深圳某社区非户籍女性HPV感染与宫颈鳞状上皮内病变的相关性研究

陈秋梅，汪皓，郭恒，魏晟

(1.华中科技大学同济医学院公共卫生学院流行病与卫生统计学，湖北 武汉 430030；2.南方医科大学附属深圳市妇幼保健院保健部，广东 深圳 518028；3.深圳市宝安区妇幼保健院妇产科，广东 深圳 518133)

深圳某社区非户籍女性HPV感染与宫颈鳞状上皮内病变的相关性研究

陈秋梅1，3，汪皓2，郭恒1，魏晟1

(1.华中科技大学同济医学院公共卫生学院流行病与卫生统计学，湖北 武汉 430030；2.南方医科大学附属深圳市妇幼保健院保健部，广东 深圳 518028；3.深圳市宝安区妇幼保健院妇产科，广东 深圳 518133)

目的了解深圳市宝安区非户籍妇女人类乳头状瘤病毒(HPV)感染与宫颈鳞状上皮内病变(SIL)之间的相关性。方法多阶段分层抽样对2015年6月至2016年6月深圳市宝安区12个社区5 391名妇女进行宫颈HPV基因型检测，初筛阳性1 445例再进行液基细胞学技术(TCT)检测。运用单因素Logistic回归分析宫颈病变与HPV亚型的相关性。结果HPV阳性中最常见的5种基因型为HPV16(9.56%)、HPV58(8.52%)、HPV52(6.92%)、HPV18(6.31%)、HPV6(5.65%)。未见上皮内病变/恶性细胞(NILM)组和高度鳞状上皮内病变(HSIL)组中高危型HPV比例分别为26.99%、96.88%。单因素Logistic回归分析结果显示，NILM与HPV6、HPV11、HPV43有相关性，LSIL病变与HPV35、HPV51、HPV56相关，ASC-US病变与HPV31、HPV39相关。HSIL+组HPV16、HPV33和HPV58感染的风险较非HSIL+组明显升高。结论特定高危型HPV基因型与宫颈高度鳞状上皮内病变有相关性，尤其HPV16、HPV33、HPV58感染，可为宫颈癌防治提供参考依据。

人类乳头瘤病毒；细胞学；鳞状上皮内病变；感染

子宫颈癌是妇女恶性肿瘤的主要类型，目前已经证实人类乳头瘤病毒(HPV)持续感染可以促进宫颈上皮病变的发生以及进展，尤其是某些高危型HPV (HR-HPV)感染与宫颈高度鳞状上皮内病变具有明显相关性。目前已经发现14种高危型乳头瘤病毒可以导致宫颈癌前病变，在亚洲地区HPV感染病例中，HPV16是最常见的基因型，其余依次是HPV58、HPV33、HPV18、HPV52、HPV45、HPV31、HPV35[1]。由于地理环境和社会区域存在不同，主要致病性HPV基因型也明显不同。低危型HPV(LR-HPV)则与宫颈低度鳞状上皮内病变密切相关[2]。

深圳是一个劳务工集居的移民城市，深圳市宝安区女劳务工所占比例较高，本研究拟通过横断面调查宝安区非户籍女性人类乳头状瘤病毒感染及宫颈病变情况，探讨HPV基因型分布与宫颈鳞状上皮内病变的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 通过多阶段分层整群抽样的方法抽取2015年6月至2016年6月深圳市宝安区非户籍妇女纳入研究。纳入标准：①年龄21～65岁、在深圳市宝安区登记居住证、居住半年以上；②无骨盆放射治疗史、具有完整的子宫、排除了怀孕的妇女；③1年之内未进行宫颈癌前病变筛查，未进行过宫颈局部治疗；④宫颈癌筛查前3 d未使用过阴道药物；⑤排除了合并有内外科疾患及恶性肿瘤的病例。本研究已获得医院伦理委员会的批准，根据《临床试验管理规范》制定知情同意书，资料的收集、组织样本的采集和使用均获得研究对象本人同意，根据自愿原则签署知情同意书。

1.2 人类乳头状病毒基因型检测 将宫颈脱落细胞标本保存在2.5 mL缓冲液里进行离心提取细胞块，加入裂解液置于100°C水浴大约10 min，保留上清液作为DNA模板。采用聚合酶链式反应PCR法将待测定的DNA模板进行扩增，扩增HPV基因型的目标片段并标记生物素，将带有固定顺序排列的膜条探针与PCR产物进行杂交，并做显色处理和结果判读。根据蓝色斑点出现的位置判别HPV亚型。依据杂交信号进行检测分型，检测18种高危型HPV(包括HPV16、HPV 18、HPV 31、HPV 33、HPV 35、HPV 39、HPV 45、HPV 51、HPV 52、HPV 53、HPV 56、HPV 58、HPV 59、HPV 66、HPV 68、HPV 73、HPV 83及MM4)，5种低危型HPV(包括HPV 6、HPV11、HPV42、HPV43及HPV44)。采用亚能生物技术(深圳)有限公司研制的人乳头瘤病毒基因分型(23型)检测试剂盒分型检测。

