DN不同中医证型NF-κB信号通路相关细胞因子的检测及意义*

薛雄燕，朱嫦琳，潘练华，黄少珍，李炜煊

(广东省佛山市第一人民医院检验科 528000)

DN不同中医证型NF-κB信号通路相关细胞因子的检测及意义*

薛雄燕，朱嫦琳，潘练华，黄少珍，李炜煊△

(广东省佛山市第一人民医院检验科 528000)

目的 探讨糖尿病肾病(DN)不同中医证型核因子-κB(NF-κB)通路相关细胞因子的表达差异及其临床意义。方法 选取该院146例DN患者，按中医辨证进行分型，检测血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)及白细胞介素(IL)-1、IL-6、IL-8水平，并与62例健康体检者(对照组)比较。结果 不同中医证型DN各组的TNF-α、IL-1、IL-6及IL-8水平比较，均高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。各个证型DN患者中TNF-α、IL-1、IL-6及IL-8水平比较，差异有统计学意义(P<0.05)。随着DN病程进展，各细胞因子水平均呈逐步升高的趋势，且DN不同证型升高的幅度与时间不一致。结论 NF-κB通路相关细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6及IL-8与DN不同中医证型具有相关性，可能在DN不同证型的发生、发展中起一定的作用。

糖尿病肾病；NF-κB；细胞信号通路；细胞因子类；中医证型

糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)是终末期肾病最常见的致病原因和糖尿病致死的主要原因之一[1]。研究发现，DN患者的外周血单个核细胞的核因子-κB(NF-κB)与无并发症的糖尿病患者及健康人之间有明显差异[2]，提示NF-κB在DN的发生、发展中有重要作用。由于直接检测NF-κB不易在临床中开展，本研究通过检测不同中医证型DN患者NF-κB信号通路相关细胞因子的水平及其在不同病程的变化，进一步阐明NF-κB在DN发生、发展中的作用，为DN证型实质的研究提供实验依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2012年3月至2015年3月在本院就诊并确诊为DN Ⅲ～Ⅴ期的患者共146例(观察组)，其中男83例，女63例；年龄42～73岁，平均(56.13±8.74)岁；糖尿病病程10～24年，平均(13.47±6.88)年；DN病程0.25～8.00年，平均(2.18±0.95)年；纳入病例均符合《肾脏病学》诊断标准[3]，其中Ⅲ期82例，Ⅳ期43例，Ⅴ期21例。排除合并原发性肾脏疾病、严重心血管疾病、严重肝脏疾病、孕妇及哺乳期妇女和肿瘤患者。选择同期本院健康体检者62例作为对照组，其中男36例，女26例；年龄44～71岁，平均(55.87±7.96)岁。两组对象性别、年龄比较差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 方法

1.2.1 中医辨证分型标准 参照中华中医药学会肾病分会2007年的试行方案[4]，综合各种证型及临床表现，DN最常见类型可归纳为气阴两虚血瘀型(48/146，32.88%)、阴阳两虚血瘀型(52/146，35.62%)、脾肾阳虚湿浊瘀阻型(18/146，12.33%)及其他证型(28/146，19.18%)4型。

1.2.2 检测方法 采集两组对象静脉血3 mL，3 000 r/min离心15 min，分离上层血清，置于-80 ℃保存待测。肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素(interleukin，IL)-6和IL-8的测定采用德国西门子公司的全自动免疫分析仪(型号：Immune 1000)及配套试剂；IL-1的测定采用的酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)，试剂盒购自美国Abcam公司(型号：AB2202)；酶标仪购自美国BioTek公司(型号：ELX-800)。以上检测均严格按照说明书操作。

2 结 果

2.1 DN患者的病程分期情况 146例DN患者的病程分期情况，见表1。

2.2 不同中医证型DN中NF-κB通路相关细胞因子的表达比较 DN不同证型的TNF-α、IL-1、IL-6及IL-8水平均高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。阴阳两虚血瘀型的各个细胞因子水平明显高于其他3种证型(P<0.05)；气阴两虚血瘀型的TNF-α、IL-6和IL-8明显高于脾肾阳虚湿浊瘀阻型和其他证型(P<0.05)，见表2。

