Survivin、p53在宫颈上皮内瘤变和宫颈癌组织中的表达及意义

李桂湖

宫颈癌是一种发生率较高的妇科恶性肿瘤疾病，其发生、发展与癌基因激活、抑癌基因失活之间存在密切的相关性关系[1]。Survivin是目前已知生理功能最为强大的凋亡抑制因子，可有效抑制Caspase-3、Caspase-7的活性功能，最终抑制细胞凋亡现象[2]。野生型p53基因在细胞凋亡、细胞分化、血管组织形成和DNA生理代谢等多个过程中均发挥着重要的作用，但其出现异常突变可使得正常生理功能丧失，具有癌基因的生理学活性作用，最终促进肿瘤疾病的发生、发展[3,4]。目前关于Survivin、p53与宫颈上皮内瘤变和宫颈癌的临床研究相对较少，因此本研究拟观察两者的表达情况，并判断其是否可作为早期诊断宫颈癌前病变的生物标志，进而评估疾病预后情况。

对象与方法

1.对象：2013年5月—2015年12月本院收治女性宫颈疾病患者195例，其中慢性宫颈炎40例，宫颈上皮内瘤变83例(CINⅠ期26例，CINⅡ期27例，CINⅢ期30例)，宫颈癌72例，均经病理组织检查均已确诊。本研究方案已通过院伦理委员会批准，患者均签署知情同意书。

2.实验仪器及试剂：兔抗人多克隆Survivin及抗体(工作液浓度1:100)、鼠抗人单克隆p53抗体(工作液浓度1:200)购自美国Santa Cruz公司；Elivision免疫组化试剂盒购自北京金桥生物技术有限公司，羊抗兔、羊抗鼠二抗及DAB显色试剂盒购自武汉博士德生物技术有限公司。

3.实验方法：采用免疫组织化学(Elivision二步法)法检测Survivin、p53在慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变和宫颈癌组织中的表达情况。采用10%甲醛溶液固定处理所有组织标本，石蜡包埋后连续切片，切片厚度为5 μm，梯度乙醇溶液水化处理，随后高温高压环境下修复作用3 min，采用3%双氧水溶液孵育作用10 min，PBS缓冲液洗涤组织切片3次，加入适量Survivin或p53一抗，室温环境条件下孵育作用2 h，随后加入适量二抗工作液，室温环境条件下孵育作用1 h，PBS缓冲液洗涤组织切片3次，DAB显色剂显色处理，最后使用苏木精溶液复染，封片后镜下观察，整个实验步骤严格遵守说明书进行操作。

4.染色结果判断方法：普通显微镜下观察组织切片的显色反应，Survivin阳性表现为细胞浆中出现淡黄色或棕黄色颗粒，p53阳性表现为细胞核中出现浅黄色或棕黄褐色颗粒，高倍镜下随机选择5个视野，根据阳性细胞数占整个细胞的百分比予以记分。0分：阳性细胞数百分比<5%；1分：5%～25%；2分：26%～50%；3分：51%～75%；4分：阳性细胞数百分比>75%。根据着色强度予以记分，1分：淡黄色，2分：黄色，3分：棕黄色。两者得分乘积即为阳性表达强度：0分：(-)，1～4分：(+)，5～8分：(++)，9～12分：(+++)。

5.统计学处理：均采用SPSS 17.0软件进行数据分析，率比较采用χ2检验或Fisher精确概率法，采用Spearman法分析两者之间的相关性。P<0.05为差异有统计学意义。

结果

1.Survivin在慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变和宫颈癌组织中的表达：Survivin在慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ期和宫颈癌组织中的阳性表达率分别为7.5%，30.8%，44.4%，60.0%，77.8%，呈依次升高趋势，差异有统计学意义，见表1及图1。

图1 Survivin在不同宫颈病变的表达 A.宫颈癌组织；B.宫颈上皮内瘤变；C.慢性宫颈炎

2.p53在慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变和宫颈癌组织中的表达：p53在慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ期和宫颈癌组织中的阳性表达率分别为5.0%，23.1%，37.0%，53.3%，72.2%，呈依次升高趋势，差异有统计学意义，见表2及图2。

图2 p53在不同宫颈病变的表达 A.宫颈癌组织；B.宫颈上皮内瘤变；C.慢性宫颈炎

3.Survivin、p53与宫颈癌的临床病理关系：宫颈癌Survivin表达阳性率在FIGO分期、间质浸润深度、淋巴结是否转移方面与差异；宫颈癌p53表达阳性率则在淋巴结是否转移、组织学类型及分级方面有差；宫颈癌鳞癌与腺癌Survivin表达阳性率差异无统计学意义，宫颈癌鳞癌与腺癌p53表达阳性率差异有统计学意义，见表3。

表1 Survivin在3种组织中的表达[例(%)]

