阿奇霉素肠溶胶囊的含量测定方法学研究

胡玉庆

（哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心）

摘 要：目的：研究并验证HPLC法检查阿奇霉素肠溶胶囊的含量测定方法。方法：采用十八烷基键合硅胶柱；以磷酸盐缓冲溶液（取0.05mol/L的K2HPO4溶液，用20%的H3PO4溶液调节溶液pH值至8.2）-乙腈（45：55）为流动相；柱温为30℃；检测波长为210nm。结果：方法的专属性、准确度、精密度及耐用性良好；在阿奇霉素的进样量为10.024μg～100.24μg范围内，进样浓度与色谱峰面积线性关系良好，平均回收率为99.18%，RSD为0.59%（n=9）。结论：本方法简便、快速、灵敏，可有效检测阿奇霉素肠溶胶囊的含量。

关键词：阿奇霉素；含量测定；HPLC

阿奇霉素是一种属于大环内酯的抗生素，于1980年被发现，1981年推出，又翻译作阿红霉素、阿齐红霉素。与红霉素等药物作用机理类似，对细菌的蛋白质合成进行抑制，从而产生较强的抑菌作用，对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌、厌氧菌等均具有非常明显的杀菌作用。阿奇霉素是一种在临床上使用非常广泛的抗生素，常用于治疗耳部的细菌感染、鼻窦炎、肺炎、咽喉细菌感染等。

国家药典委员会发布了阿奇霉素肠溶胶囊的国家標准征求意见稿，标准中采用高效液相色谱法检测阿奇霉素肠溶胶囊中阿奇霉素的含量，本研究将对该方法进行详细的方法学研究，以判断该方法是否适合于阿奇霉素肠溶胶囊产品质量控制。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪（安捷伦1200）；色谱柱：十八烷基键合硅胶柱；阿奇霉素肠溶胶囊（批号：160801、160802、160803，实验室自制）；阿奇霉素对照品（含量为100%，批号：130593-201303），阿奇霉素系统适用性对照品（批号：130609-201504），均购自中检所。

甲醇、乙腈均为色谱级；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

本品的含量检查方法参照国家药典委员发布的阿奇霉素肠溶胶囊标准征求意见稿中色谱条件进行。

2.1 色谱条件

色谱柱：十八烷基键合硅胶柱；以磷酸盐缓冲溶液（取0.05mol/L K2HPO4溶液，用20%的H3PO4溶液调节溶液的pH值至8.2）-乙腈（45：55）为流动相；柱温控制为30℃；检测波长设定为210nm；流速：1.0ml/min；进样量50μl。

稀释液：磷酸二氢铵溶液（称取磷酸二氢铵1.73g，加水溶解并稀释至1000ml，用氨试液调节pH值至10.0±0.05）-甲醇-乙腈（7：7：6），混合均匀。

2.2 供试品溶液的制备

取本品胶囊20粒，小心倾出胶囊的内容物，研细粉使之混合均匀，精密称取适量（约相当于阿奇霉素0.1g），加入到100ml的量瓶中，加入适量的稀释液超声溶解后，再加入稀释液稀释至刻度，振摇使混合均匀，用滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.3 对照品溶液的制备

