禽类心包积液感染综合征的诊断与防治

赵向远，董晓，刘宗柱

（1.青岛农业大学生命科学学院，山东青岛266109；2.青岛农业大学动物科技学院，山东青岛266109）

禽类心包积液感染综合征的诊断与防治

赵向远1，2，董晓1*，刘宗柱1

（1.青岛农业大学生命科学学院，山东青岛266109；2.青岛农业大学动物科技学院，山东青岛266109）

自2015年6月份以来，我国多省份地区，如江苏、山东、河南、河北、安徽等地陆续出现了由Ⅰ群腺病毒引起的鸡心包积水综合征，常见于817肉杂鸡、麻鸡、三黄鸡，在白羽肉鸡、蛋鸡中也时有发生。其主要的临床表现为：病鸡突然性的精神沉郁、贫血、消瘦、最后死亡。由于缺乏合理的治疗手段，致使发病时间较长，死亡较多，给养殖户造成了巨大的经济损失。为使禽类心包积液综合症处于一种受控状态，采取一定的预防手段和治疗措施是必不可少的。由此，本文对禽类心包积液感染综合征的诊断与防治进行了叙述，希望为研究者提供参考。

上世纪八十年代，在南亚的巴基斯坦、印度和南美洲的家禽中暴发了一种与包涵体肝炎的临床症状相类似的疾病。这种疾病的主要特征就是心包囊积液和肝炎，因此称之为心包积水症（Hydropericardium syndrome，HPS），也叫包涵体肝炎-心包积液综合征（Inclusion body hepatitis-Hydropericardium syndrome，IBH-HPS）。

1 心包积液综合征发病机制

在巴基斯坦安卡拉，心包积液综合征被首次发现并命名，又称为安卡拉病。自然条件下如氯化钠、呋喃哇酮、碳氢化合物、有机磷杀虫剂等的中毒或是硒和维生素E缺乏造成的营养不良都可导致家禽心包积液的发生。诱发该病的主要因素是腺病毒感染，HPS可在鸡群之间和农场之间通过口-粪途径传播，也可经饲养员、兽医、野生动物、野生家禽等携带传播[1]。

通常所有的血清4型病毒（Fowl Adenovirus sero-type 4，FADV-4）都会感染肉鸡的肝脏并导致肝炎。一些研究已经证实了FADV-4、FADV-8和FADV-1的致病性。心包积液综合征对淋巴细胞的病原体具有亲和性，从而导致免疫抑制。利用鸡胚肝细胞培养病毒，与12种不同血清型的禽腺病毒的标准血清进行反应，引起HPS的主要病原之一被鉴定为禽腺病毒血清4型病毒[2]。该病原与肝脏、内皮和淋巴细胞有高度的亲和力。许多研究人员报道称，在自然和实验的条件下，均可以观察到单核吞噬细胞的增生和红细胞的显著损伤。实验室在感染1日龄的小鸡体内发现多个器官有包涵体，如肝脏、胰腺、胃、十二指肠、盲肠和肾，但是在自然条件下感染小鸡的器官包涵体只出现在肝脏[3]。这表明心包积液综合征的腺病毒比其他腺病毒更容易感染家禽肝脏细胞。

2 病原学特征

禽腺病毒无囊膜，呈球形，二十面体对称结构，毒粒直径为70～100nm[4]。毒粒具有252壳粒，其中二十面体的顶角壳粒为十二个五邻体，每五个五邻体有一条或两条纤维突起，这些纤维以五邻体蛋白为基底由衣壳表面伸出。此外，二十面体上还有240个非顶角壳粒，称为六邻体。带有主要的属和亚属特异性抗原决定簇和次要的种特异性抗原决定簇[5]。后来发现名为PARCl的FAV-4毒株能够在细胞培养物和鸡胚上增殖并形成蚀斑。

从不同地区爆发IBH-HPS的鸡群中分离得到的3株禽腺病毒被定型为血清型4型。通过蔗糖梯度超速离心纯化可获得感染的肝脏组织匀浆中的HHS相关病毒，利用腺病毒l～l2血清型特异性抗血清的双向免疫扩散和病毒中和试验证实该病毒具有特征性。这些试验证明，FAV4可导致HHS的发生。

