脱毒马铃薯原原种工厂化生产流程标准

韦献雅，唐娅梅

(成都久森农业科技有限公司，成都 新都 610500)

脱毒马铃薯原原种工厂化生产流程标准

韦献雅，唐娅梅

(成都久森农业科技有限公司，成都 新都 610500)

马铃薯脱毒良繁体系的建立，为马铃薯脱毒种薯生产打下了良好的基础。目前，各生产企业和科研院所都建起了温网室繁殖脱毒原原种，为马铃薯脱毒良种的快繁和推广提供了很好的条件。要使脱毒原原种的生产达到低成本、高质量、高效益，实现原原种生产的规模化、产业化，必须根据各地不同的生产条件，总结出自己的生产管理方法。本文总结了本企业在工厂化生产原原种过程中的一些流程和经验，并形成了企业标准，以供同行参考和借鉴。

脱毒马铃薯；原原种生产；企业标准

1 组培苗脱毒及快繁生产程序

1.1 组培苗的启动

1.1.1 选材 选用生产上主栽的或具有某种特性的优良品种块茎的休眠芽、或刚出土幼苗的茎尖、或田间成株上的叶芽作茎尖剥离材料。

1.1.2 材料处理 将选择的马铃薯薯块材料放在温室或培养箱内进行催芽处理，36℃处理4～6周后制取脱毒材料，用紫外线照射脱毒材料10min。

1.1.3 培养基的制备 在每l000ml MS培养基中加GA3 0.2～0.3mg、6-BA 0.1～0.2mg、NAA 0.01～0.05mg，分装入管(或瓶)。

1.1.4 灭菌 在0.12Mpa/cm2压力下灭菌20～23min，冷却备用。

1.1.5 茎尖剥离接种 待芽萌发至2～3cm长时，选取粗壮的芽，放入纱布袋，用自来水冲洗1h后，在无菌条件下，用75%酒精浸2～3s，再用0.1%升汞液消毒3～6min(或用3%次氯酸钠液加2～4滴振荡消毒15～20min)，取出用无菌水冲洗3～5次，用灭菌滤纸吸干材料表面水分，在体视解剖镜下用手术刀等工具轻、准、快速地剥去幼叶，切取带l～2个叶原基(0.1～0.4mm大小)的生长点，迅速接种入装有分化培养基的试管或培养瓶中，每管(瓶)放入1个生长点，并注明品种、茎尖号、接种日期。

1.1.6 培养条件 室温21～25℃，光照时数l0～12h/d，光照强度2000～30001x条件下培养120～140d。当看到明显生长的小茎，叶原基形成可见的小叶，随即转入无生长调节剂的培养基中。小苗继续生长并形成根系，发育成具3～4个叶片的小植株，就可继续扩繁。

1.1.7 记录 接种完成后，填写《组培苗茎尖脱毒登记表》。

1.2 病毒检测

采用酶联免疫吸附法(ELISA)由本单位先进行自检，然后送国家法定植检部门复检认定。以单株为系进行扩繁，苗数达150～200株时随机抽取3～4个样本，每个样本10～15株，用于检测的数量不低于总数的10%。根据检测结果出具检验结果报告单，如果脱毒苗没有检出PLRV、PVY、PVA、PVX、PVM或PVS和PSTVd等病毒和类病毒，则应批准进行组培苗生产。不合格的脱毒苗不得用于组培快繁。脱毒苗复检：继代扩繁中选留的脱毒苗，每年至少作一次病毒复检。

1.3 脱毒基础苗快繁

1.3.1 脱毒组培苗来源 经检测，确认脱除了所列病毒的组培苗。

1.3.2 培养基 用MS培养基，根据不同植物的不同生长阶段添加相应浓度6-BA，NAA等激素。

1.3.3 灭菌 在0.12Mpa/cm2压力下灭菌20～23min，冷却备用。

1.3.4 快繁 马铃薯组培苗将母苗剪切成1cm左右，带一叶一芽的茎段接种于继代培养基上，每瓶培养基接种10～15个茎段，待茎段长成高10cm左右小苗(培养15～30d)，进行切段转接，如此循环，反复继代培养繁殖。

