胶乳免疫比浊法测定血清铁蛋白的方法学评价

赵锐，戴雯，徐万州，梅四清，崔艳，姜树朋，李艳

(武汉大学人民医院检验医学中心，湖北 武汉 430060)

胶乳免疫比浊法测定血清铁蛋白的方法学评价

赵锐，戴雯，徐万州，梅四清，崔艳，姜树朋，李艳

(武汉大学人民医院检验医学中心，湖北 武汉 430060)

目的对胶乳免疫比浊法定量测定血清铁蛋白(FER)进行方法学评价。方法参照美国临床实验室标准化协会(CLSI)推荐的评价方法，对胶乳免疫比浊法测定血清FER的精密度、回收实验、线性范围等进行评价。结果胶乳免疫比浊法测定血清FER的批内、日间变异系数(CV)均＜5.0%，精密度良好；FER浓度在25～500 ng/mL范围内，检测线性良好；比对实验：两种厂家的试剂盒测定FER结果相关性良好(r2=0.990 7，n=40)，检测结果基本一致(P＞0.05)；回收率为96.20%～102.43%；40例健康体检者样本的检测值均在待验证区间之内。结论胶乳免疫比浊法用于定量检测人血清FER水平，测定结果准确可靠，操作简便、快速，能直接在全自动生化分析仪上使用，适用于临床样本检测。

胶乳免疫比浊；铁蛋白；方法学评价

铁蛋白(ferritin，FER)是一种分子量较大的含铁的蛋白，具有强大的铁结合和储备能力，是体内铁的主要储存形式，正常人血清含量较少，在某些疾病状态下如炎症、肝脏疾病、恶性肿瘤时，血清FER可以显著升高[1-2]。FER的检测在对疾病的诊断和治疗中都起到重要作用。FER作为肿瘤标志物之一，已被广泛用于肿瘤的筛查和诊断，有研究表明肝癌、肺癌、结肠癌、胰腺癌、卵巢癌、乳腺癌FER显著增高[3]，因此FER可作为肿瘤的辅助诊断指标。本文对胶乳免疫比浊法FER检测系统分析性能进行方法学评估验证，判断其是否能满足临床检测要求。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器 胶乳免疫比浊法检测FER试剂盒、校准物、质控物均为北京九强生物技术股份有限公司提供，仪器为OLYMPUS5400型全自动生化分析仪。参比系统为西门子ADVIA Centaur XP分析系统及配套FER试剂盒。

1.2 胶乳免疫比浊检测FER分析性能评估

1.2.1 精密度评价 参照CLSI EP5-A2文件，选取两个不同浓度的实验样本(低值90.0 ng/mL，高值360.0 ng/mL)。将两个样本2 h内分别连续检测20次；将同一样本分成双份检测，连续检测20 d。分别计算均值(x-)、标准差(s)、变异系数(CV)。

1.2.2 对比实验 参照CLSI EP9-A2文件，西门子ADVIACentaur XP FER检测系统为参比方法，实验方法为北京九强公司生产的胶乳免疫比浊法FER检测试剂盒，两个检测系统严格按照说明书进行操作，同时检测患者血清样本40份，FER浓度范围40.0～800.0 ng/mL，统计分析计算出比对方程和相关系数。

1.2.3 回收实验 参照CLSI EP15-A文件，选取新鲜的患者血清混合后作为基础样本，重复检测5次，计算均值作为样本基础值，向1.5 mL的基础标本中分别加入0、100 μL、200 μL、300 μL、400 μL、500 μL FER高值标准品(500 ng/mL)，然后再分别加入500 mL、400 mL、300 mL、200 mL、100 mL、0生理盐水并混匀，总体积均为2.0 mL。每份样本重复检测3次计算均值。用测定值减去基线值确定回收量并计算回收率，回收率(%)=回收量/加入量×100。

1.2.4 线性实验 参考CLSI EP6-A文件，用生理盐水作为空白样本和FER高值标准品(500 ng/mL)来评估线性实验，将生理盐水与FER高值标准品按1：9、1：4、2：3、3：2、4：5的比例混合，将每个样本重复检测3次，将计算平均值作为实测浓度(Y)，理论浓度(X)与实测浓度(Y)采用线性回归进行线性评价，并计算出回归方程及相关系数。

