HPLC-UV测定法测定多西他赛注射液药物含量

邢亚群，陈卫东

·论著·

HPLC-UV测定法测定多西他赛注射液药物含量

邢亚群1，2，陈卫东1

目的：建立HPLC-UV法测定多西他赛注射剂中多西他赛含量。方法:采用 COSMOSIL 5C18-MS-II色谱柱(5 μm，250 mm×4.6 mm)，以0.1%磷酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相，等度洗脱，流速1.0 mL/min，柱温30℃，紫外检测波长230 nm。结果: 在选定条件下，多西他赛峰与内标紫杉醇峰分离良好，两者峰面积之比与多西他赛浓度在0.5～32 μg/mL范围内具有良好线性关系，r=0. 9999；平均回收率在100.1%～103.9%，RSD<3.7%。结论:经方法学验证表明，该方法可用于多西他赛注射液中药物含量测定。

多西他赛; 紫杉醇; 含量测定； 高效液相色谱法

多西他赛是已上市的一种紫杉烷类抗癌药物，主要通过破坏肿瘤细胞的有丝分裂而达到抗肿瘤效果[1]。多西他赛作为第二代的紫衫烷类药物，具有广泛的抗肿瘤活性，多西他赛对乳腺癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、宫颈癌、卵巢癌、胃癌等都有良好的临床疗效[2]。目前临床上多将多西他赛与顺铂、奥曲肽、奥沙立铂[3-5]等抗癌药物联合使用，来增强治疗效果。但多西他赛也能引起严重的毒副反应，如骨髓抑制、过敏反应、体液潴留、脱发、乏力、黏膜炎、关节痛或肌肉痛、低血压、胃肠道反应与恶心、呕吐或腹泻等[6-7]。尽管多西他赛在临床上较为常用，但其价格比较昂贵，为指导其临床用药安全和合理用药，本实验以紫杉醇为内标，采用HPLC-UV法测定多西他赛注射液中多西他赛含量，建立了注射用多西他赛含量的方法，从而对其质量进行监督和检测。且该方法能准确测定出多西他赛注射液中多西他赛含量，操作简单，定量准确，现报告如下。

1 仪器与试剂

1.1 仪器 SPD-15C岛津高效液相色谱仪(日本岛津公司,批号465-04200)，G1314A型VWD紫外检测器；AB135-S型十万分之一天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)；XW-80A微型涡旋混合器(上海沪西分析仪器厂有限公司)；BCD-225CHC冰箱(合肥美菱股份有限公司)，Milli-Q Gradient A10超纯水系统(密理博(上海)贸易有限公司)。

1.2 试剂 多西他赛标准品(江苏恒瑞医药有限公司，批号626150205)；紫杉醇标准品(中国食品药品检定研究院，批号100382-201102，纯度99.6%)；多西他赛注射液(齐鲁制药有限公司，规格：1 mL:40 mg,批号5030021TB)；甲醇(色谱醇，上海星可高纯溶剂有限公司，批号021141201)；乙腈(色谱纯,天津市彪仕奇科技发展有限公司)；磷酸为分析纯；实验用水均为Milli-Q超纯水机制备。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 COSMOSIL 5C18-MS-II色谱柱(5 μm，250 mm×4.6 mm)；流动相：0.1%磷酸水溶液(A)-乙腈(B)；检测波长：230 nm；流速：1 mL/min；柱温：30℃；进样量：20 μL。

2.2 溶液配制

2.2.1 多西他赛标准品的配制 精密称取多西他赛标准品1.10 mg，置于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度,摇匀，即得浓度为110 μg/mL的多西他赛标准品贮备液，逐级稀释配成0.5 μg/mL,1 μg/mL,2 μg/mL,4 μg/mL,8 μg/mL,16 μg/mL,32 μg/mL的溶液各1100,550,550,550,550,550,550 μL，4℃避光保存备用。

2.2.2 内标溶液的配制 精密称取紫杉醇标准品0.5 mg，置于5mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得浓度为100 μg/mL内标贮备液，4℃避光保存备用。

2.2.3 多西他赛供试品的配制 精密移取多西他赛注射液10 μL，用流动相稀释至25 μg/mL，4℃避光保存备用。

2.3 专属性考查 在一定的条件下，取空白辅料加紫杉醇对照品溶液，空白辅料加多西他赛和紫杉醇对照品溶液，多西他赛注射液加紫杉醇对照品溶液，前处理过后，按照“2.1”项下色谱条件进样分析。进样前过0.22 μm滤膜过滤。色谱图见图1，辅料，紫杉醇对照品在多西他赛峰处无干扰。

A:多西他赛注射液加紫杉醇对照品样本；B:空白辅料加多西他赛标准品和紫杉醇对照品样本；C:空白辅料加紫杉醇对照品样本。图1 色谱图

2.4 线性关系考察 于1.5 mLEP管中依次精密加入按“2.2.1”配制好的多西他赛标准工作液，浓度分别为0.5 μg/mL,1 μg/mL,2 μg/mL,4 μg/mL,8 μg/mL,16 μg/mL,32 μg/mL，并依次加入22 μL，11 μL,11 μL，11 μL，11 μL,11 μL，11 μL内标紫杉醇溶液，按照“2.1”项下色谱条件进样分析，以多西他赛的峰面积与内标峰面积之比(Y)为纵坐标，多西他赛的浓度(X)为横坐标，进行线性回归。测定供试品中多西他赛的线性范围。得到回归方程为：y=0.242x-0.02129(r=0.9999),结果表明：在0.5～32μg/mL范围内，多西他赛浓度与峰面积的线性关系良好。

