注射用炎琥宁有关物质检查方法研究

张庆昆

摘 要：目的：建立注射用炎琥宁有关物质的检查方法。方法：采用高效液相色谱（HPLC）法研究注射用炎琥宁中有关物质的含量；色谱柱条件为ODS HYPERSIL-C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），以0.05%的磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH值在2.50±0.05范围内）-甲醇（330∶650）作为流动相；在251nm的波长下进行检测；设定流速为1.0mL/min。结果：注射用炎琥宁与各已知杂质及其他讲解产物可明显的分离开，且系统适用性良好，表明该法用于注射用炎琥宁有关物质的测定是可行的。结论：该法在对炎琥宁有关物质的检查上简便操作，专属性强，灵敏度较高，结果准确可靠，重现性好，可用于注射用炎琥宁有关物质含量的检查。

关键词：炎琥宁；有关物质；检查方法

高效液相色谱法1985年被《中国药典》收录，是药物分析中常用的一种检测分析方法，其以均匀规则的颗粒（通常直径在10μm以下）作为固定相，以流动相作为载体通过高压输液泵输送，利用不同组分被流动相携带时对应的移动的速度不同，而将各组分进行分离和检测。注射用炎琥宁是将穿心莲内酯从草本植物穿心莲中提取出来，经部分合成后制成穿心莲内酯半酯单钾盐，该成分生物活性较高，投加适量的辅料后制成的冻干制剂，该药为抗病毒药，可增强机体的抗菌的能力，清热解毒、镇静消炎作用明显，临床上主要用于病毒性肺炎、扁桃体炎、病毒性上呼吸道感染、急性细菌性痢疾等症状的抗病毒治疗[1]。杂质的存在给药物的实际疗效和稳定性带来了影响，甚至危害人体健康，造成药物的不良反应。笔者通过高效液相色谱法（HPLC）对该药品中的有关物质进行检查，对注射用炎琥宁的产品质量进行有效的控制。现做如下报道：

1.仪器与试药

1.1 仪器

安捷伦1260 Infinity液相色谱系统（自动进样器，并具有动态载样和清洗功能），安装了安捷伦实验室顾问软件，配套全新光学设计的UV检测器、ODS HYPERSIL-C18色谱柱；

1.2 试剂与药品

注射用炎琥宁（哈尔滨珍宝制药有限公司；样品批号：20160107、20160108、20160109）及其对照品（批号1503208，纯度为99.5%）；试验用水为超纯水，甲醇为色谱纯，其余所用分析试剂均为分析纯。

2.实验方法与结果

2.1色谱条件[2]

CAPCELL PAK UG80-C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm），以1.0mL/min的稳定速度作为流动相0.05%的磷酸二氢钾溶液（用磷酸调节pH值在2.50±0.05范围内）-甲醇（330∶650）的流速，甲醇（深圳市科天化玻仪器有限公司，色谱纯）；25℃柱温下，以20μL作为每批进样量，在251nm波长下进行检测。

2.2储备液的制备

2.2.1制备供试品储备液

精密称取100mg注射用炎琥宁放至500mL容量瓶中，用流动相0.05%的磷酸二氢钾溶液-甲醇（330∶650）将其全部溶解并稀释至对应刻度定容，摇匀后得到1mL溶液中含0.20mg注射用炎琥宁的溶液作为供试品储备溶液。

2.2.2制备对照品溶液

精密量取供试品溶液5mL，至500mL容量瓶中，加入上述流动相稀释至对应刻度，摇匀后作为对照品溶液。

2.3线性关系及精密度试验[3]

将对照品减压干燥12h，获得脱水的穿心莲内酯琥珀酸半酯對照品，精密称定适量该对照品，按2.2.1方法进行稀释，分别制成浓度为20、40、80、100、200、300mg/L的对照品溶液品，将以上不同浓度的对照品溶液在“2.1”条件下分别抽取20μL进样，将浓度与其对应的峰面积进行线性回归计算，得出方程：A=0.0874X+0.4034（r=0.99999，n=9），20～300μg/mL范围内穿心莲内酯琥珀酸半酯浓度与对应的峰面积线性关系良好。精密量取在“线性关系”内同一浓度的对照品溶液，在上述色谱条件下连续进样6次，每次进样20μL，记录峰面积，RSD为0.19%，表明精密度良好，详见表1。

2.4样品有关含量测定及限度[4]

在3批供试品储备液中各选取3支共9个样品，稀释为80mg/L的供试品溶液，同样在“2.1”的指定条件下进样20μL，根据对应的峰面积，带入线性回归方程得出分析结果，详见表2。

2.5重复性试验

取单批次（批号20160108）注射用炎琥宁供试品储储备液，按以上方法，单独测定6份，每份注射用炎琥宁含量（%）分别为98.07、98.18、97.04、98.15、97.26、97.23，平均97.66mg/g，RSD为0.58%，有良好的重复性。

2.6稳定性试验[5]

取线性关系下的注射用炎琥宁供试品溶液，用流动相稀释成高、中、低（100，10，1.0mg/L）3个浓度，阴凉条件下保存，在0～8h内，每隔2h液相色谱仪进样分析，以峰面积变化考察样品稳定性，RSD为0.45%。说明本品在8h内稳定较好。

3.讨论

有关文献提供线索指出以醋酸盐-乙腈系统、乙腈-0.01mol/L磷酸盐系统为流动相时，检测所得峰会受到其他杂峰干扰，分离效果不尽如人意，根据不断的实验调整，选取0.05%的磷酸二氢钾溶液（pH 2.50±0.05）-甲醇（330∶650）为流动相，峰形有良好的对称性且与其他峰形明显分开[6-8]。

本次检测结果显示，高效液相色谱法在测定注射用炎琥宁含量的领域很有可行性，通过多次比较试验，优化了部分检测方法，提高其质量检验的准确度，通过对实验数据的分析，该方法在控制药品质量方面很有帮助，且对样品检测条件无特殊要求要求，仪器及操作条件很容易满足，操作方便，且有良好的重现性和专属性[9-10]。本实验方法研究可作为注射用炎琥宁含量的检验的参考，并期待随着技力量平和科技水平的不断发展，该方法能有进一步的突破，为人类创造更好的经济、社会效益。

参考文献

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