韦献雅,唐娅梅
(成都久森农业科技有限公司,成都 新都 610500)
脱毒马铃薯原原种工厂化生产流程标准
韦献雅,唐娅梅
(成都久森农业科技有限公司,成都 新都 610500)
马铃薯脱毒良繁体系的建立,为马铃薯脱毒种薯生产打下了良好的基础。目前,各生产企业和科研院所都建起了温网室繁殖脱毒原原种,为马铃薯脱毒良种的快繁和推广提供了很好的条件。要使脱毒原原种的生产达到低成本、高质量、高效益,实现原原种生产的规模化、产业化,必须根据各地不同的生产条件,总结出自己的生产管理方法。本文总结了本企业在工厂化生产原原种过程中的一些流程和经验,并形成了企业标准,以供同行参考和借鉴。
脱毒马铃薯;原原种生产;企业标准
1.1 组培苗的启动
1.1.1 选材 选用生产上主栽的或具有某种特性的优良品种块茎的休眠芽、或刚出土幼苗的茎尖、或田间成株上的叶芽作茎尖剥离材料。
1.1.2 材料处理 将选择的马铃薯薯块材料放在温室或培养箱内进行催芽处理,36℃处理4~6周后制取脱毒材料,用紫外线照射脱毒材料10min。
1.1.3 培养基的制备 在每l000ml MS培养基中加GA3 0.2~0.3mg、6-BA 0.1~0.2mg、NAA 0.01~0.05mg,分装入管(或瓶)。
1.1.4 灭菌 在0.12Mpa/cm2压力下灭菌20~23min,冷却备用。
1.1.5 茎尖剥离接种 待芽萌发至2~3cm长时,选取粗壮的芽,放入纱布袋,用自来水冲洗1h后,在无菌条件下,用75%酒精浸2~3s,再用0.1%升汞液消毒3~6min(或用3%次氯酸钠液加2~4滴振荡消毒15~20min),取出用无菌水冲洗3~5次,用灭菌滤纸吸干材料表面水分,在体视解剖镜下用手术刀等工具轻、准、快速地剥去幼叶,切取带l~2个叶原基(0.1~0.4mm大小)的生长点,迅速接种入装有分化培养基的试管或培养瓶中,每管(瓶)放入1个生长点,并注明品种、茎尖号、接种日期。
1.1.6 培养条件 室温21~25℃,光照时数l0~12h/d,光照强度2000~30001x条件下培养120~140d。当看到明显生长的小茎,叶原基形成可见的小叶,随即转入无生长调节剂的培养基中。小苗继续生长并形成根系,发育成具3~4个叶片的小植株,就可继续扩繁。
1.1.7 记录 接种完成后,填写《组培苗茎尖脱毒登记表》。
1.2 病毒检测
采用酶联免疫吸附法(ELISA)由本单位先进行自检,然后送国家法定植检部门复检认定。以单株为系进行扩繁,苗数达150~200株时随机抽取3~4个样本,每个样本10~15株,用于检测的数量不低于总数的10%。根据检测结果出具检验结果报告单,如果脱毒苗没有检出PLRV、PVY、PVA、PVX、PVM或PVS和PSTVd等病毒和类病毒,则应批准进行组培苗生产。不合格的脱毒苗不得用于组培快繁。脱毒苗复检:继代扩繁中选留的脱毒苗,每年至少作一次病毒复检。
1.3 脱毒基础苗快繁
1.3.1 脱毒组培苗来源 经检测,确认脱除了所列病毒的组培苗。
1.3.2 培养基 用MS培养基,根据不同植物的不同生长阶段添加相应浓度6-BA,NAA等激素。
1.3.3 灭菌 在0.12Mpa/cm2压力下灭菌20~23min,冷却备用。
1.3.4 快繁 马铃薯组培苗将母苗剪切成1cm左右,带一叶一芽的茎段接种于继代培养基上,每瓶培养基接种10~15个茎段,待茎段长成高10cm左右小苗(培养15~30d),进行切段转接,如此循环,反复继代培养繁殖。
1.3.5 培养条件 室温21~25℃,光照时数l0~12h/d,光照强度2000~30001ux。
1.4 组培苗的保存
1.4.1 培养基 Ms+甘露醇20~80mg/L+卡拉胶5500mg/L+蔗糖30000mg/L,pH5.8,每瓶装培养基45~70ml,灭菌同1.1.4。
