水苏碱、胆碱及二者配伍对离体子宫收缩活动的调节作用

郑俊清 王玉清

益母草系唇形科植物益母草(leonurus japonicus houtt)的地上干燥部分，具有良好的收缩子宫、活血止血的作用，为我国历代医家用来治疗妇科病的要药[1-2]。目前，大量研究证实水溶性生物碱成分是益母草药理活性的物质基础，然而，关于其有效成分的系统研究较少，主要物质基础尚不明了，作用机制亦不清楚[3-4]。本研究前期采用化学分离、纯化方法从益母草开发而来的益母草注射液中得到水苏碱和胆碱两种成分，为了进一步明确二者对子宫活动的调节作用，本研究拟观察二者单独或配伍应用对大鼠离体子宫收缩的影响，为提升益母草药物的制备工艺、临床用药提供相关实验数据。

材料和方法

一、材料

1.实验动物：健康SD雌性大鼠购自内蒙古医科大学动物实验中心[动物生产许可证号：SCXK(蒙)2012-0002)]，体重(200±20)g。

2.药物与试剂：水苏碱、胆碱均由内蒙古医科大学药学院李刚教授提供，经结构鉴定，纯度≥99.5%。缩宫素注射液(生产单位：成都市海通药业有限公司，批号:1406032，规格：0.5毫升/2.5单位)，己烯雌酚注射液(生产单位：上海通用药业股份有限公司，批号:141126，规格：1 ml/2 mg)。

3.仪器：BL-420E生物机能系统(成都泰盟软件有限公司)，HU-1型张力(肌力)换能器(北京智鼠多宝生物科技有限责任公司)，HW-400E型恒温水浴平滑肌槽(成都泰盟软件有限公司)。

二、方法

1.试药与试剂配制：水苏碱、胆碱溶液采用0.9%生理盐水配成1 mg/ml；缩宫素溶液使用前用蒸馏水配成1 U/ml；己烯雌酚溶液用蒸馏水配成0.8 mg/ml混悬液；洛氏液的配置，即称取NaCl 9.2 g、KC1 0.42 g、CaCl20.24 g、NaHCO30.15 g、葡萄糖1.0 g，混匀，加入1 000 ml蒸馏水，搅拌至完全溶解。

2.大鼠离体子宫的制备[5]：取健康成年雌性未孕SD大鼠30只，适应性喂养3 d以确认健康后，随机分为正常大鼠离体子宫模型组(n=15)和采用缩宫素制造痉挛离体子宫模型组(n=15)。

于第4天腹腔注射己烯雌酚注射液，每日剂量为1 mg/kg，连续2 d，以造成动情期，并于第6天颈椎脱臼处死动物，迅速剖取子宫，轻轻剥离其上附着的结缔和脂肪组织。取离体子宫中间段2～3 cm，将一端以丝线固定于张力(肌力)换能器，另一端连接盛有温度为(37±0.5)℃的洛氏液20 ml的浴槽，向浴槽中通入(95% O2+5% CO2)的混合气体，控制流速为2～3个气泡/秒。调节螺母加1 g的负荷，并将换能器连接于生理记录仪，观察子宫活动情况，待子宫收缩逐渐平稳，自发节律恢复后，开始进行正常离体子宫收缩活动影响实验。

3.给药方法：子宫收缩逐渐平稳后，记录一段正常收缩曲线，然后分别加入水苏碱溶液(n=5)、胆碱溶液(n=5)或两者配伍溶液(n=5)，采用累加给药方式，其中水苏碱溶液和胆碱溶液的给药体积依次为40 μl、40 μl、80 μl，配伍溶液的给药体积依次为40 μl(水苏碱溶液20 μl+胆碱溶液20 μl)、40 μl(水苏碱溶液20 μl+胆碱溶液20 μl)、80 μl(水苏碱溶液40 μl+胆碱溶液40 μl)。上述各组药物分别试验5只大鼠，空白对照于各组加入药物刺激前采用与受试药物相同的累加给药方式加入相同体积的洛氏液刺激。每次加药后记录10 min离体子宫平滑肌的收缩活动。一组药物记录完后换去营养液，用洛氏液冲洗3次，待曲线稳定20 min 后，待子宫收缩稳定后，继续进行下一组受试药物的实验。若进行痉挛离体子宫收缩活动影响实验，则在子宫稳定后，先加入1 U/ml缩宫素160 μl，使子宫痉挛，记录10 min后，分别加入水苏碱溶液、胆碱溶液及二者配伍的高剂量的药液，观察痉挛离体子宫收缩活动的变化。比较给药前后离体子宫收缩活力、频率和抑制率的变化。子宫抑制率=(给药前活力-给药后活力)/给药前活力×100%。

