血清ADA水平和T—spot.TB联合检测在肺结核诊断中的应用

张兵+陆彩虹+施美新

[摘要] 目的 探讨分析肺结核诊断中联合应用血清腺苷脱氨酶（ADA）以及结核感染T细胞斑点试验（T-spot.TB）检测的临床价值。 方法 随机选取该院2015年1月—2016年10月收治的140例拟诊为肺结核患者分为治疗组（肺结核患者，70例）和对照组（非肺结核健康者，70例），对比两组ADA水平以及T- spot.TB阳性率以及联合检测的灵敏度、特异性等情况。结果 治疗组患者ADA水平显著高于对照组（P<0.05），治疗组患者ADA检测阳性率（55.7%）、T-spot.TB阳性率（88.6%）显著高于对照组（15.7%、17.1%）。血清ADA、T-spot.TB平行联合检测可提高对肺结核诊断灵敏度（91.6%）及阴性预测值（93.6%），但阳性预测值、特异性明显下降，系列联合检测可提高对肺结核诊断的特异性（94.9%）、阳性预测值（86.2%），但是灵敏度、阴性预测值较低。 结论 肺结核患者采用血清ADA水平以及T-spot.TB斑点数联合检测的临床价值较高，值得推荐。

[关键词] 肺结核；血清ADA；T-spot.TB；临床诊断

[中图分类号] R52 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2017）02（a）-0038-03

[Abstract] Objective To discuss the clinical value of combined test of serum ADA level and T-spot.TB in the diagnosis of pulmonary tuberculosis. Methods 140 cases of patients with pulmonary tuberculosis admitted and treated in our hospital from January 2015 to October 2016 were randomly selected and divided into the treatment group （patients with pulmonary tuberculosis， 70 cases） and the control group （patients with non- pulmonary tuberculosis， 70 cases）， and the ADA level， T- spot.TB positive rate and sensitivity and specificity of the combined test were compared between the two groups. Results The ADA level in the treatment group was obviously higher than that in the control group（P<0.05）， the ADA test positive rate and T-spot.TB positive rate in the treatment group were obviously higher than those in the control group（55.7%， 88.6% vs 15.7%， 17.1%）， and the parallel combined test of serum ADA and T-spot.TB could improve the diagnosis sensitivity（91.6%） and negative predictive value（93.6%） of patients， but the positive predictive value and specificity obviously decreased， and the serial combined test can improve the specificity（94.9%） and positive predictive value（86.2%）， but the value was lower. Conclusion The clinical value of combined test of serum ADA level and T-spot.TB spot number for patients with pulmonary tuberculosis is higher， which is worth recommendation.

[Key words] Pulmonary tuberculosis ； Serum ADA； T-spot.TB； Clinical diagnosis

肺結核是一种感染率、死亡率都非常高的疾病，及早诊断及治疗是降低患者死亡率的关键，当前临床主要采用痰培养结核分枝杆菌阳性的方式诊断肺结核，但是需要较长时间，不利于早期诊断[1]。痰聚合酶链式反应（PCR）、痰涂片检菌、影像学检查等手段检出率低，灵敏度低，很难满足临床要求[2]。腺苷脱氨酶（ADA）是一种嘌呤核苷酸代谢产生的水解酶，胸腹水良恶性诊断鉴别中也常应用到胸水ADA检测，结核感染T 细胞斑点试验（T-spot.TB）是一种新的肺结核诊断方法。临床有学者研究提出[3]，肺结核患者联合采用ADA、T-spot.TB检测的效果良好，为此该文回顾性分析了随机选取该院2015年1月—2016年10月收治的140例拟诊为肺结核患者临床诊断的相关资料，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

随机选取该院2015年1月—2016年10月收治的140例拟诊为肺结核患者，现将140例患者分为治疗组（70例，肺结核患者）和对照组（70例，非肺结核患者），治疗组中男41例，女29例；患者年龄20～85岁，平均（40.3±2.1）岁；对照组中男39例，女31例；患者年龄20～85岁，平均（40.2±2.2）岁，两组患者性别、年龄等一般资料通过统计学软件处理分析差异无统计学意义（P>0.05）。

1.2 方法

抽取两组患者3 mL静脉血作为标本检测血清ADA水平，抽取6 mL静脉血（加入肝素抗凝剂）作为标本进行T-spot.TB试验。该次检测仪器采用日立7180生化分析仪，腺苷脱氨酶检测试剂盒，4～24 U/L为正常参考值范围。