1.3 液基细胞学技术(TCT)检测 宫颈脱落细胞HPV检查阳性的妇女均进行TCT检测。宫颈科医生充分暴露宫颈后，擦拭宫颈口分泌物，将刷头刷丝放置于宫颈管内，顺时针旋转4～5圈，然后将宫颈刷头置入细胞保存液中，旋紧瓶盖，充分摇晃约半分钟，由专门人员送至实验室制片、检测。宫颈脱落细胞标本收集管振荡1 h，然后移入试管，采用液基薄层制片机进行自动制片、染色，细胞学标本由两名病理学副主任医师采取盲法取一致意见作为诊断结果。根据2001年修订后的TBS分级报告系统判读结果：鳞状细胞癌(SCC)、高度鳞状上皮内病变(HSIL)、不能排除高度、意义不明确的非典型鳞状上皮细胞病变(ASC-H)、低度鳞状上皮内病变(LSIL)、意义不明确的非典型鳞状上皮细胞病变(ASC-US)、未见上皮内病变/恶性细胞(NILM)[3]。细胞学阳性诊断是指除了NILM之外的其他宫颈病变级别。

1.4 统计学方法 采用EpiData3.1软件建立数据库，录入完成后将数据转入SPSS19.0软件包进行统计分析。计量资料使用均数描述，均数比较采用t检验；计数资料使用频数和构成比描述，运用单因素Logistic回归对结局变量进行分析，使用似然比统计量筛选变量，P值为0.05，计算OR值及其95%置信区间。

2 结果

2.1 HPV感染检出情况 本次多阶段分层抽取新安、西乡、石岩、沙井、松岗、福永街道六个街道12个社区调查点，实际调查人数5 445人，剔除宫颈标本细胞标本不合格24人，失访30人，资料完整共5 391人，筛查平均年龄33.65岁，HPV阳性1 445例，平均年龄32.94岁，HPV阴性3946例，平均年龄33.91岁，两组年龄均值的方差具有齐性(F=0.05，P=0.823)，两组年龄均值比较差异无统计学意义(t=1.355，P=0.175)。

HPV阳性1 445例(26.80%)，高危型HPV感染1 088例(20.18%)，低危型255例(4.73%)，高危和低危型混合感染102例(1.89%)。单一HPV亚型感染962例(66.57%)，多重混合感染483例(33.43%)，其中两种亚型感染334例(23.11%)。最常见的HPV基因型为HPV16 (9.56%)，其余依次是HPV58(8.52%)、HPV52(6.92%)、HPV18(6.31%)、HPV6(5.65%)、HPV45(5.08%)、HPV66(4.99%)、HPV51(4.90%)，未检测出MM4基因型。高危型HPV基因亚型共计1 732例(81.54%)，以HPV16(9.56%)、HPV58(8.52%)、HPV52(6.92%)、HPV18(6.31%)、HPV45(5.08%)多见，而HPV73(1.88%)、HPV83(2.21%%)、HPV35(3.06%)、HPV68(3.48%)检出较少。低危型HPV共392例，占18.46%，以HPV6 (5.65%)、HPV43(4.10%)、HPV11(3.77%)多见，而HPV44(31.84%)、HPV42(3.11%)检出较少。

将HPV阳性1 445例分成四组：21～30岁组567例(38.55%)，31～40岁组589例(41.45%)，41～50岁组251例(17.37%)，51～65岁组38例(2.63%)。21～30岁组HPV阳性比例及高危型HPV阳性比例分别为10.52%、6.94%，31～40岁组为10.93%、8.72%，41～50岁组为4.66%、4.03%，51～65岁组为0.70%、0.50%，31～40岁组妇女HPV比例最高，出现感染峰值，40岁以后有所下降，未发现HPV感染的第二个峰值。