结 果

一、水苏碱、胆碱对大鼠正常离体子宫平滑肌收缩的影响

与给药前相比，给药后水苏碱、胆碱单独刺激以及二者配伍刺激的各剂量均对大鼠正常离体子宫收缩活力无明显影响，给药前后差异无统计学意义，抑制率随着剂量的增大有降低的趋势。见表1。

表1水苏碱、胆碱对大鼠正常离体子宫平滑肌收缩活动力、抑制率的影响

试剂(μl)活动力(克/秒)给药前给药后抑制率(%)空白对照 —135142±43136134446±46432052水苏碱 40127437±38129130254±38823-142 80127437±38129131439±37143-231 160127437±38129132671±33836-347胆碱 40128351±40631127262±41827093 80128351±40631129439±37143-078 160128351±40631132871±33836-128水苏碱/胆碱(1∶1) 40117586±36147120206±36849-126 80117586±36147121651±34906-214 160117586±36147124750±38891-306

与给药前相比，给药后水苏碱、胆碱单独刺激和二者配伍刺激的各剂量均对大鼠正常离体子宫平滑肌收缩张力、张力最小值和频率无明显影响，给药前后差异无统计学意义。见表2。

二、水苏碱、胆碱对大鼠痉挛离体子宫平滑肌收缩的影响

与造模前相比，造模后大鼠的痉挛离体子宫收缩活力明显提高，当水苏碱、胆碱单独刺激和二者配伍刺激后痉挛离体子宫平滑肌收缩活力均显著低于造模后，抑制率变化明显，差异均有统计学意义。见表3。

与造模前相比，造模后大鼠痉挛离体子宫平滑肌的收缩张力和频率明显提高，当水苏碱、胆碱单独刺激和二者配伍刺激后痉挛离体子宫平滑肌的收缩张力和频率显著低于造模后，而收缩张力最小值显著高于造模后，差异均有统计学意义。见表4。

表2 水苏碱、胆碱对大鼠正常离体子宫平滑肌收缩张力、张力最小值和频率的影响

表3 水苏碱、胆碱对大鼠痉挛离体子宫平滑肌收缩活动力、抑制率的影响

注：与造模前相比，#P<0.05；与造模后相比，*P<0.05

表4 水苏碱、胆碱对大鼠痉挛离体子宫平滑肌收缩张力、张力最小值和频率的影响

注：#与造模前相比，P<0.05；*与造模后相比，P<0.05

讨 论

益母草作为“妇科圣药”，是唇形科益母草属的一种一年生或二年生草本植物，别名益母艾、茺蔚，味辛、微苦，入心包、肝经[6-7]。益母草注射液是采用现代提取分离纯化工艺将传统中草药“益母草”中的有效成分精制而成的纯中药单方制剂，具有活血调经、利尿消肿的功效。在现代临床运用中，益母草注射液常用于治疗女性生殖内分泌疾病，月经不调、痛经，小便不利以及产后出血等[8-9]。益母草注射液的药理作用是多种活性成分协同作用的合力结果，随着对其化学成分研究的日益深入，已发现许多具有药用价值的药物活性化合物，其中生物碱作为其主要有效成分，谢晓芳等[10]研究发现其水溶性生物碱部位是子宫收缩作用的主要物质基础。水苏碱是益母草注射液中含量较高的水溶性生物碱之一，约占其中85%，现代药理证实其具有多种药理作用，如促进子宫收缩、抗炎和抗内毒素、保护血管内皮细胞、保护肾脏和利尿等[11-12]。此外，在益母草注射液中还包括益母草碱、胆碱和葫芦巴碱等生物碱，赵小梅等[13]通过体外实验测定凝血四项值、血小板聚集率和纤溶活性证实胆碱和葫芦巴碱为益母草注射液抗凝的有效成分；李燕等[14]研究发现益母草注射液中水苏碱、胡芦巴碱、胆碱和总氨基酸存在兴奋子宫的活性。

