系统性红斑狼疮患者FAS和FASLGmRNA的表达及其与临床特征的关系*

谷三炜，马宁，赵令，刘涛，姜振宇

（吉林大学第一医院风湿免疫科，吉林长春130021）

临床论著

系统性红斑狼疮患者FAS和FASLGmRNA的表达及其与临床特征的关系*

谷三炜，马宁，赵令，刘涛，姜振宇

（吉林大学第一医院风湿免疫科，吉林长春130021）

目的探讨系统性红斑狼疮患者FAS和FAS配体基因（FAS ligand，FASLG）mRNA的表达情况，及其与系统性红斑狼疮临床特征的关系。方法选取2015年1月-2015年12月于吉林大学第一医院风湿免疫科诊断为系统性红斑狼疮患者47例作为系统性红斑狼疮组，健康者47例作为对照组，系统性红斑狼疮组又分为活动性系统性红斑狼疮组和非活动性系统性红斑狼疮组。观察各组FAS和FASLGmRNA的表达，以及FAS和FASLGmRNA的表达与系统性红斑狼疮患者临床特点的关系。结果系统性红斑狼疮组FASmRNA相对表达量高于对照组（P＜0.05），活动期系统性红斑狼疮组FASmRNA相对表达量高于非活动期系统性红斑狼疮组（P＜0.05）。FASLGmRNA相对表达量在各组之间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。系统性红斑狼疮有发热和无发热者FASmRNA表达差异有统计学意义（P＜0.05）；有面部红斑和无面部红斑者FAS和FASLGmRNA表达差异有统计学意义（P＜0.05）；有皮疹和无皮疹者FASLGmRNA表达差异有统计学意义（P＜0.05）。结论系统性红斑狼疮患者外周血单核细胞中FASmRNA水平升高，且与疾病活动期有关，系统性红斑狼疮患者的部分临床特点与FAS和FASLGmRNA的表达有关。

FAS基因；FASLG基因；系统性红斑狼疮

系统性红斑狼疮是由环境和遗传因素共同作用引起的机体免疫功能紊乱，系统性红斑狼疮的免疫功能紊乱与细胞凋亡异常关系密切[1-2]，细胞凋亡功能紊乱和细胞凋亡清除异常在系统性红斑狼疮的发病过程中发挥重要作用。细胞凋亡由多种信号途径参与调节，其中FAS及其配体（FASLG）在细胞死亡受体途径中起着重要作用，FAS/FASLG能够诱导细胞凋亡，维持机体内环境稳定和机体自身平衡，当FAS或者FASLG基因表达缺陷或者结构异常时，限制其介导的反应性淋巴细胞凋亡，生成大量抗体，打破免疫耐受，引起自身免疫性疾病的发生[3-4]。近年来不少研究发现，FAS/FASLG与系统性红斑狼疮的发生有关[5-6]，但研究主要集中在FAS/FASLG蛋白水平的检测。本研究在基因转录水平探讨系统性红斑狼疮患者FAS和FASLGmRNA的表达，并分析其与系统性红斑狼疮临床特征的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2015年1月-2015年12月于吉林大学第一医院风湿免疫科诊断为系统性红斑狼疮患者47例作为系统性红斑狼疮组，同期体检中心健康体检的健康者47例作为对照组，根据系统性红斑狼疮活动性指数系统性红斑狼疮组又分为活动性系统性红斑狼疮组和非活动性系统性红斑狼疮组。系统性红斑狼疮组患者47例，其中男性45例，女性2例；年龄（33.4±12.3）岁。对照组患者47例，其中男性44例，女性3例；年龄（34.2±11.6）岁。对照组和系统性红斑狼疮组年龄和性别比较差异无统计学意义（P＞0.05）。所有患者签署知情同意书，无其他全身性疾病，资料完整。

