国食品药品检定研究院，批号为110713-201212，供含量测定用）；复方石栗喷雾剂（医院制剂，批号为20141127，20141201，20141208）；乙腈、甲醇均为色谱纯；重蒸水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 测定波长选择

取盐酸小檗碱对照品溶液，在200～400 nm波长范围内进行扫描，结果显示在348，265，229 nm波长处均有较大吸收峰，在265 nm波长处吸收度较强且不易受溶剂峰干扰，故选择265 nm作为测定波长，见图1。

图1 流动相溶液波长扫描图（200～400 nm）

2．2 溶液制备

对照品溶液：取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加流动相制成每1mL含0．05mg的溶液，即得。

供试品溶液：精密量取该制剂10 mL，置100 m L容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0．45μm）滤过，取续滤液，即得。

阴性对照品溶液：据处方配比（缺黄柏药材）同法制成阴性对照品，按供试品溶液的制备方法制备，即得。

2．3 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Zorbax300 SB-C18柱（250 mm×4．6 mm，5μm）；流动相：乙腈-0．1%磷酸溶液（50∶50，每100m L加十二烷基磺酸钠 0．1 g）；检测波长：265 nm；流速：1．0mL／min；柱温：30℃；进样量：10μL。理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于4 000。取以上3种溶液按拟订色谱条件进样测定。可知盐酸小檗碱的保留时间为9．2 min，理论板数不低于4 000，且阴性对照在盐酸小檗碱相应保留时间处无干扰，见图2。

图2 高效液相色谱图

2．4 方法学考察

线性关系考察：取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，置250mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，制成质量浓度为0．08 g／L的对照品贮备液。取适量，加流动相定容至 50 m L容量瓶中，配制成 6．4，16．0，25．6，32．0，48．0，64．0μg／m L不同质量浓度的系列对照品溶液。以对照品质量浓度（X，μg／mL）为横坐标、峰面积积分值（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y＝33 103X+8 415．4，r＝0．999 8。盐酸小檗碱质量浓度在6．4～64．0μg／mL范围内与峰面积积分值线性关系良好。

稳定性试验：取2．2项下供试品溶液适量，在室温下贮存，按拟订色谱条件，分别于0，0．5，1．0，3．0，5．0 h时进样测定供试品溶液中盐酸小檗碱峰面积积分值。结果的 RSD为1．72%(n＝5)，表明供试品溶液在5 h内稳定性良好，见表1。

表1 稳定性试验结果(n＝5)

精密度试验：精密吸取上述对照品溶液10μL，按拟订色谱条件重复进样5次，测定盐酸小檗碱峰面积积分值。结果的 RSD为0．12%(n＝5)，表明仪器精密度良好，见表2。

表2 精密度试验结果(n＝5)

重复性试验：精密量取同一批（批号为20141127）供试品5份，各10m L，依法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定盐酸小檗碱峰面积积分值。结果的RSD为1．52%(n＝5)，表明方法重复性良好，见表3。

表3 重复性试验结果(n＝5)

加样回收试验：精密量取已知含量（批号为20141127，盐酸小檗碱含量0．219 g／L）的供试品9份，各10 mL，各加入一定量的对照品，依法进样测定含量，计算平均回收率，结果见表4。

2．5 样品含量测定

分别精密量取3批供试品（批号分别为20141127，20141201，20141208）各10m L，按2．2项下方法制备供试品溶液，按拟订色谱条件进样测定盐酸小檗碱含量，结果批号为20141127，20141201，20141208的样品含量分别为0．219，0．224，0．228 g／L。

表4 盐酸小檗碱加样回收试验结果(n＝9)

3 讨论

3．1 检测指标成分选择

复方石栗喷雾剂是我院临床应用多年的医院制剂，由石栗、黄柏、冰片等组方。方中黄柏苦寒燥湿、泻火解毒，既能燥湿以敛疮，又能清解烧烫伤火热之毒；冰片清香宣散、清热止痛，用于疮疡肿痛、溃后不敛；石栗活血散瘀，以清瘀热。诸药相伍，共奏清热燥湿，泻火解毒，活血散瘀，敛疮生肌，消肿止痛之功效。生物碱类化合物为黄柏中主要有效成分，如小檗碱、药根碱、巴马汀、黄柏碱等，其中小檗碱、巴马汀已被证明具有抗菌抗炎、清热解毒等药理作用[9-10]，与该制剂功能主治相对应。在制备过程中以75%乙醇浸渍提取黄柏有效成分，小檗碱类成分得到充分提取，故本制剂选择黄柏中盐酸小檗碱作为含量测定的指标成分。

3．2 测定波长选择

分别以甲醇、流动相为空白对照，取盐酸小檗碱对照品溶液在200～400 nm波长范围内进行扫描，结果在229，265，348 nm波长处均有较大吸收峰，但以甲醇为空白，流动相于220～235 nm波长处有微吸收。为避免流动相对测量结果的影响，且盐酸小檗碱在265 nm波长处吸收较强，峰形较好，故选择265 nm作为检测波长。

3．3 流动相选择

考察盐酸小檗碱在不添加离子对试剂的乙腈-磷酸流动相体系中的分离效果，发现色谱峰分离效果明显，但其系统适应性差，理论板数偏低，影响测量的准确性[11-16]。通过对比多种不同的流动相，试验结果显示，以乙腈-0．1%磷酸溶液（50∶50，每100 m L加十二烷基磺酸钠0．1 g）为流动相，盐酸小檗碱峰形尖锐、对称，无伸展、拖尾现象，色谱图基线稳定；通过系统适用性试验，盐酸小檗碱在该制剂中能得到理想的分离，阴性对照无干扰，故选用乙腈-0．1%磷酸溶液作为流动相。

3．4 样品处理方法选择

本制剂为石栗、黄柏等药材经75%乙醇浸渍、渗漉而成，处方简单，待测成分明确，盐酸小檗碱在流动相中能完全溶解，样品处理也相对简单，直接量取样品溶液，用流动相稀释定容即可。

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Content Determ ination of Berberine Hyd roch loride in Com pound Shili Sp ray by HPLC

LüBenqiang,Fan Jiping,Zhang Zhenliang,Lin Dongxian
(Pharmacy Department,PLA No．421 Hospital,Guangzhou,Guangdong,China 510318)

Objective To establish an HPLC method to determine the content of berberine hydrochliride in Compound Shili Spray．M ethods The determination was performed by HPLC using ZORBAX300SB-C18column(250 mm×4．6 mm,5μm);the column temperature was 30℃,the mobile phase consisted of acelonitrile-0．1% phosphoric acid solution(50∶50)(0．1 g sodium dodecylsulphate per 100 mL),the UV detection wavelength was 265 nm and the flow rate was 1．0 m L／min．Resu lts The berberine hydrochloride was in good linearity in the range of 6．4-64．0μg／mL(r＝0．999 8)．The average recovery rate was 98．01%,RSD＝1．63%(n＝9)．Conclusion The method is sensitive,accurate and reproducible,which can be used to control the content of berberine hydrochloride in Compound Shili Spray．

HPLC;berberine hydrochloride;content determination;Compound Shili Spray

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2017)03-0015-03

2016-10-09；

2016-11-28)

10．3969／j．issn．1006-4931．2017．03．005

军队医疗机构制剂标准提高科研专项课题[14ZJZ03-3]。

吕本强（1978-），男，副主任药师，研究方向为中药新制剂新技术与医院药学，（电话）020-61636468（电子信箱）Lbq421＠163．com。

张贞良（1964-），男，主任药师，研究方向为医院药事管理，（电子信箱）changefor＠vip．sina．com。