1.4.2 接种 选继代培养中生长健壮的组培苗,进行接种,接种方法同3.3.3,每瓶接种4~15个茎段或健壮苗。
1.4.3 培养 置弱光(1000lx)和较低温度(5~10℃)下保存。3~6个月转接1次。3~4年更新1次,用于快繁的脱毒组培苗。
2.1 场地准备
2.1.1 网室大棚 种植前检查大棚防虫网有无孔洞,设施设备有无损坏,出现问题及时报修,基质铺设及大棚维修完毕后再对大棚内部进行棚体消毒。
2.1.2 基质准备 种植基质为第一次使用基质,无需对基质消毒,若为使用过的基质,种植前用浓度为500~800倍液的氢氧化铜溶液对基质进行消毒处理,消毒后密闭网室大棚,15d后用清水冲洗基质,自然晾干待用。
2.2 炼苗
根据扦插计划任务中所需试管苗数量,要提前2~3d将试管苗从培养室转运到炼苗场按区域分品种进行堆放,并作好标识。
2.3 剪苗
2.3.1 组培苗剪苗
2.3.1.1 消毒 剪苗前用75%的酒精棉球擦拭手心手背、剪刀和苗盘。剪苗过程中若更换品种必须对剪刀和苗盘进行重新消毒。
2.3.1.2 剪苗 将培养瓶内的试管苗轻轻取出,用消毒的剪刀将试管苗从基部剪下,按顺序放入苗盘内。
2.3.2 扦插苗剪苗
2.3.2.1 消毒 剪苗前用75%的酒精棉球擦拭专用剪苗刀,剪苗过程中若更换品种必须对剪苗刀进行重新消毒。
2.3.2.2 剪苗 由工人按照管理人员要求,用自制专用剪苗刀,剪取种植后长出新叶,高度高于10cm的种苗茎尖,分品种放入塑料筐内。
2.4 打孔
种植前由工人使用专用打孔器,按照管理人员要求,对所需的苗床厢面进行打孔处理,基质厚度保证6~8cm,基质含水量保持在60%~70%之间。
2.5 扦插
2.5.1 组培苗的扦插 将苗盘内的试管苗放入0.1mol/L的NAA溶液中浸泡10min,然后按照一孔一苗的要求进行扦插,扦插深度2~3cm。
2.5.2 扦插苗的扦插 将塑料筐内的扦插苗放入清水中冲洗5min,保证叶片及茎部湿润,然后按照一孔一苗的要求进行扦插,扦插深度2~3cm。
2.6 浇水
试管苗和扦插苗扦插后需立即浇定根水,吸透为止,夏季气温超过30℃时,浇水后需加盖遮阳网遮阴,冬季或春季温度低于5℃时,需加盖塑料薄膜保温。
2.7 挂牌
每扦插完一个厢面由管理人员统一在苗床厢面上插入品种标示牌,标示牌上注明品种名称、扦插日期、种苗类型,并填写大棚品种分布图。
2.8 填写《生产记录单》
完整填写每日生产记录单,记录内容包括扦插品种、数量、种苗类型、扦插时间。
3.1 灌溉
大棚内马铃薯需水标准为:苗期扦插后基质相对湿度保持95%~100%,刚扦插的苗子每天必须浇水(早上8~9时,下午5~6时),防止萎蔫。苗子5~10d(冬季10d、夏季5d)后开始生根、长新叶。扦插15d后每隔1~3d浇1次透水。结薯期、马铃薯块茎膨大期,基质水分保持在70%~80%。收获前10d停止浇水。一般掌握阴雨天不浇,基质上部不干不浇,暴雨天气还应注意防雨。按本公司的灌溉经验,每4天开1次喷灌,每次喷洒时间控制在30min左右,春马铃薯每开2~3次喷灌后需人工补水1次,秋马铃薯需每开4~5次喷灌后人工补水1次。
3.2 施肥
每周施肥1次,施肥种类及数量根据大棚内薯苗生长情况而定。一般情况下组培苗未生根前不得施用任何化学肥料,以免烧苗。
3.2.1 幼苗期 小苗生根成活后(5~10d)要及时施肥,一般用0.2%磷酸二氢钾液或0.2%尿素喷施,1m2喷2~3kg,每周1~2次。
3.2.2 苗期 扦插20~35d后用130g复合肥+100g尿素对水150kg浇施,1m2浇大约5kg,一般隔7d喷1次。