2.5 精密度 按标准曲线确定的范围，于1.5 mLEP管中分别加入适量空白辅料，依次精密加入不同浓度的多西他赛标准工作液及紫杉醇溶液，制备成高、中、低浓度(27.2，22.0，13.2 μg/mL)的多西他赛样品，各6份，按照“2.1”项下色谱条件依次进样测定。各浓度与内标的峰面积的相对标准差(RSD)分别为1.20%，1.20%，3.74%。

2.5.1 重复性 取同一批供试品，用甲醇溶液(批号：021150303)平行配置成25 μg/mL的样品6份，按2.1的色谱条件，依次进样测定。测得平均含量(标示量%)为114.41%，RSD为0.22%。

2.5.2 中间精密度 取同一批供试品，由不同分析人员，在不同实验室照2.5.1下的方法，按2.1的色谱条件，依次进样测定。测得平均含量(标示量%)为109.16%，RSD为0.96%。

2.6 回收率 按标准曲线确定的范围，于空白辅料中加入适量的多西他赛标准品工作液和紫杉醇溶液用流动相配制成高、中、低、浓度(30.0，20.0，10.0μg/mL)的样品，各6份，经处理后依次进样测得多西他赛峰面积与内标峰面积比值。按照标准曲线，多西他赛峰面积与内标峰面积比值对应的多西他赛浓度和真实浓度的比值即为该仪器方法的回收率。按内标法分别测定并计算回收率及RSD。平均回收率分别为：103.07%，103.92%，109.78%；RSD分别为：3.48%，4.12%，4.05%。

2.7 稳定性实验 按标准曲线确定的范围，取“2.5.1”项下制备的25 μg/mL的样品，置于室温下，于不同时间(0,2,4,6,8，16,24 h)分别依次进样测定。结果表明RSD均小于1%。

3 多西他赛含量测定

按标准曲线确定的范围，取“2.2.3”项下制备的供试品溶液，平行进样三次，结果各批样品中多西他赛标示百分含量分别为94.50%，109.78%，109.16%。结果表明，多西他赛含量符合标准规定。

4 讨论

4.1 紫外检测波长的确定 通过查阅文献得知，大部分文献表明多西他赛在220～240 nm波长段有最大紫外吸收[8-11]，其中，谢玲玲等[12]通过紫外全波长扫描后确定出230 nm为多西他赛检测波长，而内标紫杉醇则在227 nm波长处有最大紫外吸收，本实验综合这两项结果，分别测定了在230 nm和227 nm两处的出峰情况，结果表明在230 nm处，多西他赛与紫杉醇分离度最好，多西他赛响应值最高，出峰时间适中。于是本实验选择230 nm为最佳检测波长。

4.2 流动相的选择 刚开始进行实验时，本实验选择先检测出多西他赛的出峰条件，依据刘芳、王淑君等[13]的研究,分别尝试了用甲醇-水70：30、甲醇-水80:20做流动相，结果表明无论在两者中的哪一个出峰条件下，多西他赛都能与甲醇峰完好分离，完全出峰且峰型良好，并且出峰时间适中。但加入内标紫杉醇与多西他赛混合溶液后，两者在上述条件下不能完全分离，于是选择调动有机相比例，但基本还是无法完全分离。后来尝试根据王丽丽、陈兰、吴琼等[14-16]的研究,选用乙腈-水做流动相，调整到合适比例乙腈-水50：50后，虽然两者能完全分离，但是峰型拖尾严重，考虑选择在水相中加入0.1%的磷酸改善峰型，结果两者能完全分离且峰型完美，基本无拖尾现象。基于以上探索条件，最终确定选择乙腈-0.1%磷酸水溶液为本实验的流动相，洗脱类型为等度洗脱。

4.3 内标的选择 通过查阅文献得知，大部分药物含量测定都没有用到内标，但为了使含量测定结果更准确，尽量消除实验操作条件的干扰，本实验选择了内标法进行多西他赛的含量测定实验，多西他赛是紫杉醇类抗肿瘤药物，是从浆果紫杉针叶中提取的前体物再经半合成改造而成，其基本结构类似紫杉醇[17]，与紫杉醇最佳检测波长基本相同，所以选择紫杉醇作为多西他赛含量测定的内标。

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Determination of docetaxel in docetaxel injection by HPLC-UV

XINGYa-qun,CHENWei-dong.

(CollegeofPharmacy,AnhuiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Hefei,Anhui230038,China)

Objective:To establish an HPLC-UV method for determining docetaxel in docetaxel injection．Methods:The separation was performed on the COSMOSIL 5C18-MS-II (4.6mm×250mm,5μm).The mobile phase consisted of 0.1%mol/L phosphoric acid (A) and acetonitrile (B) with an isocratic elution at a flow rate of 1.0mL/min.The column temperature was 30℃，and the detection wavelength was at 230 nm.Results:Under the described condition,docetaxe was completely separated from paclitaxel.Good linear relationship was observed between the peak area ratio of docetaxel and paclitaxel and concentration in the range of 0.5～32μg/mL，r= 0.9999.The average recovery of docetaxel ranged from 100.1% to 103.9%.The relative standard deviations were less than 3.7%.Conclusion:It is confirmed by the methodology validation that the quantification method is applicable to the quality control of docetaxel of docetaxel for injection．

Docetaxel; Paclitaxel; Content determination; HPLC

1.安徽中医药大学 药学院，安徽 合肥 230038；2.蚌埠医学院第二附属医学院 药剂科，安徽 蚌埠 233000

邢亚群(1972-)，女，副主任药师，大学。

10.14126/j.cnki.1008-7044.2017.02.007

R 927.2

A

1008-7044(2017)02-0142-03

2016-10-27)