2.2 宫颈TCT与HPV基因型的关系 1 445例TCT结果中NILM 547例(37.85%)、ASC-US 389例(26.92%)、LSIL 291例(20.14%)、HSIL 215例(14.88%)与SCC 3例(0.21%)。HPV各亚型在31～40岁年龄组所占比例最多，共1 302例(61.30%)，NILM组中高危型HPV亚型比例为26.99%(291/1 078)，HSIL及以上病变(HSIL及SCC，简称HSIL+)高危型HPV亚型比例为96.88%(248/256)。NILM组21～30岁妇女HPV33、HPV45、HPV51、HPV53的比例较其他年龄组高，31～40岁妇女HPV66、HPV68的比例较其他年龄组高；HSIL+组未检测出HPV35、HPV44基因型，31～40岁妇女HPV16、HPV33、HPV52、HPV58、HPV42的比例较其他年龄组明显升高。NILM组中HPV感染的亚型以HPV6、HPV11、HPV43、HP59为主，ASC-US组中HPV感染的亚型以HPV31、HPV39、HP53、HPV58为主，LSIL组中HPV感染的亚型以HPV35、HPV51、HPV56为主，HSIL、SCC组中HPV感染的亚型以HPV16、HPV33、HPV52、HPV58多见。

2.3 HPV亚型与宫颈病变的相关性 单因素Logistic回归分析结果显示，NILM与HPV6、HPV11、HPV43有相关性，与HPV59及其他低危型HPV基因型无相关性。LSIL病变与HPV35、HPV51、HPV56基因型相关；ASC-US病变与HPV31、HPV39基因型相关，与HPV53、HPV58负相关。HSIL+组HPV16感染的风险是非HSIL+组的1.63倍，HPV33和HPV58感染的风险均较非HSIL+组明显升高；而LRHPV、HPV52及HPV混合感染与HSIL+病变无相关性。见表1～表4。

表1 NILM与HPV亚型的相关性

表2 LSIL病变与HPV亚型的相关性

表3 ASC-US病变与HPV亚型的相关性

表4 HSIL+病变与HPV亚型的相关性

3 讨 论

HPV感染的检出率在不同地理环境和人群存在明显差异性，广东珠三角育龄妇女HPV感染检出率约为16.4%，30～44岁妇女所占比例最高(67.0%)[4]。本研究中初筛HPV阳性检出率为26.80%，高危型HPV阳性检出率为20.18%，31～40岁妇女HPV阳性比例为10.93%、高危型HPV阳性比例8.72%，40岁后有所下降，未见HPV感染的第二个年龄峰值。这与本研究的样本来源及研究对象的生活状态有关。所筛查的人群是非户籍常住妇女，只有最基本医疗社会保险，部分妇女未参加社保，而且医疗资源配置存在区域性的差异，所受教育程度多为初中及以下学历，大多从事手工业或者服务业工作，劳动强度较强，部分年轻女性初次性生活年龄比较低，由于经济水平低下以及个人健康意识欠缺，而且容易感染人类乳头瘤病毒。这可能是导致本研究HPV阳性检出率较高的原因之一。

HPV亚型的分布具有区域性及人群特征，致病性HPV亚型的感染和宫颈高度鳞状上皮内病变的相关性各有不同。研究报道，中国北京市最常见的亚型是HPV16、HPV52、HPV33、HPV66、HPV18，其 中HPV52、HPV16和HPV33可能与宫颈高度鳞状上皮内病变有关；HPV18和HPV66并未发现与高度鳞状上皮内病变的相关性[5]。本研究发现，NILM、LSIL及ASC-US病变与低危型HPV相关性较大，HSIL+组中HPV感染的亚型以HPV16、HPV33、HPV52、HPV58多见，HPV16、HPV33和HSIL+病变具有相关性，这与国内报道一致；HPV58亦与HSIL+病变相关，未发现HPV52与HSIL+病变有相关性。这些致病性差异可能与人乳头状瘤病毒类型的甲基化有关，HPV DNA甲基化水平升高与宫颈高度鳞状上皮内病变有明显相关性[6]。基因组异常甲基化模式的启动可能会影响病毒的生命周期，表观遗传学修饰在肿瘤的发生中起着重要的作用。HPV16 L1基因的特定位点甲基化水平与宫颈鳞状上皮内病变相关，尤其在宫颈高度鳞状上皮内病变和宫颈癌中的甲基化率最高[7]。

HPV混合感染是否促进宫颈鳞状上皮内病变的发生发展，目前尚无统一的观点。有研究报道，在年轻女性人群多见人乳头瘤病毒多重混合感染，多见于LSIL(75.9%)，其次是HSIL(65.5%)、ASC-US(64.6%)、NILM(36.8%)，与NILM相比较，多重混合感染尤其出现在多个高病毒载量病例里，明显与高度鳞状上皮内病变有关，但是不能区分出宫颈低级和高级细胞学病变[8]。HPV多重感染可能促进在宫颈癌的发展，并与某些影响宫颈癌预后的因素相关，如肿瘤细胞类型、宫颈间质浸润深度、淋巴血管间隙浸润程度等[9]。