3.2.3 孕蕾到开花期 扦插后35~45d,用200g复合肥、200g钾肥对水100kg喷施,1m2喷7kg左右,隔7d喷1次。
3.2.4 块茎膨大期、成熟期 一般用200g复合肥、200g钾肥对水100kg喷施,1m2喷施10~12kg,每7d喷施1次,每次喷施前将苗子浇湿,喷施后用水浇一下苗子,以防灼伤。收获前15~20d停止追肥。
3.2.5 填写施肥记录单 记录内容包括施肥日期、肥料种类、数量、操作员、备注。
3.3 增温/降温
春马铃薯在每天10时左右需打开天窗,同时关闭遮阳网;19时左右关闭天窗,同时打开遮阳网(遇雨天则需保持遮阳网打开)。秋马铃薯在棚内温度降低到20℃以下时,需关闭大棚的侧膜,同时在每天的10时左右打开天窗、18时左右关闭天窗,从而把大棚内的温度控制在25℃左右。
3.4 遮光/补光
马铃薯光照强度达40000lux时,需用遮阳网进行遮光处理。
3.5 除草
在马铃薯各个时期都需要注意除草,除草要做到“及时,干净”。
3.6 病虫害防治
3.6.1 预防 马龄薯主要病害有早、晚疫病,特别在阴雨天气发病率最高。条件好、大棚数量多的情况下,最好把组培苗和扦插苗分棚栽植,以便管理和减少晚疫病传染。组培苗栽后20d用800倍液杀毒矾预防晚疫病,栽后30d用杀毒矾、雷多米尔500倍液或72%霜霉疫净500倍液防治晚疫病,药剂交替使用,每周打1次。马龄薯主要害虫有蚜虫、白粉虱、螨类及地下害虫地老虎等。蚜虫防治要注意检查网室,及时防堵漏洞,严防蚜虫侵人传毒。温室白粉虱可用敌敌畏1000倍稀释液加溴氰菊酯3000倍稀释液喷雾,每隔3~7d喷1次,连喷3次。螨类可用三氯杀螨醇800倍液防治。地老虎在有土栽培条件下容易发生,而在无土栽培条件下则很少发生。
3.6.2 治疗 当大棚内出现病害发病中心则需仔细观察其病征病状,用相机记录发病状况,及时拔除病株,及时打药治疗。
3.6.3 做好防治记录 填写病虫害防治记录单。填写的主要内容包括打药日期、目的、药品名称、施药倍数、使用数量、使用地点、使用时间、操作人员、使用工具。照相记录。
4.1 割苗
根据各个大棚种薯生产日期、生育期确定割苗时间,割苗前10d停止浇水。分品种割苗,每割完一个品种,将薯苗运出大棚,转运薯苗前再次清理薯苗上的种薯,清理下来的种薯放入尼龙网袋并挂牌,吊牌上要注明品种名称及收获日期。
4.2 产量抽样
根据种植时间、品种、苗源类型确定抽样点及数量,每个品种按300m2抽一个样,每个样的抽样面积为5m2。收获前2d内完成所有品种抽样,确定合格薯与不合格薯的百分比,并填写《产量抽样单》。根据产量抽样结果预测产量。
4.3 收薯
将过筛后的种薯装入60目尼龙网袋放于原苗床,每袋可装满。根据苗床标示牌,填写吊牌,挂于尼龙袋上。
4.4 摊晾
由工人将种薯分品种运输至摊晾地放在规定的区域内,经管理人员复核后,安排工人摊晾。摊晾时将所有尼龙袋上的吊牌取下放入该尼龙袋所倒出的种薯上。种薯的摊晾厚度不超过3cm。
4.5 分级
为方便销售及估数的准确性,共分7级,级数及相对应的克数如下表示。0级:0.3g以下;1+级0.3~0.6g;1级:0.6~1g;2级:1~2g;3级:2~3g;4级:3~5g;5级:6~10g;6级:10~15g;7级:15g以上。注意,每分级完一个品种,需将筛网及分级机彻底清理一遍,防治遗留薯造成品种混杂。
4.6 装袋
将薯按级别分装于60目尼龙网袋内,每个品种均按5kg/袋分装。
4.7 挂牌
由分级人员称量完后挂牌。要求每袋挂两个吊牌,一个放于袋内,一个挂于袋外。挂牌所用吊牌上要注明品种名称、收获日期、级别、粒数、种源类型。
4.8 入冷库
记录各原原种品种、级别、各级别袋数、粒数、入库时间、入库人员、冷库号,填写《冷库入库记录单》。