1.2 方法

1.2.1 资料收集收集两组患者的年龄、性别、既往史、现病史等一般资料，系统性红斑狼疮组收集发热、面部红斑、皮疹、脱发及关节炎等资料。

1.2.2 疾病活动度评分根据系统性红斑狼疮疾病活动性指数量表进行系统性红斑狼疮活动度评分，疾病缓解为0～9分，疾病活动为≥10分。

1.2.3 血液采集采集所有研究对象空腹外周血4ml于抗凝管中，在采集的外周血中加入适量的淋巴细胞分离液，离心，取上层液面和中层液面之间的乳白色单个核细胞层；采用Trizol法提取外周血单个核细胞的总RNA，根据260 nm吸光度计算RNA含量，采用紫外分光光度计检测提取的单个核细胞总RNA的纯度；根据RNA逆转录合成cDNA；配制PCR的总反应体系为20 μl，空白对照组加入20 μl超纯水，RTQ-PCR检测FAS/FASLG及内参基因GAPDH的扩增情况；数据分析时，FAS/FASLG基因的相对定量用2-△Ct表示，△Ct为检测基因的平均Ct值-内参基因的平均Ct值。

1.3 主要观察指标

观察各组FAS和FASLGmRNA的表达，以及FAS和FASLGmRNA的表达与系统性红斑狼疮患者临床特点的关系。

1.4 统计学方法

数据分析采用SPSS 20.0统计软件，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，非正态分布以M（P25，P75）描述，正态分布用t检验，非正态分布用Mann-whitney秩和检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 提取的外周血白细胞总RNA

用紫外分光光度计检测提取的外周血白细胞总RNA吸光度值，发现A260/A280在1.8～2.0，RNA经琼脂糖凝胶电泳后见2条清晰条带，亮度和宽度基本符合2︰1的比例，RNA没有明显降解，比较完整。见图1。

2.2 各组的FASmRNA表达

外周血白细胞中，系统性红斑狼疮组患者FAS mRNA相对表达量为0.0182（0.0002～0.1879），对照组FASmRNA相对表达量为0.0089（0.0003-0.0874），经Mann-whitney秩和检验，两组差异有统计学意义（Z=4.012，P=0.009），系统性红斑狼疮组FASmRNA相对表达量高于对照组；活动期系统性红斑狼疮组FASmRNA相对表达量为0.0297（0.0062～0.1154），非活动期系统性红斑狼疮组FASmRNA相对表达量为0.0131（0.0003～0.0427），经mann-whitney秩和检验，两组差异有统计学意义（Z=3.276，P=0.043），活动期系统性红斑狼疮组FASmRNA相对表达量高于非活动期系统性红斑狼疮组（见图2）。表明外周血白细胞FASmRNA表达量与系统性红斑狼疮及其严重程度相关。

图1 外周血白细胞总RNA电泳图

图2 各组的FASmRNA表达比较

2.3 各组的FASLGmRNA表达

外周血白细胞中，系统性红斑狼疮组患者FASLG mRNA相对表达量为0.0019（0.0001～0.0786），对照组FASLGmRNA相对表达量为0.0017（0.003～0.0168），经Mann-whitney秩和检验，两组差异无统计学意义（Z=1.201，P=0.342）；活动期系统性红斑狼疮组FASLGmRNA相对表达量为0.0020（0.0003-0.0775），非活动期系统性红斑狼疮组FASLGmRNA相对表达量为0.0013（0.0001～0.0425），经Mann-whitney秩和检验，两组差异无统计学意义（Z=0.908，P=0.795）（见图3）。表明外周血白细胞FASLGmRNA表达量与系统性红斑狼疮及其严重程度无关。

