食品中真菌毒素检测方法研究

食品中真菌毒素检测方法研究

有害真菌在粮油食品中生长所产生的代谢产物中含有真菌毒素。粮油食品在收获时未被充分干燥或贮运过程中温度、湿度过高，沾染的有害真菌就会迅速生长，同时产生毒素。粮油食品中极低含量的真菌毒素会对人类和动物带来巨大的危害，表现出致癌性、遗传毒性、致畸性，还会引起肾中毒、肝中毒、生殖异常以及抑制免疫反应等。因此，迫切需要开发快速灵敏检测食品中真菌毒素分析方法。

李蓉等（2017）建立了超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-HRMS)测定焙烤食品及其原料中11种真菌毒素的检测分析方法。样品经20 mL含1%(体积分数)甲酸的乙腈-水溶液提取，经2.0 g无水硫酸、0.5 g氯化钠和300 mg C18盐析、净化后进行检测。采用CORTECS C18色谱柱(100 mm×2.1 mm，1.6 μm)，以含0.1%(体积分数)甲酸的2 mmol/L乙酸铵溶液和含0.1%(体积分数)甲酸的2 mmol/L乙酸铵甲醇溶液为流动相进行梯度洗脱。结果显示，11种真菌毒素在各自的质量浓度范围内线性关系良好。史娜（2014）建立了QuEChERS-高效液相色谱-质谱检测食品中14种真菌毒素的方法。均质样品用乙酸-乙腈溶液提取,经分散固相萃取净化后，采用ACQUITU UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.7 μm)分离。采用电喷雾电离、多反应监测方式，可同时对食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇、青霉酸、黄曲霉毒素M1、黄曲霉毒素G2、桔青霉毒素、黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A、杂色曲霉毒素、HT-2毒素、T-2毒素、鬼臼毒素14种真菌毒素进行定性和定量分析，最低检出限为0.5～1 μg/kg。.该方法简便快速、选择性佳、灵敏度高。朱闰月（2015）采用基质固相分散技术，结合高效液相色谱-电喷雾离子化串联质谱联用技术(HPLC-ESI-MS/MS)分析，在多反应监测(MRM)模式下建立了鸡蛋中呕吐毒素、黄曲霉素、玉米赤霉烯酮等15种真菌毒素生物标志物的同时定量分析的方法。样品与吸附剂C18颗粒直接混合装柱，并用20 mL 1 mmol/L甲酸铵的乙腈-甲醇溶液洗脱、吹干，萃取液经复溶、过滤后即可进行检测，整个分析过程无需复杂的净化、离心等步骤。曹德康等（2017）应用胶体金免疫层析技术开发一种快速检测谷物中黄曲霉毒素B1(AFB1)、玉米赤霉烯酮(ZEN)和呕吐毒素(DON)的三联检测卡。方法：优化胶体金溶液pH值、金标抗体量及抗原包被量制备3种胶体金试纸条，将试纸条组装成检测卡,研究该卡的检测限、准确度、特异性和稳定性。结果AFB1、ZEN和DON 3种试纸条的胶体金溶液最适pH值分别为7.5、7.5和 7.0，金标抗体量分别为 4.2、7.2和 9.6 μg/mL，抗原包被量分别为 1.0、1.4和 0.8 mg/mL。检测卡的检测结果与仪器检测结果基本一致，重复性较好，与结构类似物及其他霉菌毒素无交叉反应，在室温条件下可以保存12个月。CN201010570082.5公开了一种用于快速检测农产品、食品中真菌毒素的蛋白芯片及其制备方法，该蛋白芯片包括芯片体、真菌毒素人工抗原、抗真菌毒素单克隆抗体、荧光标记二抗，真菌毒素人工抗原按照微阵列点在固相载体上。其采用微阵列技术，将预先制备的几种待检测目的真菌毒素抗原以矩阵形式固定于固相载体上，采用竞争法原理检测样品中真菌毒素含量，通过荧光扫面显微镜识别、阅读和判定结果，具有检测分析过程连续化、集成化、微型化、高通量和快速检测等功能。CN201410553237.2提供一种检测鸡蛋中多种真菌毒素的方法，包括以下步骤：步骤一，取搅拌均匀的生鲜鸡蛋样品，依次加入水及有机提取剂，涡旋，然后机械振荡一定时间；步骤二，振荡提取后加入一定量的盐，涡旋、离心后取上清液，将该上清液进行干燥；步骤三，将干燥后的样品用液相色谱串联质谱所用的流动相复溶，然后过滤，在液质联用仪上对真菌毒素进行定性或定量检测。CN201210350192.X涉及一种免疫胶体金速测卡，应用竞争抑制免疫层析的原理同时检测食品及饲料中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)、玉米赤霉烯酮(ZEN)和黄曲霉毒素B1(AFB1)。检测时，首先向加样孔中加入待检样本，如果样本中含有待检测真菌毒素，则样本中的真菌毒素在侧向移动的过程中与位于金标垫上的胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，从而抑制了金标抗体和NC膜检测线上相应的抗原-BSA偶联物的结合，则该检测线(T线)不显色，多余的金标单克隆抗体则与多余的酶标记抗体结合，控制线(C线)显色；反之，检测线(T线)为酒红色，控制线(C线)显色。

总之，随着纳米技术、传感技术、电化学技术、分子生物学等的发展、相互渗透和结合，开发食品中真菌毒素的快速灵敏检测新方法，对保障食品安全及农产品加工等方面具有重要意义。

（江南大学图书馆 张群）