小建中胶囊对幽门螺杆菌体外抑菌作用的研究

2017-03-28 09:19刘东升王友华赵巧云朱振华
实用药物与临床 2017年3期
关键词:小建浸膏琼脂

刘东升,王友华,王 犇,赵巧云,朱振华,谢 勇

小建中胶囊对幽门螺杆菌体外抑菌作用的研究

刘东升1,2,王友华1,2,王 犇1,2,赵巧云1,2,朱振华1,2,谢 勇1,2*

目的 探讨小建中胶囊浸膏液在体外对幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)是否存在抑菌作用及其最低抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC)。方法 国际标准菌株NCTC11637和临床分离的4例多药耐药菌株及3例敏感菌株作为实验菌株。采用打孔法测定小建中胶囊对幽门螺杆菌体外是否有抑菌作用,并用琼脂稀释法测定小建中胶囊浸膏液对Hp菌株的MIC值。结果 小建中胶囊对Hp标准菌株和临床分离的敏感及耐药菌株体外均有抑菌作用,其MIC值为0.78~1.56 mg/mL,且对抗生素耐药和敏感菌株之间无差别。结论 小建中胶囊在体外对Hp有抑菌作用,有望用于Hp相关性疾病的治疗。

幽门螺杆菌;小建中胶囊;体外抑菌试验

0 引言

幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp),是一种定植于人体胃黏膜组织中的螺旋形杆菌,我国人群Hp感染率总体较高,Hp感染是导致消化性溃疡、慢性胃炎和胃癌等疾病的重要诱因。近年来,临床发现,在三联基础上联合中药治疗Hp感染,可以提高其根除率[1],但是中药对于耐药菌株是否有抑菌作用鲜有报道。笔者采用打孔法和琼脂稀释法进行小建中胶囊对幽门螺杆菌体外抑菌试验,探讨小建中胶囊对Hp的体外抑菌作用和最低抑菌浓度。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株来源 来自南昌大学第一附属医院消化研究所保存的国际标准菌株NCTC11637(菌株1),及从该所保存的2015年1-6月期间已行浓度梯度法(E-test)药物敏感检测的Hp临床分离株中,筛选出对阿莫西林、甲硝唑、克拉霉素、左氧氟沙星、四环素、莫西沙星、利福平以及阿奇霉素8种抗生素中3种或3种以上耐药的多药耐药菌4株(菌株2、菌株3、菌株4、菌株5)和全敏感菌株3株(菌株6、菌株7、菌株8)。

1.1.2 实验用药和主要试剂 小建中胶囊浸膏液(朗致集团贵州太和制药有限公司提供,纯化水作为溶媒,100 mL浸膏液中含有50 g药粉)、Karmali琼脂(英国OXOID公司)、Muller-Hinton琼脂(英国OXOID公司)、无菌脱纤维绵羊血(兰伯瑞生物技术有限公司)、E-test试纸条(法国生物梅里埃公司)。

1.1.3 实验设备 MCO-175M型三气培养箱(日本Sanyo公司)、生物安全柜(新加坡ESCO公司)、-80 ℃冰箱(日本Sanyo公司)。

1.2 方法

1.2.1 再次验证上述8株Hp的最小抑菌浓度(MIC) 取出在-80 ℃冰箱内保存的Hp菌株,解冻后取200 μL,用接种环均匀涂抹于Karmali琼脂培养基上,放置三气培养箱内培养,设置微需氧条件:温度37 ℃、O25%、CO210%、N285%,培养2~3 d。通过观察菌落形态,革兰染色,过氧化物、尿素酶及氧化酶试验,进行菌株鉴定。鉴定依据主要包括:菌落特征为无色透明、针尖样细小或融合成片,表面光滑湿润。革兰染色阴性,光镜下呈S形、弧形、海鸥状弯曲或短杆状。生化反应结果为尿素酶试验阳性、触酶试验阳性和氧化酶试验阳性。

经鉴定确定为Hp的菌株,调整浓度至108cfu/mL的菌悬液均匀涂抹于5%绵羊全血Muller-Hinton琼脂平板上,同时接种标准菌株NCTC11637作为质控。待水份吸收后,贴E-test试纸条,倒置平放于三气培养箱中培养,48~72 h后观察结果,获得多药耐药菌株和全敏感菌株。耐药的判定根据美国临床实验室标准委员会(NCCLS)的药敏试验标准判读细菌为耐药或敏感:MIC≥1 μg/mL定为阿莫西林耐药,MIC≥8 μg/mL定为甲硝唑耐药,MIC≥1 μg/mL定为左氧氟沙星耐药,MIC≥1 μg/mL定为克拉霉素耐药,MIC>2 μg/mL定为四环素耐药,呋喃唑酮抑菌圈直径≤7 mm定为耐药。质控菌株Hp NCTC11637质控范围见表1。