取阿奇霉素对照品适量，精密称定，加入适宜的量瓶内，用稀释液溶解并定量稀释制成每1ml中约含阿奇霉素1mg的溶液，振摇使混合均匀，作为对照品溶液。

2.4 阿奇霉素系统适用性对照品溶液的制备

取阿奇霉素系统适用性对照品适量，精密称定，加入适宜的量瓶内，先加入适量的乙腈溶解，再用乙腈稀释制成每1ml中约含10mg的溶液，作为系统适用性对照品溶液。

2.5 系统适用性试验

精密量取阿奇霉素系统适用性对照品溶液50μl注入色谱仪，记录的色谱图应与标准图谱一致。

结果：取阿奇霉素系统适用性对照品溶液色谱图与标准图谱一致，符合要求。

2.6 专属性实验

按照处方量精密称量本品中的辅料，按照供试品溶液的配制、稀释方法配制辅料空白溶液，精密量取50μl注入色谱仪，记录色谱图。

结果：辅料和溶剂在阿奇霉素出峰处无干扰。

2.7 溶液稳定性试验

取供试品溶液分别于0、1、2、4、6小时进样，考察各个时间点溶液中阿奇霉素峰峰面积的RSD%，验证阿奇霉素供试品溶液的稳定性。

结果：阿奇霉素峰面积6小时内RSD为1.4%，结果表明阿奇霉素含量测定溶液在6小时内稳定性良好。

2.8 线性试验

精密称取阿奇霉素对照品适量，分别配制成每1ml分别含阿奇霉素浓度为0.2mg、0.6mg、1.0mg、1.4mg、2.0mg的对照品溶液，分别进样50μl，记录谱图。以阿奇霉素的峰面积为纵坐标，以阿奇霉素对照品的进样量为横坐标，计算线性回归方程及线性相关系数。

结果：阿奇霉素线性方程为：y=114661x-125699，r=0.9999；表明该方法阿奇霉素进样量在10.024μg～100.24μg范围内均线性关系良好。

2.9 定量限试验

取2.8项下的对照品溶液进一步稀释，精密量取50μl注入高效液相色谱仪，以信噪比10：1时浓度计算进样量为检测限。

结果：将2.8项下浓度最低的对照品溶液稀释适宜的倍数后，当其色谱峰信噪比即约为10：1时，由该溶液的浓度计算出阿奇霉素的检测限为10.024ng。

2.10 回收率试验

取本品样品9份（每份约含阿奇霉素50mg），分成3组，置100ml容量瓶内，分别精密加入阿奇霉素对照品适量，按照供试品溶液稀释方法配制，使每1ml溶液中含阿奇霉素对照品的加入量分别为0.4mg、0.5mg、0.6mg，并按照规定的方法分别配制对照品溶液，量取以上各溶液50μl，按照以上检测条件分别进样检测，记录谱图，计算回收率。

结果：平均回收率为99.18%，RSD为0.59%，说明本方法耐用性较好。

2.11 中间精密度试验

取阿奇霉素胶囊样品，按照标准中规定的方法配制系统适用性对照品溶液、阿奇霉素对照品溶液和供试品溶液，分别由不同人员、不同仪器、不同日期按照规定的检测条进样检测，记录谱图，计算RSD%。

结果：不同人员、不同仪器、不同日期分别检测阿奇霉素含量结果间RSD为1.16%，表明本方法中间精密度良好。

2.12 重复性试验

取阿奇霉素胶囊样品，按照标准中规定的方法配制系统适用性对照品溶液、阿奇霉素对照品溶液和供试品溶液各6份，按照规定的检测条进样检测，记录谱图，计算RSD%。

结果：阿奇霉素肠溶胶囊6次含量测定结果间RSD为1.32%，表明本方法重复性良好。

2.13 耐用性试验

取阿奇霉素胶囊样品，按照规定的方法配制系统适用性对照品溶液、阿奇霉素对照品溶液和供试品溶液，分别调整流动相的流速为1.0ml/min、0.8ml/min、1.2ml/min；调整流动相比例分别为40：60，45：55，50：50；柱温分别为25℃、30℃、35℃；检测波长分别为208nm、210nm、212nm；分别精密量取以上各溶液50μl，按照以上检测条件分别进样检测，记录谱图，考察耐用性。

结果：液相各检测条件轻微改变后，阿奇霉素肠溶胶囊含量测定结果无明显差异，说明本方法耐用性较好。

2.14 阿奇霉素肠溶胶囊含量测定

取三批样品，检查阿奇霉素肠溶胶囊含量，结果三批含量结果分别为99.23%、99.86%、100.28%。

3 讨论

本品的含量测定参照国家药典委员会阿奇霉素肠溶胶囊标准征求意见稿中方法进行检查。方法学验证结果表明，方法的专属性、准确度、中间精密度、重复性、耐用性较好，检测灵敏度较高。该方法简便、快捷，可准确检测阿奇霉素肠溶胶囊的含量。

参考文献：

[1] 国家药典委员会，阿奇霉素肠溶胶囊标准征求意见稿.