支气管哮喘合并肺炎支原体感染患儿外周血CD25、IFN—γ、IL—5表达水平及相关性

訾和平++++++石孝孝++++++杨晓荣++++++汪莉莉++++++王文彦

[摘要] 目的 探討支气管哮喘合并肺炎支原体（MP）感染患儿外周血CD25、干扰素-γ（INF-γ）、白细胞介素-5（IL-5）表达水平及相关性。 方法 选取2015年2月～2016年2月陕西省榆林市中医医院儿科收治的79例支气管哮喘患儿为观察对象，其中合并MP感染39例为合并MP组，未合并MP感染40例为未合并MP组；选取同期38例体检健康儿童作为对照组。采用流式细胞仪检测受试者外周血CD25表达水平，采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验（ELISA）检测受试者外周血INF-γ、IL-5表达水平，采用多因素Logistic回归分析其危险因素，采用Pearson相关性分析合并MP组患儿外周血中各研究指标间的相关性。 结果 合并MP组、未合并MP组外周血CD25、IL-5水平均高于对照组（P < 0.05），且合并MP组高于未合并MP组（P < 0.05）；合并MP组、未合并MP组外周血INF-γ水平低于对照组（P < 0.05），且合并MP组低于未合并MP组（P < 0.05）。Logistic回归分析结果显示，外周血CD25、INF-γ、IL-5为支气管哮喘合并MP的独立危险因素（P < 0.05）。Pearson相关性分析结果显示，支气管哮喘合并MP外周血CD25水平与INF-γ水平呈明显正相关（r = 0.746，P < 0.05），INF-γ水平与IL-5水平呈负相关（r = -0.541，P < 0.05），CD25水平与IL-5水平呈负相关（r = -0.613，P < 0.05）。 结论 支气管哮喘合并MP患儿外周血CD25、INF-γ、IL-5表达与疾病的发生密切相关，且三者之间存在一定的相关性，推测三者有望成为支气管哮喘合并MP的血清学诊断指标及治疗新靶点。

[关键词] 支气管哮喘；肺炎支原体感染；CD25；干扰素-γ；白细胞介素-5

[中图分类号] R562.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2016）11（b）-0098-04

[Abstract] Objective To investigate the expression and correlation of CD25， IFN-γ and IL-5 in peripheral blood of children with bronchial asthma combined with Mycoplasma pneumoniae （MP） infection. Methods 79 cases of children with bronchial asthma in Department of Pediatrics， Traditional Chinese Medicine Hospital of Yulin City， Shaanxi Province from February 2015 to February 2016 were selected as observation objects. 39 cases of combined with MP infection as combined with MP group， 40 cases of without MP infection as without MP group. 38 cases of healthy children at the same time were selected as control group. The expression level of CD25 in peripheral blood was detected by flow cytometry. The expression levels of IL-5 and INF-γ in peripheral blood were detected by ELISA. Multivariate Logistic regression analysis was used to analyze risk factors. Pearson method was used to analyze the correlation between the indexes of peripheral blood in the patients with MP group. Results Peripheral blood CD25， IL-5 levels of combined with MP group and without MP group were higher than those of control group （P < 0.05）， and combined with MP group was higher than that without MP group （P < 0.05）. Peripheral blood INF-γ expression levels of combined with MP group and without MP group were lower than those of control group （P < 0.05）， and combined with MP group was lower than that without MP group （P < 0.05）. Logistic regression analysis showed that peripheral blood CD25， INF-γ， IL-5 was the independent risk factor respectively of bronchial asthma combined with MP （P < 0.05）. Pearson correlation analysis showed that peripheral blood CD25 level of bronchial asthma combined with MP was significantly positively correlated with INF-γ level （r = 0.746， P < 0.05）， INF-γ level was negatively correlated with the level of IL-5 （r = -0.541， P < 0.05）， the level of CD25 was negatively correlated with the level of IL-5 （r = -0.613， P < 0.05）. Conclusion The expression of CD25， INF-γ and IL-5 in children with bronchial asthma combined with MP is closely related to the occurrence of the disease， there is a certain correlation among three. CD25， INF-γ， IL-5 are expected to become new target for the diagnosis and treatment of bronchial asthma complicated with MP.

