原发性肝癌患者血浆溶血磷脂酸的临床意义

解长佶　胡超　曹凯　张宇晴

【摘要】 目的：检测原发性肝癌患者血浆溶血磷脂酸（lysphosphaticlic acid，LPA）的水平，评价LPA在原发性肝癌诊治中的临床意义。方法：采用生物化学方法检测原发性肝癌患者43例，肝脏良性疾病患者10例及健康志愿者10名的血浆LPA水平，同时测定血清AFP的水平。结果：原发性肝癌患者血浆LPA水平（3.94±0.60）μmol/L明显高于肝脏良性疾病患者（2.68±0.36）μmol/L和健康对照组（2.42±0.35）μmol/L（P<0.05），血浆LPA水平的升高与原发性肝癌浸润和门静脉癌栓等相关。结论：血浆LPA检测为原发性肝癌诊断和预后判断增加了一项潜在的评价指标。

【关键词】 原发性肝癌； 溶血磷脂酸； 甲胎蛋白； 诊断； 预后

Significance of Plasma Lysophosphatidic Acid Detection in patients with Primary Liver Cancer/XIE Chang-ji，HU Chao，CAO Kai，et al.//Medical Innovation of China，2016，13（31）：013-016

【Abstract】 Objective：To observe the levels of plasma lysophosphatidic acid（LPA） in patients with primary liver cancer，and to evaluate its clinical potential of diagnosis.Method：Plasma LPA and serum AFP levels were measured in 43 patients with primary liver cancer，10 patients with benign primary liver cancer tumor，and 10 patients healthy donors.Result：Plasma LPA concentration in primary liver cancerpatients （3.94±0.60）μmol/L

was significantly higher than patients with benign lesions of（2.68±0.36）μmol/L and control group of（2.42±0.35）μmol/L （P<0.05）.Higher plasma LPA level showed a significant correlation with invasion and portal vein tumor thrombus （PVTT） of primary liver cancer.Conclusion：Plasma LPA level may be a potential indicator of the diagnosis and prognosis of primary liver cancer.

【Key words】 Primary liver cancer； Lysophosphatidic acid； AFP； Diagnosis； Prognosis

First-authors address：Jiangxi Turmor Hospital，Nanchang 330029，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2016.31.004

原發性肝癌（primary liver cancer，PLC）是全球第5大常见恶性肿瘤，占恶性肿瘤致死原因的第2位，而其中83%的肝癌发生在发展中国家，仅中国每年的新发病例就将近占到世界的一半[1-2]。我国恶性肿瘤发病和死亡分析报道结果显示：中国男性的肝癌发病率排在第5位，女性排在第6位，而肝癌死亡率男性排在第2位，女性排在第5位，原发性肝癌的治疗取得了巨大进步，但多数患者诊断肝癌时病情已为进展期预后差[3-4]。溶血磷脂（lysophosphatidic acid，LPA）是一种对多种细胞具有不同生物学活性作用的磷脂介质，在组织中广泛存在，能够调节肿瘤细胞的生长和侵袭[5]。最近研究表明，LPA分泌量的增加，可能是常见恶性肿瘤细胞癌变过程中的步骤之一[6]，LPA通过上调卵巢癌组织中VGEF的表达，促进肿瘤血管生成，从而间接促进肿瘤的发生发展[7]。LPA能促进基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMP）和肿瘤血管生成因子的分泌，而这和肿瘤的发展有关[8]。王德盛等[9]通过测定肝癌细胞株SMMC7721中Rho蛋白活性，认为LPA主要通过Rho信号转导增强肝癌细胞的体外侵袭能力。Lou等[10]报道中LPA通过基质蛋白-9（MMP-9），而不是通过MMP-2的高表达增加了肝癌细胞的侵袭能力，并通过使用LPA受体抑制剂Ki16452，能显著降低因LPA诱导的肝癌细胞的侵袭力。本课题通过检测原发性肝癌患者血浆LPA水平，就其与临床分期的相关性进行了比较分析，评价检测原发性肝癌患者血浆LPA的临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2014年8月-2016年5月江西省肿瘤医院诊治的原发性肝癌患者43例，男35例，女8例；年龄39～67岁，中位年龄为51岁。全组患者病理类型均为肝细胞性肝癌，巴塞罗那临床肝癌（Barcelona Clinic Liver Cancer，BCLC）分期标准分为BCLC 0期5例，BCLC A期11例，BCLC B期17例，BCLC C期10例。另选取肝脏血管瘤患者10例为肝脏血管瘤组和健康志愿者10例作为健康对照组。全部受验者均于清晨空腹采血取样，实验对象排除既往有脑梗死、短暂性脑缺血发作（TIA）及外周深静脉血栓形成者。LPA检测试剂盒购自北京泰福仕科技开发公司，肿瘤标记物甲胎蛋白（AFP）检测试剂盒购自罗氏诊断产品（上海）有限公司（Roche Diagnostics GmbH 公司）。endprint