表1 DN患者的病程分期情况[n(%)]

表2 不同中医证型DN中NF-κB通路相关细胞因子的表达比较

a：P<0.05，与对照组比较；b：P<0.05，与阴阳两虚血淤型比较；c：P<0.05，与气阴两虚血瘀型比较。

2.3 NF-κB通路相关细胞因子在DN不同阶段的水平 随着DN病程进展，各细胞因子水平均呈逐步升高的趋势。DN Ⅲ期时，阴阳两虚血瘀型TNF-α及IL-1水平显著高于其他各组；至DN Ⅴ期时，气阴两虚血瘀型TNF-α水平快速升高，与阴阳两虚血瘀型基本一致，其余两型升高不明显。而各型IL-1及IL-6均稳步上升。IL-8水平在DN Ⅲ期时各证型比较，差异无统计学意义(P>0.05)；至Ⅴ期时，阴阳两虚血瘀型升高最明显，其次为气阴两虚血瘀型，其余两型升高不明显，见图1。

图1 NF-κB通路相关细胞因子在DN不同阶段的变化

3 讨 论

DN是终末期肾病最常见的致病原因，也是糖尿病致死的主要原因之一，在我国，约有30%的糖尿病患者最终进展为DN[5]。由于DN可造成患者慢性肾衰竭，需要进行血液透析与肾移植，给患者家庭带来巨大的经济和心理负担。DN在中医学中属下消、肾消范畴，目前现代医学尚未发现满意的治疗方法，中医是DN诊治良好的补充手段。从长期的临床工作中发现，DN最常见类型可归纳为气阴两虚血瘀、阴阳两虚血瘀、脾肾阳虚湿浊瘀阻及其他证型，而气阴两虚血瘀型最为常见。有研究指出，DN的病理分子机制与NF-κB信号通路密切相关，NF-κB及其相关基因作为一种转录因子调节众多基因表达，参与DN的发生、发展[6]。Wang等[7]研究发现，临床期DN患者、无并发症的糖尿病患者和健康人之间NF-κB通路相关细胞因子TGF-β水平有显著差异，提示NF-κB活性异常在DN发生、发展中可能起着重要作用。此外，临床相关分析表明，NF-κB活性与糖化血红蛋白水平及血浆脂质的超氧化物标志物呈正相关[8]，提示NF-κB与DN的严重程度密切相关，因此，本研究选取NF-κB通路相关细胞因子进行测定，进一步明确NF-κB在DN发生、发展中的作用。

NF-κB通路相关细胞因子包括TNF-α、IL-1、IL-6及IL-8等。NF-κB活化可增强TNF-α和IL-1的基因转录，使二者产生和释放增多，此外，NF-κB活化后还可使IL-6和IL-8产生和释放增多，导致炎症信号进一步放大[9]，因此，TNF-α、IL-1、IL-6及IL-8水平的变化可反映NF-κB信号通路的激活情况。本研究结果显示，所有证型的DN患者血清中TNF-α、IL-1、IL-6及IL-8水平均明显高于对照组，提示DN患者体内NF-κB通路被激活，导致通路相关细胞因子分泌增加。其中，阴阳两虚血瘀型的患者TNF-α、IL-1及IL-8水平均明显高于其他3种证型，IL-6水平与气阴两虚血瘀型患者相当，明显高于脾肾阳虚湿浊瘀阻型和其他证型，提示NF-κB与DN的发生及DN中医证型具有一定的相关性。