图3 各组的FASLG mRNA表达

2.4 系统性红斑狼疮患者外周血白细胞中FAS mRNA表达及与临床特点的关系

外周血白细胞中，有发热和无发热患者FASmRNA表达量分别为0.0148（0.0003～0.0357）和0.0271（0.0061～0.1031），经Mann-whitney秩和检验，两组差异有统计学意义（Z=3.756，P=0.015），无发热组FASmRNA表达量高于有发热组；有面部红斑和无面部红斑患者FASmRNA表达量分别为0.0272（0.0103～0.1078）和0.0157（0.0005～0.0978），经Mannwhitney秩和检验，两组差异有统计学意义（Z=3.426，P=0.037），有面部红斑患者FASmRNA表达量高于无面部红斑患者；有脱发和无脱发患者FASmRNA表达量分别为0.0243（0.0003～0.1054）和0.0171（0.0047～0.1042），两组差异无统计学意义（Z=1.029，P=0.563）；有关节炎患者和无关节炎患者FASmRNA表达量分别为0.0181（0.0003～0.1052）和0.0224（0.0054～0.1143），两组差异无统计学意义（Z=0.968，P=0.634）；有皮疹和无皮疹患者FASmRNA表达量分别为0.0187（0.0121～0.1213）和0.0214（0.0007～0.1124），两组差异无统计学意义（Z=1.215，P=0.523）（见图4）。表明外周血白细胞中FASmRNA表达与系统性红斑狼疮患者发热和面部红斑相关。

图4 FASmRNA表达和临床特点的关系

2.5 系统性红斑狼疮患者外周血白细胞中FASLG mRNA表达及与临床特点的关系

外周血白细胞中，有发热和无发热患者FASLG mRNA表达量分别为0.0012（0.0001～0.0296）和0.0018（0.0003～0.0374），经Mann-whitney秩和检验，两组差异无统计学意义（Z=1.065，P=0.512）；有面部红斑和无面部红斑患者FASLGmRNA表达量分别为0.0039（0.0004～0.0323）和0.0011（0.0002～0.0378），经Mann-whitney秩和检验，两组差异有统计学意义（Z=4.204，P=0.021），有面部红斑患者FASLGmRNA表达量高于无面部红斑患者；有脱发和无脱发患者FASLGmRNA表达量分别为0.0018（0.0002～0.0231）和0.0015（0.0001～0.0315），两组差异无统计学意义（Z=0.783，P=0.748）；有关节炎患者和无关节炎患者FASLGmRNA表达量分别为0.0014（0.0002～0.0314）和0.0023（0.0006～0.0324），两组差异无统计学意义（Z=0.879，P=0.623）；有皮疹和无皮疹患者FASLG mRNA表达量分别为0.0034（0.0007～0.0324）和0.0011（0.0001～0.0364），两组差异有统计学意义（Z=4.026，P=0.025），有皮疹患者FASLGmRNA表达量高于无皮疹患者（见图5）。表明外周血白细胞中FASmRNA表达与系统性红斑狼疮患者面部红斑及皮疹相关。

图5 系统性红斑狼疮患者外周血白细胞中FASLGmRNA表达及与临床特点的关系

3 讨论

系统性红斑狼疮作为一种自身免疫性疾病，其发病机制与机体内的自身免疫耐受和免疫平衡被打破有关[7-8]。细胞凋亡是指在特定信号的诱导下和特定基因的调控下，细胞发生的主动性死亡，细胞的凋亡能够清除体内生长异常的细胞及体内老化的细胞，对机体的组织稳态、免疫耐受及免疫平衡具有一定意义，FAS/FASLG在自身免疫性疾病中介导细胞的凋亡[9-10]。FAS属于神经生长因子和肿瘤坏死因子受体家族成员之一，具有膜受体特性，胞浆区有死亡域，死亡域在细胞凋亡过程中发挥重要作用[11]。FAS基因由8个内含子和9个外显子组成，位于第10号染色体上，其翻译的产物sFAS能够和FASLG结合，对FAS介导的细胞凋亡具有抑制作用。FASLG属于肿瘤坏死因子家族成员之一，FASLG含有3个内含子和5个外显子，位于第1号染色体上。在机体的病原体或者抗原被清除后，FAS相关的凋亡清除激活的T细胞，在FADD、Caspase-8和10的参与下，FAS引起死亡诱导信号复合物聚集，诱导细胞的凋亡。FAS介导的细胞凋亡参与机体免疫调节，维持机体内环境的稳定，机体内淋巴细胞过度活化和细胞凋亡的异常产生大量自身抗体及免疫复合物，引起组织损伤[12-13]。