T-spot.TB试剂盒，利用Ficoll淋巴细胞分离液、RPMI1640培养液获取单个血浆核细胞（PBMCs），加入AIM-V培养液配置2.5×105 mL浓度PBMCs备用。在T-spot.TB试剂盒微孔板上分别添加50 uL植物血凝素（PHA）为阳性对照孔，添加50 uL AIM-V培养液为阴性对照孔，A检测孔为50 uL结核分枝杆菌特异抗原ESAT-6，B检测孔为50 uL抗原CFP-10，然后再将100 uL标准溶液加入微孔内。将微孔板放置于5%CO2培养箱、37℃条件下孵育15～20 h左右。然后再添加碱性磷酸酶标记二抗放置在3～8℃条件下孵育1 h。最后添加底物显色溶液放置于室温下孵育5～7 min。利用离子水、蒸馏水将终止反应充分洗涤干净，通过放大镜观察并记录每个孔的颜色斑点。

1.3 评价方式

T-spot.TB检测阳性：检测孔抗原A或B斑点数减去阴性对照孔斑点数（0～5）在6个以上。阴性：检测孔抗原A或B斑点数高于阴性对照孔斑点数2倍。平行试验联合检测指血清ADA水平、T-spot.TB试验中有一项阳性就算联合检测阳性；系列试验检测：两项试验都是阳性算联合检测阳性。

1.4 统计方法

选用SPSS 21.0统计学软件分析数据，用（x±s）表示血清ADA水平，采用t检验，利用χ2检验组间率，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者ADA水平检测对比

治疗组患者ADA水平（22.09±6.58）U/L显著高于对照组（16.89±6.32）U/L，两组患者ADA检测水平差异有统计学意义（P<0.05）。

2.2 两组患者血清ADA水平及T-spot.TB检测阳性率对比

治疗组患者ADA检测阳性率（55.7%）、T-spot.TB阳性率（88.6%）显著高于对照组（15.7%、17.1%），两组组间差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.3 不同检测方法诊断肺结核的临床价值

V 血清ADA检测诊断肺结核的特异性较高，高达88.8%，T-spot.TB诊断肺结核的灵敏度（88.6%）、特异性（83.7%）均比较高。平行联合检测可提高对肺结核诊断灵敏度（91.6%）及阴性预测值（93.6%），但阳性预测值、特异性明显下降，系列联合检测可提高对肺结核诊断的特异性（94.9%）、阳性预测值（86.2%），但是灵敏度、阴性预测值较低，见表2。

3 讨论

人体各组织、细胞中都广泛存在ADA，而血液ADA集中在淋巴细胞、粒细胞及红细胞等地方。根据相关报道表明[4]，人体淋巴细胞中ADA水平和数量并没有很大联系，和淋巴细胞激活、分化过程密切相关，而且T淋巴细胞内ADA水平相对于B淋巴细胞高出很多。从发病机制分析，肺结核是T淋巴细胞介导产生的一系列细胞免疫。该次研究表明，肺结核患者血清ADA水平显著高于非肺结核患者（P<0.05），这和童学成等[5]研究报道基本相符。T-spot.TB是一种新的肺结核诊断手段，实际上属于γ干扰素释放试验（IGRA）检测技术，其原理是感染结核杆菌刺激机体后会生成记忆T淋巴细胞，若结核杆菌特异抗原再次刺激机体，之前的记忆T淋巴细胞会在短时间内快速增殖变成效应T淋巴细胞，并且会分泌INF-γ等细胞因子将巨噬细胞激活，促进T淋巴细胞增殖[6-9]。T-spot.TB试验主要是荧光标记T淋巴细胞（释放INF-γ）判断结核杆菌感染。该次实验表明，T-spot.TB诊断肺结核的灵敏度（88.6%）、特异性（83.7%）均比较高，这和杨斌等[10]研究报道基本一致。采用平行联合检测灵敏度提高至91.6%，系列联合检测特异性提高至94.6%。仅仅采用T-spot.TB检测阳性患者因为体内长期存在记忆T细胞，并不能诊断患者是不是活动性肺结核，与血清ADA联合检测可有效提高检出率。

综上所述，肺结核患者采用血清ADA水平以及T-spot.TB斑点数联合检测的临床价值较高，值得推荐。

[参考文献]

[1] 冯晓朦，王晶莹，时景伟，等.血清ADA水平和T-spot.TB联合检测在肺结核诊断中的应用[J].吉林大学学报：医学版，2016，42（2）：306-310.

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[9] 刘洁，李苏利.肺结核实验室诊断的研究进展[J].医学综述，2013，19（18）：3353-3356.

[10] 杨斌.实验室检查在结核性与恶性胸腔积液鉴别诊断中的应用[J].临床荟萃，2012，27（7）：639-641.

（收稿日期：2016-11-06）

[作者简介] 张兵（1973.12-），男，江苏启东人，本科，副主任技师，研究方向：从事临床检验工作。