Dabhi等[10]研究显示，TNF-α可刺激肾小球系膜细胞产生氧自由基，可激活IL-1、IL-6等细胞因子，促进肾小球细胞释放胶原酶，促进DN发病。本研究也发现随着DN病程进展，各细胞因子水平均呈逐步升高的趋势，与文献[11-12]报道一致，DN不同病程分期中，阴阳两虚血瘀型TNF-α水平升高最为明显，各组IL-1及IL-6均稳步上升，其发生机制可能与TNF-α和IL-6可通过促进系膜细胞和血管内皮细胞增生而导致肾小球硬化有关。IL-1是重要的炎性因子之一，也是热原质成分，具有致热和介导炎症的作用，可受各种刺激因子诱导，与DN的病理过程密切相关[13]。IL-6是一种炎性反应启动因子，同时具有促炎和抗炎的作用，在DN各个证型患者血清中水平显著升高。但与气阴两虚血瘀型患者TNF-α水平至DN Ⅴ期时才快速升高的变化不一致的是，IL-6在气阴两虚血瘀型DN中升高程度与阴阳两虚血瘀型基本一致，不可作为鉴别这两种证型的指标，同时也提示IL-6升高可能比TNF-α发生更早。IL-8主要由单核巨噬细胞产生，具有中性粒细胞趋化、脱粒、释放溶酶、加强炎症防护等作用。有研究表明，IL-8在DN早期开始增高，并随着DN的发展逐渐升高[12]。本研究结果发现，IL-8在DN各个证型中均明显升高，在DN Ⅲ期时各型无明显差异，至Ⅴ期时，阴阳两虚血瘀型升高最明显，其次为气阴两虚血瘀型，其余两型升高不明显，与TNF-α变化规律基本一致，可作为DN不同中医证型的鉴别指标，用于指导治疗。

综上所述，NF-κB通路相关细胞因子与DN不同中医证型具有相关性，在DN不同证型的发生、发展起一定作用，可作为DN不同中医证型的鉴别指标。然而，由于DN的中医辨证分型缺乏统一性，本研究中医分型参考DN患者虚证与实证情况并结合长期的临床工作经验，将纳入研究的DN病例进行分型，未包括DN所有中医证型，因此，仍需加大样本量进行研究，进一步探讨NF-κB在DN发生、发展过程中的确切机制。

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Detection and significance of cytokines related to NF-κB signaling pathway in patients with different TCM syndrome types of diabetic nephropathy*

XueXiongyan,ZhuChanglin,PanLianhua,HuangShaozhen,LiWeixuan△

(DepartmentofClinicalLaboratory,FoshanMunicipalFirstPeople′sHospital,Foshan,Guangdong528000,China)

Objective To explore the expression difference of cytokines related to nuclear factor kappa B (NF-κB) signaling pathway among different traditional Chinese medicine (TCM) syndromes in the patients with diabetic nephropathy (DN).Methods Serum tumor necrosis factor-α (TNF-α),interleukin-1 (IL-1),interleukin-6 (IL-6) and interleukin-8 (IL-8) in 146 patients with DN and 62 individuals undergoing healthy physical examination in the control group were measured.Results The levels of serum TNF-α,IL-1,IL-6 and IL-8 in various DN groups were significantly higher than those in the control group (P<0.05).The levels of serum TNF-α,IL-1,IL-6 and IL-8 were significantly different among groups of different TCM syndromes (P<0.05).With the progression of DN,all cytokines levels showed a gradually increasing trend,moreover the increased extents and time were different in different TCM syndrome types of DN.Conclusion The levels of serum TNF-α,IL-1,IL-6 and IL-8 related to NF-κB signaling pathway are correlated with different TCM syndromes types and may play a role in the occurrence and progression of different TCM syndrome types of DN.

diabetic nephropathy;NF-kappa B;cell signaling pathway;cytokines;traditional Chinese Medicine syndrome

��·临床研究

10.3969/j.issn.1671-8348.2017.07.011

佛山市医学类科技攻关项目(2014AB00287)。 作者简介：薛雄燕(1977-)，副主任技师，本科，主要从事医学临床检验及细胞因子研究。△

，E-mail:lwx21cn@163.com。

R446.1

A

1671-8348(2017)07-0898-03

2016-07-19

2016-11-17)