1.3.5 培养条件 室温21～25℃，光照时数l0～12h/d，光照强度2000～30001ux。

1.4 组培苗的保存

1.4.1 培养基 Ms+甘露醇20～80mg/L+卡拉胶5500mg/L+蔗糖30000mg/L，pH5.8，每瓶装培养基45～70ml，灭菌同1.1.4。

1.4.2 接种 选继代培养中生长健壮的组培苗，进行接种，接种方法同3.3.3，每瓶接种4～15个茎段或健壮苗。

1.4.3 培养 置弱光(1000lx)和较低温度(5～10℃)下保存。3～6个月转接1次。3～4年更新1次，用于快繁的脱毒组培苗。

2 脱毒马铃薯试管苗和扦插苗种植

2.1 场地准备

2.1.1 网室大棚 种植前检查大棚防虫网有无孔洞，设施设备有无损坏，出现问题及时报修，基质铺设及大棚维修完毕后再对大棚内部进行棚体消毒。

2.1.2 基质准备 种植基质为第一次使用基质，无需对基质消毒，若为使用过的基质，种植前用浓度为500～800倍液的氢氧化铜溶液对基质进行消毒处理，消毒后密闭网室大棚,15d后用清水冲洗基质，自然晾干待用。

2.2 炼苗

根据扦插计划任务中所需试管苗数量，要提前2～3d将试管苗从培养室转运到炼苗场按区域分品种进行堆放，并作好标识。

2.3 剪苗

2.3.1 组培苗剪苗

2.3.1.1 消毒 剪苗前用75%的酒精棉球擦拭手心手背、剪刀和苗盘。剪苗过程中若更换品种必须对剪刀和苗盘进行重新消毒。

2.3.1.2 剪苗 将培养瓶内的试管苗轻轻取出，用消毒的剪刀将试管苗从基部剪下，按顺序放入苗盘内。

2.3.2 扦插苗剪苗

2.3.2.1 消毒 剪苗前用75%的酒精棉球擦拭专用剪苗刀，剪苗过程中若更换品种必须对剪苗刀进行重新消毒。

2.3.2.2 剪苗 由工人按照管理人员要求，用自制专用剪苗刀，剪取种植后长出新叶，高度高于10cm的种苗茎尖，分品种放入塑料筐内。

2.4 打孔

种植前由工人使用专用打孔器，按照管理人员要求，对所需的苗床厢面进行打孔处理，基质厚度保证6～8cm，基质含水量保持在60%～70%之间。

2.5 扦插

2.5.1 组培苗的扦插 将苗盘内的试管苗放入0.1mol/L的NAA溶液中浸泡10min，然后按照一孔一苗的要求进行扦插，扦插深度2～3cm。

2.5.2 扦插苗的扦插 将塑料筐内的扦插苗放入清水中冲洗5min，保证叶片及茎部湿润，然后按照一孔一苗的要求进行扦插，扦插深度2～3cm。

2.6 浇水

试管苗和扦插苗扦插后需立即浇定根水，吸透为止，夏季气温超过30℃时，浇水后需加盖遮阳网遮阴，冬季或春季温度低于5℃时，需加盖塑料薄膜保温。

2.7 挂牌

每扦插完一个厢面由管理人员统一在苗床厢面上插入品种标示牌，标示牌上注明品种名称、扦插日期、种苗类型，并填写大棚品种分布图。

2.8 填写《生产记录单》

完整填写每日生产记录单，记录内容包括扦插品种、数量、种苗类型、扦插时间。

3 马铃薯原原种栽培管理

3.1 灌溉

大棚内马铃薯需水标准为：苗期扦插后基质相对湿度保持95%～100%，刚扦插的苗子每天必须浇水(早上8～9时，下午5～6时)，防止萎蔫。苗子5～10d(冬季10d、夏季5d)后开始生根、长新叶。扦插15d后每隔1～3d浇1次透水。结薯期、马铃薯块茎膨大期，基质水分保持在70%～80%。收获前10d停止浇水。一般掌握阴雨天不浇，基质上部不干不浇，暴雨天气还应注意防雨。按本公司的灌溉经验，每4天开1次喷灌，每次喷洒时间控制在30min左右，春马铃薯每开2～3次喷灌后需人工补水1次，秋马铃薯需每开4～5次喷灌后人工补水1次。

3.2 施肥

每周施肥1次，施肥种类及数量根据大棚内薯苗生长情况而定。一般情况下组培苗未生根前不得施用任何化学肥料，以免烧苗。

3.2.1 幼苗期 小苗生根成活后(5～10d)要及时施肥，一般用0.2%磷酸二氢钾液或0.2%尿素喷施，1m2喷2～3kg，每周1～2次。

3.2.2 苗期 扦插20～35d后用130g复合肥+100g尿素对水150kg浇施，1m2浇大约5kg,一般隔7d喷1次。

3.2.3 孕蕾到开花期 扦插后35～45d，用200g复合肥、200g钾肥对水100kg喷施，1m2喷7kg左右，隔7d喷1次。

3.2.4 块茎膨大期、成熟期 一般用200g复合肥、200g钾肥对水100kg喷施，1m2喷施10～12kg,每7d喷施1次，每次喷施前将苗子浇湿，喷施后用水浇一下苗子，以防灼伤。收获前15～20d停止追肥。

