实时荧光定量PCR技术对金黄色葡萄球菌的检测概况

□ 张嘉荟 方志宇 乔文姝 中国计量大学生命科学学院

实时荧光定量PCR技术对金黄色葡萄球菌的检测概况

□ 张嘉荟 方志宇 乔文姝 中国计量大学生命科学学院

本文总结了近几年实时荧光定量PCR技术在金黄色葡萄球菌检测中的应用，并概述了这一技术的前景，以供参考。

金黄色葡萄球菌；检测；实时荧光定量PCR技术

近年来，食品安全事件频发，其中食源性致病菌引起的案例数占有较大比例。世界各国食源性疾病的发生均呈上升趋势，美国疾控制中心的一份报告显示：在细菌性食物中毒的案例中，有近三分之一是由金黄色葡萄球菌导致的[1]。发展中国家情况更为严重。在这一背景下，探索一种快检技术已成为当下急需解决的问题。

现阶段，主要使用酶联免疫法、平板培养显色法等方法对食源性致病菌进行检测[2]。但以上方法的检测结果没有时效性，无法进行动态的结果分析，也不利于定量分析。目前，有一种在PCR技术基础上发展起来的核酸定量技术，能够在一定程度上解决这些难题，即实时荧光定量PCR技术[3]。这一方法改进了常规的反应法，能够对致病菌的情况进行动态且定量的检测。该方法具有特异性强、假阳性低；灵敏度高、准确性高；操作简单、交叉污染机会少等优点，被广泛应用于食源性致病菌的检测。

1 实时荧光定量PCR技术对金黄色葡萄球菌的检测

金黄色葡萄球菌作为一种食源性致病菌，对人体的主要危害是由其产生的肠毒素造成的[4]。目前，为了能对其进行实时监测，人们已经逐渐开始将实时荧光定量PCR技术应用到金黄色葡萄球菌的检测中。

唐吉思等人[5]根据一种在牛乳中发现的金黄色葡萄球菌的肠毒素中的基因（sea），建立了针对性的检测方法，即sea DNA上的SYBR Green I基因的检测方法。这种方法的最低可检测限的阳性质粒能够达到49.5 fg/μL的精度要求，并且其检测结果具有较好的相关性（R2=0.99）。

Hein等人[6]在比较SYBR Green I 染料法与TaqMan探针法反应的灵敏度时，发现 SYBR Green I 染料法单位体积的能够达到的拷贝数是TaqMan探针法单位体积能够达到的拷贝数的10倍。

Chen等人[7]针对ssaN基因上的一段特征序列设计了特异性引物。通过对临床已知的沙门氏菌分别进行实验，通过实验结果得出：该方法对肠炎沙门氏菌株的最低检出限较鼠伤寒沙门氏菌株的低。

2 总结与展望

实时荧光定量PCR技术作为一种新技术，与传统意义上的PCR技术相比，实现了定性到定量的突破，打破了传统PCR技术只能在反应的终点进行检测的局限，能够有效避免污染以及定量不准确等关键性问题。实时荧光定量PCR技术具有很强的针对金黄色葡萄球菌的特异性，同时还具备反应效率高、反应灵敏等优势。适用于大量样品的检测，具有广泛的应用前景。

近年来，在诸多学者的研究下，实时荧光定量PCR技术得到了快速的发展，实验条件更加准确，实验结果的稳定性也得到了提高，这也为该技术向生产中推广奠定了基础。但依据目前的研究发现，该项技术的应用也有一定的条件性，如在检测肠炎沙门氏菌株中，运用该方法的最低检出限偏低。因此，在今后的科研工作中，应该更多的探索该项技术的适用条件。参考文献

[1]李一松,王明娜,吕琦,等.SYBR Green I荧光定量PCR检测乳中携带sea基因金黄色葡萄球菌的研究[J].食品科学,2008(7):235-239.

[2]Fernández-No IC, Guarddon M,Böhme K, et al. Detection and quantification of spoilage and pathogenic Bacillus cereus, Bacillus subtilis and Bacillus licheniformis by real-time PCR.[J]. Food Microbiology, 2011, 28(3):605-610.

[3]周成江,周立社,吴刚,等.实时荧光定量PCR的研究进展及其应用[J].包头医学院学报,2007(2):327-329.

[4]姜毓君,李一松,相丽,等.RTPCR检测金黄色葡萄球菌肠毒素A基因[J].东北农业大学学报,2009(2):88-91.

[5]唐吉思,布日额,吴金花,等.荧光定量PCR检测牛乳中金黄色葡萄球菌肠毒素A基因方法的建立[J].中国预防兽医学报,2012(1):56-59.

[6]Hein I, Lehner A, Rieck P, et al.Comparison of Different Approaches To QuantifyStaphylococcus aureus Cells by Real-Time Quantitative PCR and Application of This Technique for Examination of Cheese[J]. Applied & Environmental Microbiology, 2001(7):3122-3126.

[7]Chen J, Zhang L, Paoli G C, et al.A real-time PCR method for the detection of Salmonella enterica from food using a target sequence identified by comparative genomic analysis[J]. International Journal of Food Microbiology, 2010(2-3):168-174.