1.2 方法 （1）血浆溶血磷脂酸（LPA）的测定：受检者均于术前清晨空腹抽取外周血3 mL，血样离心后0.5 h内用LPA配套试剂测定血浆中的LPA，具体操作步骤和阳性判断标准严格按说明书的要求执行。LPA检测试剂盒1号抗凝剂置于抗凝管中，8000 r离心10 min，吸取上清1 mL，抽提磷脂成分，过滤浓缩分离，最后加入显色剂于90 ℃水浴

5 min，取出后置室温35 min，采用东芝TBA120FR全自动生化分析仪计算LPA的值。LPA值≥3.2 μmol/L设为阳性，<3.2 μmol/L设为阴性。（2）甲胎蛋白测定：术前清晨空腹抽取外周血2.0 mL，甲胎蛋白检测采用罗氏全自动电化学发光免疫仪检测血清AFP水平，AFP正常参考值为<7 ng/mL。

1.3 统计学处理 使用SPSS 18.0统计软件进行分析，计量资料采用（x±s）表示，比较采用t检验，计数资料采用 字2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 术前各组血浆LPA及AFP水平的比较 （1）各组血浆LPA水平的比较中，肝脏血管瘤组2例LPA值升高，健康对照组未见LPA升高。原发性肝癌组血浆LPA水平（3.94±0.60）μmol/L明显高于肝脏血管瘤（2.68±0.36）μmol/L及健康对照组（2.42±0.35）μmol/L，比较差异有统计学意义（P<0.05），肝脏血管瘤组与健康对照组之间比较差异无统计学意义（P>0.05）。（2）各组AFP水平的比较中，原发性肝癌组为（15330.03±11233.98）ng/mL高于肝脏血管瘤组及健康对照组（P<0.05），肝脏良性肿瘤组（4.87±1.79）ng/mL与健康对照组（3.56±1.67）ng/mL相比差异无统计学意义（P>0.05）。（3）原发性肝癌不同分期的LPA水平比较差异有统计学意义（P<0.05）。2例BCLC 0期

LPA水平<3.2 μmol/L，BCLC A期与B期LPA水平比较差异无统计学意义（P>0.05），BCLC C期LPA水平高于BCLC A及B期（P<0.05）。（4）AFP在原发性肝癌不同分期组中的比较，BCLC 0期低于BCLC A、B及C期，比较差异有统计学意义（P<0.05），BCLC A、B及C期比较差异无统计学意义（P>0.05）。见表1。

2.2 原发性肝癌组不同分期术后1個月血浆LPA及AFP水平的比较 BCLC A及B期术后1个月LPA水平降至正常水平，而BCLC C期患者LPA水平未见下降。原发性肝癌组不同分期术后1个月血浆AFP水平BCLC 0、A、B及C期术后1个月AFP水平均可见下降，以BCLC 0期下降最为明显。见表2。