在系统性红斑狼疮患者体内，FAS介导的细胞凋亡紊乱，T淋巴细胞凋亡增加，外周血B细胞和T细胞FAS蛋白表达增加；系统性红斑狼疮患者淋巴细胞过度活化，FAS参与的淋巴细胞的凋亡功能亢进，细胞凋亡产生的抗原在机体免疫系统中引起自身抗体的产生，使免疫耐受被打破[14]。关于FAS/FASLG和系统性红斑狼疮关系的研究主要集中在血清FAS/ FASLG表达和FAS/FASLG抗原蛋白水平[15]，关于FAS/FASLGmRNA和系统性红斑狼疮关系的研究比较少，WU等[16]发现FASmRNA可能参与系统性红斑狼疮的发病过程。本研究笔者在基因转录水平探讨系统性红斑狼疮患者FAS和FASLGmRNA的表达，并分析其与系统性红斑狼疮临床特征的关系，发现系统性红斑狼疮组FASmRNA相对表达量高于对照组，活动期系统性红斑狼疮组FASmRNA相对表达量高于非活动期系统性红斑狼疮组。FASLG mRNA相对表达量在各组间比较差异无统计学意义。系统性红斑狼疮有发热和无发热者FASmRNA表达差异有统计学意义；有面部红斑和无面部红斑者FASmRNA和FASLGmRNA表达差异有统计学意义；有皮疹和无皮疹者FASLG mRNA表达差异有统计学意义。本研究结果表明，系统性红斑狼疮患者外周血单核细胞中FASmRNA水平升高，且与疾病活动期有关，系统性红斑狼疮患者的部分临床特点和FAS和FASLGmRNA的表达有关。FAS和FASLG结合后，通过调节肿瘤坏死因子相关因子的相互作用激活NF-κB通路和细胞外信号调节激酶，引起炎症反应的发生，同时能够释放大量炎症细胞因子，诱导FAS在细胞上表达升高，因此FAS/FASLG与系统性红斑狼疮患者的部分临床特点相关可能和上述机制有关。

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（童颖丹 编辑）

Expressions of FASmRNA and FASLGmRNA in patients with systemic lupus erythematosus and their relationships with clinical features*

San-wei Gu,Ning Ma,Ling Zhao,Tao Liu,Zhen-yu Jiang
(Division of Rheumatology,the First Hospital of Jilin University, Changchun,Jilin 130021,China)

ObjectiveTo explore the expressions of FASmRNA and FAS ligand(FASLG)mRNA in patients with systemic lupus erythematosus(SLE),and to analyze their relationships with the clinical features of SLE.MethodsForty-seven patients treated for systemic lupus erythematosus in the Division of Rheumatology of the First Hospital of Jilin University between Jan.2015 and Dec.2015 were selected as SLE group,47 healthy people as control group.The SLE group was further divided into active SLE group and inactive SLE group.The expressions of FASmRNA and FASLGmRNA,as well as the relationships of the expressions of FASmRNA and FASLGmRNA with the clinical characteristics of SLE patients were observed in each group.ResultsThe relative expression of FASmRNA in the SLE group was higher than that of the control group(P＜0.05).The relative expression of FASmRNA in the active SLE group was higher than that in the inactive SLE group(P＜0.05).There was no significant difference in relative expression of FASLGmRNA between any two groups(P＞0.05).The difference of FASmRNA expression had no significant difference between the sys－temic lupus erythematosus patients with fever and those without fever(P＜0.05).The differences in theFAS mRNA and FASLGmRNA expressions were statistically significant between the SLE patients with facial erythema and those without(P＜0.05).The difference of the FASLGmRNA expression was statistically significant between the SLE patients with rash and those without rash(P＜0.05).ConclusionsThe FASmRNA level in the peripheral mononuclear cells of systemic lupus erythematosus patients elevates and is related to disease activity.Part of the clinical features of the patients are correlated to the expressions of FASmRNA and FASLGmRNA.

FASgene;FASLGgene;systemic lupus erythematosus

R593.241

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.01.011

1005-8982（2017）01-0055-05

2016-05-18

国家自然科学基金青年基金（No：81401332）

姜振宇，E-mail：buksbbdk@126.com；Tel：13804354389