[Key words] Bronchial asthma； Mycoplasma pneumoniae infection； CD25； INF-γ； IL-5

支气管哮喘是儿科最为常见的呼吸道疾病之一，临床主要表现为反复、可逆性咳嗽和喘息，呼吸困难，胸闷等症状[1]，目前认为其为一种慢性气道持续性炎症疾病[2]。肺炎支原体（Mycoplasam pneumoniae，MP）感染是导致幼儿发生呼吸道感染最为常见的病原之一[3]，近年来感染率呈现一定的上升趋势[4]。支气管哮喘合并MP感染会导致患儿哮喘加重，迁延不愈。目前，支气管哮喘合并MP感染发病机制尚未完全清楚，研究表明，免疫功能紊乱与支气管哮喘及MP感染发病均关系密切[5]。因此，本研究旨在探讨支气管哮喘合并MP感染患儿外周血CD25、干扰素（INF）-γ、白细胞介素（IL）-5表达水平及相关性，试图为支气管哮喘合并MP免疫治疗提供一定的理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年2月～2016年2月陕西省榆林市中医医院儿科收治的79例支气管哮喘患儿为观察对象，所选患儿均符合《诸福棠实用儿科学》[6]第8版中支气管哮喘诊断标准，发热者42例，最高体温39～40℃，咳嗽伴有白色黏痰者32例，痰中带血者4例，其中合并MP感染者39例为合并MP组，男19例，女20例，年龄1～8岁，平均（5.31±2.26）岁，MP感染符合《诸福棠实用儿科学》[6]第8版中MP肺炎诊断标准；未合并MP感染者40例为未合并MP组，男22例，女18例，年龄2～8岁，平均（5.46±2.14）岁。纳入标准：①所有患儿均符合支气管哮喘诊断标准，合并MP者同时应符合MP诊断标准；②年龄≤8岁，性别不限；③近2个月内未应用免疫抑制剂和调节剂者；④患儿家长了解本研究，并同意签署知情同意书者。排除标准：①免疫力低下者；②伴有心、肝、肾及肿瘤等严重疾病者；③先天性畸形者。

选取同期38例体检健康儿童作为对照组，男17例，女21例，年龄1～8岁，平均（5.53±2.04）岁。三组受试者性别、年龄等一般资料比较，差异均无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 采集所有受试患儿晨起空腹状态下外周静脉血3 mL，分装1 mL提取外周血单核细胞用于流式细胞仪检测，另外2 mL分离血清后，于-80℃保存待检。

1.2.2 流式细胞仪检测 取100 μL提取好的外周血单核细胞悬液1×107/mL，加入10 μL PE标记CD25单基因抗体（BD Pharmingen，美国），应用美国BD公司流式细胞仪（FACAS Calibur，BD Pharmingen，美国），利用CellQuest软件分析CD25双阳性T淋巴细胞百分比。具体操作严格按照说明书进行。

1.2.3 ELISA检测 采用双抗体夹心ELISA检测受试者外周血INF-γ、IL-5表达水平，试剂盒均购自美国ADL公司，具体操作方法按照说明书步骤严格进行，反应终止后于490 nm处得各孔吸光度值，标准曲线上查得INF-γ、IL-5表达水平。

1.3 统计学方法

采用统计学软件SPSS 18.0进行数据统计学分析，计量资料用均数±标准差（x±s）表示，两组之间比较采用t检验，三组之间比较采用单因素方差分析，危险因素采用多因素Logistic回归分析，相关性采用Pearson相关分析，以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组受试者外周血CD25、INF-γ、IL-5表达水平比较

三组外周血CD25、INF-γ、IL-5水平比较，差异有高度统计学意义（P < 0.01）；合并MP组外周血CD25水平高于未合并MP组、对照组（P < 0.05），未合并MP组外周血CD25水平高于对照组（P < 0.05）；合并MP组外周血INF-γ水平低于未合并MP组、对照组（P < 0.05），未合并MP组外周血INF-γ水平低于对照组（P < 0.05）；合并MP组外周血IL-5水平高于未合并MP组、对照组（P < 0.05），未合并MP组外周血IL-5水平高于对照组（P < 0.05）。见表1。

2.2 多因素Logistic回归分析结果

以是否合并MP为因变量（x）（是=1，否=0），以CD25（y1）、INF-γ（y2）、IL-5（y3）表达水平为自变量进行分析，结果显示，外周血CD25、INF-γ、IL-5为支气管哮喘合并MP的独立危险因素（P < 0.05）。见表2。

2.3 Pearson相关性分析结果

支气管哮喘合并MP外周血CD25水平与INF-γ水平呈明显正相关（r = 0.746、P < 0.05），INF-γ水平与IL-5水平呈负相关（r = -0.541、P < 0.05），CD25水平与IL-5水平呈负相关（r = -0.613、P < 0.05）。

