蒙药槟榔十三味丸中总黄酮含量的测定

黄雪秋+赵玉英

摘 要：运用紫外分光光度法在510nm波长下以硝酸铝-亚硝酸钠-氢氧化钠作为显色试剂、芦丁作为对照品，测定蒙药槟榔十三味丸（高尤-13）中总黄酮含量。结果表明，在0～0.076mg/ml浓度范围内黄酮含量与吸光度局呈良好的线性关系，回归方程：y=0.011x+0.014，r2=0.999。通过不同浓度乙醇溶液溶解样品发现，80%乙醇提取的样品所含黄酮量最高，其黄酮含量为5.352μg/g；平均回收率为105.18%。

关键词：槟榔十三味丸；总黄酮量；芦丁

DOI：10.16640/j.cnki.37-1222/t.2017.04.042

黄酮类化合物通常以游离态或糖苷的方式存在，是植物生长过程中所产生的一类次生代谢物，黄酮类化合物普遍存在于植物体各个部位，由于不同植物或同一植物不同部位的黄酮类化合物都不相同，是以黄酮类化合物具有数量、种类繁多，结构复杂的特点，因其特有的化学结构而对生物体的细胞产生许多重要的生化作用[1]。黄酮类化合物具有广泛的生物活性，随着人们对黄酮类化合物理化性质日益深入的探究，发现黄酮类化合物对抗炎、抗病毒、抗辐射、解热、保肝以及对肾脏、心脑血管、肿瘤、癌症等方面的疾病均有显著作用[2-6]。

蒙药槟榔十三味丸（高尤-13）由槟榔、广枣、沉香、丁香、木香、干姜、胡椒、當归、筚茇、肉豆蔻、制草乌、紫硇砂、葶苈子13种草药精制而成，适用于心悸、失眠，精神失常、游走刺痛等病症[7-8]。本实验以芦丁为对照品，以NaNO2-Al（NO3）3-NaOH为显色剂，在510nm处测定蒙药槟榔十三味丸中黄酮的总含量。

1 材料与方法

（1）材料：芦丁（百灵威化学试剂公司）、 槟榔十三味丸（内蒙古蒙药股份有限公司，批号：100319） 、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠等（分析纯）。（2）仪器：722S可见分光光度计（上海精密科学仪器有限公司）、KQ-250B超声波清洗器、电子天平（精天-JA1003B）。

2 试验方法

（1）实验原理。黄酮类化合物与NaNO2和Al（NO3）3在碱性条件下可形成红色的稳定络合物，且在510 nm处有最大吸收，该配合物与黄酮类物质的浓度呈线性关系。

（2）标准曲线绘制。1）配制芦丁标准溶液：精密称取芦丁标准品24mg，置于100ml容量瓶中，加入80%乙醇溶解，定容。2）配制浓度为5%的亚硝酸钠溶液和浓度为10%的硝酸铝溶液。3）制备标准曲线：精确量取0ml、1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml、7ml、8ml芦丁标准液，分别置于25ml容量瓶中，加入5%的亚硝酸钠溶液0.6ml，静置5分钟，加入10%的硝酸铝溶液0.6ml，静置5分钟，加入4%的氢氧化钠溶液8ml后加水定容，在510nm处测定吸光度。以吸光度为纵坐标，横坐标为含量，绘制标准曲线，计算出回归方程。回归方程为y=0.011x+0.014，r=0.9994，表明在0～0.076mg/ml浓度范围内黄酮含量与吸光度局呈良好的线性关系。

（3）供试品的制备。准确称取4份质量为1.0g的槟榔十三味丸，分别置于50ml容量瓶中，用60%乙醇溶液、70%乙醇溶液、80%乙醇溶液和90%的乙醇溶液溶解样品，在超声波中超声震荡30分钟后取出，定容。

（4）槟榔十三味丸中总黄酮含量的测定。准确吸取1ml样品溶液于25ml容量瓶中，加入5%的亚硝酸钠溶液0.6ml，放置5分钟后，加入10%的硝酸铝溶液0.6ml，再放置5分钟，加入8ml 4%的氢氧化钠溶液，加水定容，在510nm处测定其吸光度，并带入标准曲线计算总黄酮量，重复测定三次，计算平均值。结果见表1。

由表1可知，80%乙醇溶解的样品所含黄酮量最多。

（5）精密度试验。精确吸取1ml 80%乙醇提取的样品，根据2.4的方法测定，重复操作5次，计算 RSD=0.203%。

（6）回收率试验 。80%乙醇溶解的样品中加入芦丁标准品，进行回收率实验，结果示于表2中。

由此表2可以得出，用此种方法测定槟榔十三味丸黄酮含量的结果是令人满意的。平均回收率为105.18%，RSD=0.02%。

（7）稳定性试验。精确吸取2ml 80%乙醇提取的槟榔十三味丸样品，按2.4方法，分别在5、10、15、20、25、30min时，测定吸光度。RSD=0.85%。

3 结果与讨论

本文运用分光光度法，以芦丁对照品，亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠为显色剂，在510nm处测定蒙药槟榔十三味丸中黄酮的总含量。结果显示，80%乙醇溶解的槟榔十三味丸中的所含黄酮量最高，其黄体酮含量为5.352 μg/g，且精密度、回收率、稳定性试验显示，分光光度法测定蒙药槟榔十三味丸方法操作简单，结果精确可靠，且在30分钟内稳定。

参考文献：

[1]钟建青，李波，贾琦，李医明，朱维良，陈凯先.天然黄酮类化合物及其衍生物的构效关系研究进展[J].药学学报，2011，46（06）： 622-630.

[2]闵巍巍，张作法.黄酮类化合物的药理作用[J].蚕桑通报，2007（04）：01-03.

[3]黄杰，汤有宏，陆玮，刘国英.一种测定亳菊提取液中总黄酮含量的方法[J].安徽农业科学，2015，43（34）：90-91.

[4]池玉梅，居羚，邓海山，姚卫峰，陆丹.分光光度测定总黄酮法的适用性[J].分析化学，2010（06）：893-896.

[6]赵秀玲.黄酮类化合物的研究进展[J].江苏调味副食品，2010，27（05）：17-22.

[6]马陶陶，张群林，李俊.中药总黄酮的含量测定方法[J].安徽医药，2007（11）：1030-1032.

[7]赵玉英，张良，孙福祥，王志民.槟榔十三味丸中微量元素的初级形态分析[J].化学试剂，2014（02）：150-152.

[8]佟海英，乌吉斯古冷，包伍叶，白亮凤，胡日乐巴根，李婧.蒙药槟榔十三味丸（高尤-13）的方药组成考证[J].世界科学技术-中医药现代化，2014（09）：1916-1921.