虽然益母草注射液在临床中得到广泛应用，但是关于其生物碱对子宫调节作用的系统药理研究较少，并且不同的研究报道水苏碱对子宫活动的调节效果不一致。因此，为了进一步明确益母草注射液中的生物碱对子宫活动的调节作用，本研究在前期益母草注射液化学成分系统分离的研究基础上，采用成分配伍层面方法开展了水苏碱、胆碱及二者配伍对正常大鼠离体子宫活动的研究，较之既往单一成分的研究更系统、全面，对产品的二次开发有重要指导意义。本研究结果显示，在本实验的剂量范围内，水苏碱、胆碱单独刺激以及二者配伍刺激的各剂量均对大鼠正常离体子宫收缩活力无明显影响，抑制率随着剂量的增大有降低的趋势，同时对大鼠正常离体子宫平滑肌收缩张力、张力最小值和频率的均无明显影响。本研究结果提示水苏碱、胆碱以及二者配伍刺激对大鼠离体子宫在正常状态下无明显作用。而当采用缩宫素制造痉挛离体子宫模型后，水苏碱、胆碱单独刺激和二者配伍刺激均能显著降低痉挛离体子宫平滑肌收缩活力、收缩张力和频率，抑制率变化明显，而收缩张力最小值则显著提高。表明水苏碱、胆碱以及二者配伍对痉挛离体子宫有舒张作用，这可能与降低子宫收缩张力、频率和活动力以及提高收缩张力最小值有关。然而在痉挛状态下，水苏碱、胆碱单独刺激与二者配伍刺激的疗效相当，提示二者配伍对子宫的作用不存在协同作用。

综上所述，水苏碱、胆碱对正常大鼠离体子宫无明显作用，而对缩宫素引起的痉挛离体子宫强直性收缩却有舒张作用，表明二者对子宫活动的影响与子宫所处的机能状态不同有关。虽然水苏碱与胆碱配伍不存在明显的协同作用，但是二者均是益母草注射液中调节子宫活动的有效物质，提示今后可通过增加二者含量以提高药物的药理作用强度。

1 Shang X,Pan H,Wang X,et al.Leonurus japonicus Houtt:ethnopharmacology,phytochemistry and pharmacology of an important traditional Chinese medicine.J Ethnopharmacol,2014,152:14-32.

2 Xiong L,Peng C,Zhou QM,et al.Chemical composition and antibacterial activity of essential oils from different parts of Leonurus japonicus Houtt.Molecules,2013,18:963-973.

3 张雪,宋玉琴,杨雨婷,等.益母草活血化瘀化学成分与药理作用研究进展.药物评价研究,2015,38:214-217.

4 聂媛媛.对益母草成分及药理活性的研究.求医问药(学术版),2012,10:57-58.

5 李燕,谢晓芳,余泉毅,等.筛选益母草注射液缩宫成分.中成药,2015,37:1416-1422.

6 冯群,赵红,孙蓉.益母草临床应用和不良反应研究进展.中国药物警戒,2014,11:74-76.

7 程轩轩,桑雪雨,杨全等.不同炮制方法及提取溶剂对益母草有效成分含量的影响.中国医院药学杂志,2013,33:1850-1852.

8 杜舞英.益母草注射液联合缩宫素预防剖宫产产后出血的临床疗效及安全性分析.中国计划生育学杂志,2015,23:321-323.

9 姚叶珊,文斌,曾丽玲,等.益母草注射液联合缩宫素预防产后出血的效果.广东医学,2012,33:2501-2503.

10 谢晓芳,熊亮,李丹,等.益母草注射液有效部位对大鼠离体子宫活动的影响.中成药,2015,37:1103-1106.

11 Zhang C,Shan XL,Liao YL,et al.Effects of stachydrine on norepinephrine-induced neonatal rat cardiac myocytes hypertrophy and intracellular calcium transients.BMC Complement Altern Med,2014,14:1-9.

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14 李燕,谢晓芳,余泉毅,等.基于大鼠离体子宫活动的益母草注射液缩宫活性部位筛选.时珍国医国药,2015,2:288-291.