3 讨论

支气管哮喘是危害儿童健康最为常见的慢性炎癥疾病之一。目前，儿童支气管哮喘患病率及死亡率呈现逐年升高趋势，其发病机制多样复杂，临床仍未形成规范、统一、普遍的诊疗及治疗策略[7-8]。支气管哮喘与MP感染存在密切关系[9-10]，大约40%患有支气管哮喘患儿血清检查MP抗体均呈阳性。支气管哮喘合并MP感染可导致患儿肺部感染加重，甚至引发其他肺外严重并发症，使临床治疗难度加大，严重影响患儿生命健康。

目前，支气管哮喘合并MP感染的发病原因及机制尚未完全清楚，MP感染后导致机体出现一系列复杂炎性反应及免疫损伤，在患儿机体病理生理过程中起着极其重要的作用[11]，对于监视疾病发展及预后具有重要的临床价值。大量研究表明，免疫学相关机制在支气管哮喘及MP感染中均起着重要作用[12-13]。支气管哮喘合并MP对患儿肺脏造成损伤，同时引发患儿机体炎性反应及细胞免疫反应，贯穿疾病始终。近年来，研究证实，T淋巴细胞尤其是辅助性T细胞（helper T cell，Th）发生紊乱在支气管哮喘发病中起重要免疫学作用[14-15]。Th细胞可分泌多种细胞因子，主要分为两种，即Th1细胞和Th2细胞。Th1细胞主要参与细胞免疫及迟发性超敏炎性反应，主要分泌IFN-γ和IL-2，具有上调细胞免疫的作用。CD25是IL-2的膜表面受体，对于形成高亲和力受体具有重要意义，由活化T淋巴细胞表达，目前被认为是调节T淋巴细胞表面特征性的标记分子[16-17]。IL-5是主要由活化T淋巴细胞产生的一种弱酸性糖蛋白，在机体炎性反应及免疫反应中起促进B细胞生长分化、诱导细胞毒T细胞生成、诱导嗜酸粒细胞分化以及信息传递等重要作用[18]。IL-5促进嗜酸粒细胞发生分化同时，对于细胞黏附因子表达同样具有调节作用，此时嗜酸粒细胞发生脱颗粒反应并于血管内皮细胞发生黏附，导致气道损伤及高反应性慢性炎症，引发支气管哮喘，因此，IL-5被称为支气管哮喘发作的重要介质[19-20]。因此，本研究旨在探讨支气管哮喘合并MP感染患儿外周血CD25、INF-γ、IL-5表达水平及相关性，试图为支气管哮喘合并MP免疫治疗提供一定的理论依据。

本研究结果表明，合并MP组与未合并MP组外周血CD25表达水平明显高于对照组，且合并MP组CD25表达水平明显高于未合并MP组，提示支气管哮喘以及支气管哮喘合并MP发病后，引起患儿机体产生细胞免疫反应，T淋巴细胞激活，IL-2表达增加，CD25表达随之明显增加，且支气管哮喘合并MP比单纯支气管哮喘更为严重；合并MP组与未合并MP组外周血INF-γ表达水平明显低于对照组，且合并MP组INF-γ表达水平明显低于未合并MP组，表明支氣管哮喘及支气管哮喘合并MP患儿均存在INF-γ诱生障碍，提示支气管哮喘及支气管哮喘合并MP患儿在病原侵袭作用下，INF-γ诱生障碍而无法抵抗病原，且合并MP者更甚；合并MP组与未合并MP组外周血IL-5表达水平明显高于对照组，且合并MP组IL-5表达水平明显高于未合并MP组，说明支气管哮喘及支气管哮喘合并MP患儿发病时均伴有IL-5过度产生及释放，且合并MP者更甚，提示IL-5可作为支气管哮喘合并MP的重要标志性因子；Logistic回归分析结果显示，外周血CD25、INF-γ、IL-5为支气管哮喘合并MP的独立危险因素；Pearson相关性分析结果显示，支气管哮喘合并MP外周血CD25水平与INF-γ水平呈明显正相关，INF-γ水平与IL-5水平呈负相关，CD25水平与IL-5水平呈负相关，推测CD25、INF-γ、IL-5有望成为支气管哮喘合并MP的血清学诊断指标及治疗新靶点。

综上所述，支气管哮喘合并MP患儿外周血CD25、INF-γ、IL-5与疾病发生密切相关，且三者之间存在一定的相关性，推测三者有望成为支气管哮喘合并MP的血清学诊断指标及治疗新靶点，值得深入研究。

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