注：与慢性宫颈炎比较，*P<0.05；与CINⅠ期比较，#P<0.05；与CINⅡ期比较，▲P<0.05；与CINⅢ期比较，○P<0.05

表2 p53在慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变和宫颈癌组织中的表达

注：与慢性宫颈炎比较，*P<0.05；与CINⅠ期比较，#P<0.05；与CINⅡ期比较，▲P<0.05；与CINⅢ期比较，○P<0.05

表3 Survivin、p53与宫颈癌的临床病理关系[例(%)]

注：与鳞癌、Ⅰ期、≤浅肌层、无淋巴结转移比较，*P<0.05；与Ⅱ期比较，#P<0.05

讨论

Survivin在调节和控制细胞周期、抑制细胞凋亡现象等方面起到相当重要的作用，可直接阻断Caspase-3、Caspase-7的生物学效应作用，同时还可有效抑制多聚ADP核糖聚合酶的生物学活性功能，进而抑制细胞出现凋亡，最终导致细胞发生异常增殖和恶性转化，与多数肿瘤疾病的产生和预后有着密切的相关性[5]。细胞研究结果显示[6]，Survivin表达水平过高可使得cyclin D1、C-myc表达水平显著性增高，进而导致细胞异常增殖和恶性转化。本研究发现宫颈癌组织中Survivin阳性表达率(80.6%)明显高于慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变组织，此结果提示Survivin在宫颈癌组织中的基因表达明显上调，使得细胞生长出现异常紊乱，有利于肿瘤细胞增殖和侵袭周围正常组织，因此，可知Survivin可作为早期诊断宫颈癌的实验室标志物[7]。此外本研究还发现，Survivin阳性表达率在FIGO分期、间质浸润

深度、淋巴结是否转移方面有差异，提示Survivin表达水平越高，则临床分期及病灶浸润深度越严重，更易侵袭周围正常组织并发生远处转移，导致术后生存期明显缩短，即Survivin表达水平过高预示宫颈癌患者预后情况较差。

p53与细胞周期蛋白(cyclins)相互结合可形成特异性的复合体，进而有效抑制依赖cyclins的相关激酶的生物学活性功能，导致细胞在G1期出现停滞或诱导细胞程序性死亡，最终清除可能发生癌变的异常细胞[8-9]。当p53基因出现异常突变时，可使得稳定蛋白质难以抑制细胞异常增殖过程，从而促进细胞呈恶性转化，使得p53基因由抑癌基因转为原癌基因[10]。但目前p53在宫颈癌患者预后情况方面的预测价值尚缺少相关报道，本研究发现，宫颈癌组织p53阳性表达率明显高于其他组织，提示p53基因突变与宫颈癌疾病的发生、发展有密切的相关性。此外研究还发现，宫颈癌p53表达阳性率在淋巴结是否转移、组织学类型及分级方面有差异，提示p53表达与宫颈癌的组织学类型、分级有一定相关性，且在淋巴结是否转移及病情预后方面具有一定预测价值。

综上所述，Survivin、p53与宫颈癌疾病的发生、发展有密切关系，尤其与淋巴结转移的关系更为密切，此外前者还与临床分期和病灶侵袭周围正常组织有关，后者则与肿瘤恶性程度有关，均可作为检测宫颈癌前病变的生物标志，并用于判断宫颈癌患者的预后情况。

(图1、图2见封底)

1 惠燕,黄利鸣,叶红.survivin在人宫颈癌前病变和宫颈浸润癌组织中的定量分析及其临床价值的评估.肿瘤防治研究,2008,35:39-42.

2 卢洪胜,甘梅富,张艳,等.宫颈癌前病变及宫颈癌组织Survivin和p16INK4A及p53表达的研究.中华肿瘤防治杂志,2009,16:810-813.

3 王晓英,黄永宏,张宏伟,等.Ki67、p53、Survivin在宫颈癌、宫颈上皮内瘤变及宫颈炎中的表达及意义.山东医药,2010,50:88-89.

4 雷蕾,叶斌,王西川.p16、p53和Ki67在宫颈癌中的表达及其临床意义.实用医院临床杂志,2014,11:123-125.

5 朱燕,杨其昌,刘宏斌,等.Survivin、bcl-2及p53蛋白在宫颈上皮内瘤变和宫颈癌组织中的表达及意义.实用癌症杂志,2008,23:138-140.

6 马宁,李小姝,张婵丽,等.Survivin与MIF在宫颈癌组织中的表达及意义.肿瘤基础与临床,2008,21:388-390.

7 张晶,王宇娟,霍俊玲,等.宫颈癌组织中Survivin的表达及临床意义的系统评价.中国循证医学杂志,2014,14:216-224.

8 郭建华,伍亚云,刘俊宏.p53、p16和C-myc基因表达在宫颈癌早期诊断中的价值.现代中西医结合杂志,2013,22:2518-2523.

9 王喜梅,罗光霞,张雪梅,等.宫颈腺癌HPVl8/18感染与ki67、p53蛋白表达的关系.实用癌症杂志,2009,24:22-25.

10 于永亮,尚亚非.p53蛋白表达对结肠癌术后肿瘤复发转移预后的关系.实用医技杂志,2007,14:5014-5015.