本研究结果发现，HPV感染者多以单一型感染为主(66.57%)，HPV混合感染占33.43%，以两种亚型感染为主(23.11%)。HPV混合感染与宫颈高度鳞状上皮内病变无相关性。这可能由于不同人群对各亚型HPV的易感性存在差异，且各亚型潜在的致病力不同，和是否为致癌的优势HPV亚型、是否存在多种高危HPV亚型持续性感染等因素有关。某些特定HPV亚型组合在宫颈高度鳞状上皮内病变发生发展过程中可能存在协同作用，其具体机制等尚需深入研究。

本研究运用HPV基因型检测作为宫颈癌初筛项目，提供了深圳市宝安区21～65岁非户籍女性HPV感染基因型分布的基础数据，提示特定的高危型HPV基因型与宫颈高度鳞状上皮内病变有相关性，可以为HPV感染所致的宫颈癌防治提供依据，有助于对HPV感染的妇女进行风险评估和危险分层管理，有利于降低阴道镜转诊率和减轻患者的焦虑。但研究也存在一定的局限性，由于采用横断面研究，一些可能没有人乳头状瘤病毒感染而导致细胞学异常的女性未被纳入研究，存在偏倚；信息的准确性及隐私信息的可靠性可能也会影响这个调查的真实性，有待进一步研究证实。

参考文献

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[7]王微,刘建华,王桂丽,等.人乳头瘤病毒16型甲基化水平与子宫颈病变程度关系的研究[J].中国医科大学学报,2016,45(4):293-297.

[8]Schmitt M,Depuydt C,Benoy I,et al.Multiple human papillomavirus infections with high viral loads are associated with cervical lesions but do not differentiate grades of cervical abnormalities[J].J Clin Microbiol,2013,51(5):1458-1464.

[9]王慧儒,李菲,王焕妮,等.人乳头瘤病毒多重感染与宫颈癌的关系[J].广西医学,2014,36(4):416-419.

Correlation between HPV infection and cervical squamous intraepithelial lesions in non-native women in communities of Shenzhen

CHEN Qiu-mei1,3,WANG Hao2,GUO Heng1,WEI Sheng1.1.Department of Epidemiology and Health Statistics,School of Public Health,Tongji Medical College,Huazhong University of Science and Technology,Wuhan 430030,Hubei,CHINA;2.Healthcare Department,Southern Medical University Affiliated Shenzhen Maternity and Child Healthcare Hospital,Shenzhen 518028,Guangdong,CHINA;3.Shenzhen Baoan District Maternal and Child Healthcare Hospital,Shenzhen 518133,Guangdong,CHINA

ObjectiveTo investigate the association between human papilloma virus(HPV)infection and cervical squamous intraepithelial lesions(SILs)for non-native women in Baoan District of Shenzhen.MethodsA total of 5 391 women were recruited by multi-stage stratified sampling method for cervical cancer screening in 12 communities in Baoan District of Shenzhen from June 2015 to June 2016.Exfoliated cervical cells were collected to detect the HPV genotype.A total of 1 445 HPV-infected samples were tested by liquid thin-layer cytology technology(TCT).Logistic regression analysis was used to analyze the correlation between HPV genotypes and cervical squamous intraepithelial lesions.ResultsThe five most common HPV genotypes were HPV16(9.56%),followed by HPV58(8.52%),HPV52 (6.92%),HPV18(6.31%),HPV6(5.65%).The ratio of high risk(HR)-HPV genotypes in Negative for Intraepithelial Lesions or Malignancy(NILM)and high-grade SIL(HSIL)or worse(HSIL+)were 26.99%and 96.88%,respectively. HPV6,HPV11 and HPV43 were related to NILM,while HPV35,HPV51,HPV56 were related to LSIL.HPV31,HPV39 were related to atypical squamous cells of undetermined significance(ASC-US).HPV16,HPV33,HPV58 infection may lead to HSIL+.ConclusionThere are correlations between high-grade SILs and high risk HPV genotypes,especially HPV16,HPV33,HPV58 infection,which provide evidences for prevention and intervention of cervical cancer.

Human papilloma virus(HPV);Cytology;Cervical squamous intraepithelial lesions;Infection

R373.9

A

1003—6350（2017）05—0720—04

2016-10-01)

广东省深圳市宝安区科技创新局课题(编号：2014069)

魏晟。E-mail：weisheng@mails.tjmu.edu.cn

10.3969/j.issn.1003-6350.2017.05.011