1.2.5 参考区间验证 参照NCCLSC28-A2文件，选择本院体检中心的健康体检者血清样本40份(男女各20名，年龄15～65岁)作为参考人群，将测定结果进行统计并对试剂说明书提供的参考区间进行验证，参考人群的FER检测值应均在厂家申明的参考区间内，则验证通过。

1.3 统计学方法 利用SPSS19.0统计软件和Microsoft Excel 2013软件进行数据分析，以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 FER精密度实验结果 胶乳免疫比浊法测定FER低值、高值批内CV分别为2.16%、2.07%，日间CV分别为3.71%、3.66%，均符合试剂厂家表明的不精密度要求，见表1。

表1 FER批内与日间精密度

2.2 比对试验结果 胶乳免疫比浊法测定FER结果与ADVIA Centaur XP检测结果相关性良好。线性回归方程Y=0.9645x+4.3463，线性回归系数r2= 0.990 7，n=40。两个检测系统测定结果均值差异无统计学意义(P＞0.05)，见图1。

图1 两种检测结果相关性分析

2.3 回收试验结果 基础样本的新鲜混合血清FER检测均值为103 ng/mL，FER校准品浓度为500 ng/mL，回收率为99.20%～102.43%，平均回收率为99.62%，符合实验要求，见表2。

表2 回收实验结果

2.4 线性试验结果 将FER理论值作为横坐标(X)，实测值为纵坐标(Y)进行线性回归分析。结果显示胶乳免疫比浊法检测血清FER在25～500 ng/mL范围内线性良好，回归方程Y=1.062 6X-4.633 6，r2= 0.999 1，符合厂家要求，见图2。

2.5 参考区间验证 检测选择40份健康体检者血清FER浓度，经验证FER浓度均在试剂说明书提供的参考区间范围内，均未超出所验证的参考区间，参考区间通过验证。

图2 FER线性测定

3 讨 论

FER是机体储存铁的主要方式，同时防止游离铁对人体正常细胞的损害，在体内主要以细胞内FER和血清FER两种形式存在。FER的相对分子量约为450 kD，由24个亚基组成，FER亚基分为L和H型两种，其中L型亚基与贮存铁有关，H亚基中和游离铁和抗炎相关。正常情况下FER主要来自单核巨噬细胞系统、肝脏及T细胞，参与机体的生物解毒、储存铁离子、抗氧化、机体损伤、感染、炎症、修复等方面功能[4]。

血清FER升高影响机体的抗氧化能力，加速细胞生长，提高机体对氧化应激的抵抗[5]。同时，铁蛋具有调节机体的免疫功能，当FER与T细胞和B细胞结合后，可以抑制其细胞增殖，从而抑制机体细胞免疫功能。有研究表明，FER可以降低活化高分子量激肽原(HKa)的表达和功能，从而导致肿瘤组织内血管的生成增多，促进肿瘤的生长和转移[6]。

血清FER已经成为临床常用的肿瘤标志物之一，多种恶性肿瘤血清FER的水平增高[7-8]。有研究显示，血清FER与性别、吸烟、肿瘤分期、肿瘤淋巴结转移等有关[7,9]。同时，血清FER与肿瘤预后相关，高水平的血清FER的患者肿瘤更容易复发或远处转移，并且预后较差[10]。肿瘤患者血清FER升高可能与下列因素有关[7]：(1)肿瘤细胞的恶性增殖导致周围组织的坏死，细胞内铁的大量释放入血；(2)恶性肿瘤增殖，FER合成增加；(3)肿瘤细胞降低肝细胞对血清FER的降解和清除能力，使血清FER水平相对增加；(4)肿瘤引起的炎性介子分泌增加，进而刺激FER的生成增加。