3.2.5 填写施肥记录单 记录内容包括施肥日期、肥料种类、数量、操作员、备注。

3.3 增温/降温

春马铃薯在每天10时左右需打开天窗，同时关闭遮阳网；19时左右关闭天窗，同时打开遮阳网(遇雨天则需保持遮阳网打开)。秋马铃薯在棚内温度降低到20℃以下时，需关闭大棚的侧膜，同时在每天的10时左右打开天窗、18时左右关闭天窗，从而把大棚内的温度控制在25℃左右。

3.4 遮光/补光

马铃薯光照强度达40000lux时，需用遮阳网进行遮光处理。

3.5 除草

在马铃薯各个时期都需要注意除草，除草要做到“及时，干净”。

3.6 病虫害防治

3.6.1 预防 马龄薯主要病害有早、晚疫病，特别在阴雨天气发病率最高。条件好、大棚数量多的情况下，最好把组培苗和扦插苗分棚栽植，以便管理和减少晚疫病传染。组培苗栽后20d用800倍液杀毒矾预防晚疫病，栽后30d用杀毒矾、雷多米尔500倍液或72%霜霉疫净500倍液防治晚疫病，药剂交替使用，每周打1次。马龄薯主要害虫有蚜虫、白粉虱、螨类及地下害虫地老虎等。蚜虫防治要注意检查网室，及时防堵漏洞，严防蚜虫侵人传毒。温室白粉虱可用敌敌畏1000倍稀释液加溴氰菊酯3000倍稀释液喷雾，每隔3～7d喷1次，连喷3次。螨类可用三氯杀螨醇800倍液防治。地老虎在有土栽培条件下容易发生，而在无土栽培条件下则很少发生。

3.6.2 治疗 当大棚内出现病害发病中心则需仔细观察其病征病状，用相机记录发病状况，及时拔除病株，及时打药治疗。

3.6.3 做好防治记录 填写病虫害防治记录单。填写的主要内容包括打药日期、目的、药品名称、施药倍数、使用数量、使用地点、使用时间、操作人员、使用工具。照相记录。

4 原原种收获

4.1 割苗

根据各个大棚种薯生产日期、生育期确定割苗时间，割苗前10d停止浇水。分品种割苗，每割完一个品种，将薯苗运出大棚，转运薯苗前再次清理薯苗上的种薯，清理下来的种薯放入尼龙网袋并挂牌，吊牌上要注明品种名称及收获日期。

4.2 产量抽样

根据种植时间、品种、苗源类型确定抽样点及数量，每个品种按300m2抽一个样，每个样的抽样面积为5m2。收获前2d内完成所有品种抽样，确定合格薯与不合格薯的百分比，并填写《产量抽样单》。根据产量抽样结果预测产量。

4.3 收薯

将过筛后的种薯装入60目尼龙网袋放于原苗床，每袋可装满。根据苗床标示牌，填写吊牌，挂于尼龙袋上。

4.4 摊晾

由工人将种薯分品种运输至摊晾地放在规定的区域内，经管理人员复核后，安排工人摊晾。摊晾时将所有尼龙袋上的吊牌取下放入该尼龙袋所倒出的种薯上。种薯的摊晾厚度不超过3cm。

4.5 分级

为方便销售及估数的准确性，共分7级，级数及相对应的克数如下表示。0级：0.3g以下；1+级0.3～0.6g；1级：0.6～1g；2级：1～2g；3级：2～3g；4级：3～5g；5级：6～10g；6级：10～15g；7级：15g以上。注意，每分级完一个品种，需将筛网及分级机彻底清理一遍，防治遗留薯造成品种混杂。

4.6 装袋

将薯按级别分装于60目尼龙网袋内，每个品种均按5kg/袋分装。

4.7 挂牌

由分级人员称量完后挂牌。要求每袋挂两个吊牌，一个放于袋内，一个挂于袋外。挂牌所用吊牌上要注明品种名称、收获日期、级别、粒数、种源类型。

4.8 入冷库

记录各原原种品种、级别、各级别袋数、粒数、入库时间、入库人员、冷库号，填写《冷库入库记录单》。