表1 质控菌株NCTC11637的质控范围

注:AC:阿莫西林,MZ:甲硝唑,CH:克拉霉素,LE:左氧氟沙星,TC:四环素

1.2.2 小建中胶囊浸膏液对Hp药物敏感实验 选取标准菌株NCTC11637(菌株1)和分离的多药耐药临床菌株(菌株2、菌株3、菌株4、菌株5)及全敏感菌株(菌株6、菌株7、菌株8),将菌株进行传代3~4次,扩大培养至实验所需,接种于含5%绵羊全血Muller-Hinton琼脂平板上,打孔,分别加入小建中胶囊浸膏液。琼脂稀释法分别在制作平皿的过程中将相应的小建中胶囊浸膏液进行10、20、40、80、160、320、640倍的稀释。第3、7天后观察药敏实验结果。打孔法测量抑菌圈直径,琼脂稀释法观察在平皿上有无菌落的生长。

2 结果

2.1 E-test法实验结果 见表2。

2.2 打孔法 见表3。

2.3 琼脂稀释法 见表4。

表2 所选菌株的MIC结果

注:MX:莫西沙星,RI:利福平,AZ:阿奇霉素

表3 小建中胶囊对Hp标准菌株和临床耐药菌株的抑菌效果

表4 小建中胶囊对Hp的体外最低抑菌浓度(mg/mL)

3 讨论

Hp感染是导致消化性溃疡、慢性胃炎的主要病因,根除Hp对于溃疡的愈合和治疗慢性胃炎、降低胃癌的发生率具有重要意义[2-5]。目前,临床上常用四联疗法作为临床根除Hp的首选方案[6],但随着抗生素的广泛使用,Hp对抗生素的耐药问题日益严重,而铋剂长期使用有便秘、神经毒性和肾毒性等不良反应。中药中许多治疗慢性胃十二指肠疾病的方剂具有抗炎、抗菌作用,并被证实可杀灭Hp。

Hp属于中医的“邪气”范畴。中医理论认为,“邪之所凑,其气必虚”。脾胃虚弱是Hp感染的病理基础。小建中胶囊源自张仲景《伤寒论》中的小建中汤,由桂枝、白芍、炙甘草、生姜、大枣组成,是国家批准的用于治疗胃及十二指肠溃疡的现代中成药。方中桂枝温阳祛寒,白芍养阴止痛,生姜温胃散寒,大枣补脾益气,炙甘草益气合中。现代药理学研究表明,桂枝、白芍、甘草、生姜均具有抗菌、抗病毒、抗炎、镇痛镇静的作用[7-11];白芍、甘草还可以抑制胃酸分泌、保护胃黏膜,抗溃疡[9,11];大枣可以增强免疫[12],诸药合用,共奏温中补虚、缓急止痛之功效,对Hp感染的胃黏膜损伤具有治疗作用[13]。

本研究结果表明,小建中胶囊对Hp临床耐药菌株具有体外抑菌作用,小建中胶囊对Hp体外具有抑菌作用,其最低抑菌浓度为1.56 g/L,小建中胶囊的常用剂量为3.6 g/d,其口服后,在胃内浓度将高于其对Hp的最低抑菌浓度1.56 g/L,因此,其作为抗Hp治疗的辅助药物,有望提高Hp的根除率。临床上常用小建中胶囊治疗胃炎和消化性溃疡[14-15],或可提高其对Hp感染患者的依从性和治愈率。但在抗Hp感染作用机制上尚需进一步探讨。

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Invitroactivity of Xiaojianzhong capsules against clinical isolates ofHelicobacterpylori

LIU Dong-sheng1,2,WANG You-hua1,2,WANG Ben1,2,ZHAO Qiao-yun1,2,ZHU Zhen-hua1,2,XIE Yong1,2*

(1.Digestive Department,First Affiliated Hospital of Nanchang University,Nanchang 330006,China;2.Jiangxi Institute of Gastroenterology & Hepatology,Nanchang 330006,China)

Objective To evaluate the activity of xiaojianzhong capsules against clinical isolates of antibiotic-resistant and antibiotic-sensitiveHelicobacterpylori(Hp).Methods In thisinvitrostudy,Xiaojianzhong capsule was investigated for bacteriostic activity using agar dilution or E-test methods.Four antibiotic-resistant strains and 3 antibiotic-sensitive strains and 11 637 standard strains were examined.Results Xiaojianzhong was active against Hp standard strains and clinical isolates of antibiotic-resistant and antibiotic-sensetive Hp.To xiaojianzhong capsules,the MIC ranged from 0.78 mg/mL to 1.56 mg/mL.Conclusion Xiaojianzhong capsules have inhibitory activity on antibiotic-sensitive and antibiotic-resistant Hp strainsinvitro.

Helicobacterpylori;Xiaojianzhong capsules;Invitroexperiment

2016-08-30

1.南昌大学第一附属医院消化科,南昌330006;2.江西省消化疾病研究所,南昌330006

江西省科技支撑计划项目(2009BSB11214);江西省教育厅项目(GJJ10327)

10.14053/j.cnki.ppcr.201703006

*通信作者

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