目前临床实验室所用FER的检测方法主要是化学发光法，化学发光方法检测FER的灵敏度高，但是其检测线性范围较小，一般都是封闭的检测系统，需要特定配套的仪器和试剂盒，检测成本高，难以在临床上大范围普及使用。本文主要是对北京九强公司生产的胶乳免疫比浊法FER检测试剂盒进行性能评价及比对研究，该方法简单、快速、灵敏、可靠，对仪器设备要求不高，可在全自动生化分析仪上应用。方法学性能评价结果显示，批内和日间CV均小于5%，说明此试剂盒重复性较好，符合厂家对不精密度的要求。比对实验显示两者相关性良好(r2=0.990 7)，免疫比浊法检测血清FER的精密度和准确度满足临床实验室需求。常规方法应具有检测快速、费用低廉、检测结果准确，在临床使用过程中简便易行、自动化程度高。本文所述试剂盒检测FER能够较好的满足临床检测要求，适于在临床诊断过程中广泛使用。

[1]Cujic D,Golubovic S,Bojictrbojevic Z,et al.Differential diagnosis of liver diseases using serum biomarkers[J].Journal of B.U.ON, 2010,15(1):141-146.

[2]Vanarsa K,Ye Y,Jie H,et al.Inflammation associated anemia and ferritin as disease markers in SLE[J].Arthritis Research&Therapy, 2012,14(4):182-189.

[3]李毅,许明芳,顾咸庆,等.多肿瘤标志物蛋白芯片检测中FER在恶性肿瘤中的诊断价值[J].重庆医学,2012,41(19):1920-1922.

[4]Knovich MA,Storey JA,Lan GC,et al.Ferritin for the clinician[J]. Blood Reviews,2009,23(3):95-104.

[5]Baldi A,Lombardi D,Russo P,et al.Ferritin contributes to melanoma progression by modulating cell growth and sensitivity to oxidative stress[J].Clinical Cancer Research,2005,11(9):3175-3183.

[6]Coffman LG,Parsonage D,Jr DR,et al.Regulatory effects of ferritin on angiogenesis[J].Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States ofAmerica,2009,106(2):570-575.

[7]Ji M,Li XD,Shi HB,et al.Clinical significance of serum ferritin in elderly patients with primary lung carcinoma[J].Tumor Biology, 2014,35(10):10195-10199.

[8]Krechler T,Kalousová M,Jáchymová M,et al.Ferritin as an independent mortality predictor in patients with pancreas cancer.Results of a pilot study[J].Tumour Biology,2012,33(5):1695-1700.

[9]Anijar K.Significance of serum ferritin and lactate dehydrogenase in benign and malignant disease of breast[J].Indian Journal of Pathology&Microbiology,1997,40(3):321-326.

[10]Marcus DM,Zinberg N.Measurement of serum ferritin by radioimmunoassay:results in normal individuals and patients with breast cancer[J].JNCI Journal of the National Cancer Institute,1975,55(4): 791-795.

Methodological evaluation of latex immunoturbidimetric assay for the detection of serum ferritin

ZHAO Rui,DAI Wen,XU Wan-zhou,MEI Si-qing,CUI Yan,JIANG Shu-peng,LI Yan.Department of Clinical Laboratory,Renmin Hospital of Wuhan University,Wuhan 430060,Hubei,CHINA

ObjectiveTo evaluate the determination of serum ferritin(FER)by latex immunoturbidimetric assay(LIA).MethodsThe precision,recovery experiment and linear range of serum FER determined by LIA were assessed through the evaluation method recommended by American Clinical and Laboratory Standards Institute(CLSI).ResultsThe intra-group and inter-day coefficient of variation(CV)of serum FER determined by LIA were less than 5.0%,and the precision was good.FER concentration was in the range of 25～500 ng/mL,and the detection linear was good.Comparative experiments showed that the relationship of FER results determined by two manufacturers'kits were good(r2=0.990 7,n=40),and the results remained in accordance(P＞0.05).The recoveries were 96.20%-102.43%.The detection values of 40 healthy physical examination volunteers were in the range of validation interval.ConclusionLIA is a convenient,rapid,cheap,accurate and reliable method for quantitating human serum FER,which can be used directly on the automatic biochemical analyzer and be suitable for clinical routine analysis.

Latex immunoturbidimetric assay(LIA);Ferritin(FER);Methodological evaluation

R446.11

A

1003—6350（2017）05—0763—03

2016-09-11)

国家863计划课题（编号：2014AA022304）

李艳。E-mail：yanlitf1120@163.com

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.05.026