3 讨论

原发性肝癌以肝细胞癌（hepatocellular carcinoma HCC，以下简称肝癌）为主，占95%以上。肝癌细胞易侵犯门静脉系统，形成门静脉癌栓（portal vein tumor thrombus，PVTT）。文献[11]报道门静脉癌栓的发生率为44.0%～62.2%，对于合并门静脉癌栓的肝癌患者，病情发展迅速，自然中位生存期平均为2.7～4.0个月。合并PVTT是临床确定的肝癌预后不良因素，PVTT发生的部位及范围对患者预后有明显影响，早期微血管侵犯和中晚期门静脉癌栓形成是影响肝细胞癌术后预后不佳的最重要因素[12]。PVTT依据侵犯范围大体分为4型：Ⅰ型，癌栓侵犯肝叶或肝段的门静脉分支，其中Ⅰ0型代表微血管癌栓；Ⅱ型，癌栓侵犯至门静脉左支或右支；Ⅲ型，癌栓侵犯至门静脉主干；Ⅳ型，癌栓侵犯至肠系膜上静脉或以上[13]。对于合并门静脉癌栓的患者，巴塞罗那临床肝癌分期（Barcelona Clinic Liver Cancer，BCLC）划归为BCLC C期，推荐索拉非尼作为这部分患者的标准治疗方案。但是在我国运用外科手术、肝动脉栓塞化疗、放疗以及联合多种治疗手段的综合治疗也取得一定的治疗效果[14-17]。门静脉癌栓形成是一个多因素及多环节的过程，除了与门静脉血流动力学因素、门静脉本身的解剖特点及功能有关，肝癌组织呈浸润性生长极易侵犯血管壁较薄的门静脉壁，形成门静脉癌栓，另外肿瘤组织挤压导致小叶中央静脉闭塞，流经肿瘤组织的血流逆流至门静脉癌细胞进入门静脉系统并附壁生长形成癌栓，并且还与多种细胞因子及分子生物学机理有关。门静脉癌栓的诊断依据除了术中发现、术后病理，临床主要还是依靠影像学检查彩超、螺旋CT及磁共振成像（MRI）[18-22]。目前在检测肝细胞癌合并门静脉癌栓中尚无敏感性和特异性均令人满意的肿瘤标志物，刘洋等[23]通过回顾性肝癌合并门脉癌栓的患者发现，联合AFP和CA125水平的检测对临床实践中判断是否合并门静脉癌栓有一定的指导意义。陈祖华等[24]通过分析肝细胞肝癌伴门静脉癌栓与AFP-L3%相关性，发现AFP-L3%阳性HCC患者易侵犯门静脉形成PVTT，并且AFP-L3%越高PVTT累及范围越广。在我国30%～40%的肝细胞癌患者中始终为阴性，并且AFP升高滞后肿瘤的复发及转移灶的形成，从外周血液中寻找生物标记物提示门静脉癌栓的形成发生对于临床有着重大意义。

笔者发现对肝癌不同分期血浆AFP值水平变化中，术前BCLC 0期低于BCLC A、B及C期，术后1个月复查AFP BCLC 0、A、B及C期都有明显下降，随着肝脏肿瘤负荷的下降，AFP呈现出相应的正相关。而LPA值进行对比中发现，术前BCLC 0期低于BCLC A、B及C期，比较差异有统计学意义（P<0.05），BCLC A及B期两者比较差异无统计学意义（P>0.05）。BCLC C期的患者LPA水平高于BCLC A、B期，比较差异有统计学意义（P<0.05）。并通过术后1个月复查LPA水平，LPA在BCLC A、B期患者中呈现下降，而在BCLC C期中虽然肝脏肿瘤切除联合门静脉切除或者门静脉切开取栓，肿瘤负荷下降，LPA水平手术前后未见明显下降，这就提示LPA在门静脉癌栓的形成中可能起到标记物的作用。由于肿瘤患者普遍存在血液高凝状态，易形成血栓，而血小板活化后释放大量的LPA，LPA通过与血小板的LPA-GPCR结合进一步促进血小板的激活，改变血小板的形态，从而表现强大的级联放大效应[25]。LPA可能通过调节活化血小板导致门静脉内高凝状态，同时诱导肝癌细胞、血小板及纤维蛋白相互作用，形成门静脉癌栓。endprint

本研究由于样本例数偏少，并且仅做近期随访，无完整生存资料，导致结论有一定的局限性。下一步将扩大样本例数及进一步的分层，并与新近发现的肿瘤标记物进行比较分析。临床上合并PVTT常决定治疗方案的选择，通过肿瘤标记物的检查，早期诊断PVTT对于临床具有重要的临床意义。同时深入基础研究，进一步阐明PVTT发生发展的分子机理，为PVTT的治疗提供更多的靶点。肝癌患者LPA的血浆浓度与门静脉癌栓形成有一定的正相关性，可作为反映门静脉癌栓形成的标记物，对于肝癌临床分期及治疗能提供指导意义。

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（收稿日期：2016-07-22） （本文编辑：周亚杰）endprint