从感染的肝脏组织中提取的DNA和纯化的病毒可用作PCR。直接从HHS阳性肝脏样品中的提取物及纯化的病毒DNA中可扩增得到特有长度为0.7kb的DNA片段。由核苷序列组成的系统树图显示，HHS病毒和FAVl0很接近，但不同于FAVl和FAV8。然而，起始氨基酸序列分别比FAV血清l0、l和8型的有28.8%、38%和45.l%变异[6]。如此高的变异是由于删除标识而引起阅读框架的移位造成的，而HHS关联的FAV4的标识是唯一的且不同于FAVl0。

3 流行病学及传播途径

3.1 流行病学黄曲霉毒素在饲料中的含量超过20mg/kg时常会诱发3～6周龄的肉仔鸡群暴发此病，发病后3～4d就出现死亡高峰，持续5～7d后才有所下降，死亡率达15%～60%[1]，此时除心包积水外，肝脏的损失也很明显。该病也可偶发于20周龄内的后备蛋鸡或种鸡中，没有性别差异，在更大龄的肉鸡中很少发生。一般认为，各种品系肉鸡都易感此病，但也有一些人认为Hubbard肉鸡最为易感，其次是Indian River和Lohmam系[6]。同时，雨季和夏季的发病率和死亡率也要高于其它季节。

3.2 传播途径IBH-HPS的病原具有高致病性，可经机械方式和带有毒粪便污染的器具在鸡群间、鸡场间迅速传播。在同一鸡群内该病毒主要是通过粪-口途径水平传播的[7]。在0.09、0.07或0.065m2/只鸡的饲养密度条件下，使健康鸡与病鸡密切接触，也会诱发感染。而垂直传播要成功诱发该病，需要FAV和CAV（鸡传染性贫血病毒）的综合效应。病毒通过鸡胚的垂直感染，用感染的胚和子代雏鸡制作细胞培养物，可以激活机体的腺病毒。腺病毒在养殖场中广泛存在，这就要求我们要尽量提高鸡舍的管理水平和做好卫生安全保护措施。

4 症状及诊断

4.1 临床症状和病理变化无论是肉鸡还是蛋鸡，患病鸡心脏的心包囊有液体存在。这些积聚的液体大多为水状，但也有凝胶状，伴有斑点状出血。这是心包积液发病的主要症状，可导致心脏的急性衰竭和死亡。在临床上还可观察到肺水肿和肾脏肿大，以及尿酸盐的沉积，进而诱发急性肾炎，这也可能是该病导致鸡群死亡的主要原因之一。

由于本病无特征性临床表现且呈急性发病，因此在患病鸡出现死亡之前很难进行正确的诊断。用透射电镜在感染的肝细胞核内观察到有腺病毒颗粒，或用细胞培养或鸡胚分离到病毒等时可作出诊断[8]。此外，病理组织学变化主要在肝脏，透射电镜观察肝细胞可见有小的多灶性凝固性坏死，单核细胞浸润，肝细胞内常出现嗜碱性核内包涵体。有时还出现肝细胞的小叶中心性弥漫性细胞肿胀变性和坏死，伴有胞质的部分空泡化或细胞膜破裂，肝细胞萎缩且核固缩[8]；HE染色后观察发现，肝细胞发生脂肪变性，肝组织淤血，并可见炎性细胞浸润；部分肝细胞发生坏死。胞质溶解呈空网状，组织界限不清，正常结构消失；肝细胞中出现嗜碱性包涵体，但确诊还需用型特异性血清进行中和试验。

目前采用的诊断方法主要有病理组织学分析、电镜观察、间接血凝试验、PCR扩增及其产物序列分析、动物回归试验等。

4.2 血清学诊断间接血凝试验和琼脂凝胶扩散试验是常用于鉴别抗原血清型、评价血清抗体阳性率以及抗体滴度的实验手段，也是HPS疫苗效力评价的主要方法。特异性血清中和试验可用于病原鉴定、分群和分型；双向免疫扩散试验主要用于群抗原的检测；间接免疫荧光试验用于诊断的优势有简便、快速、特异性强和灵敏度高；各种改进的酶联免疫吸附试验（ELISA）常被用于检测腺病毒群特异性抗体和型特异抗体[9]。

4.3 分子生物学诊断由于禽腺病毒具有广泛的抗体，血清学方法只能诊断出部分禽腺病毒。然而我们现在关注的是直接检测方法。最近，禽腺病毒的检测在分子水平上得到了很大的提高，目前临床上主要采用PCR检测法。用PCR法对FADV-4病毒DNA可变区的700bp片段进行扩增，可广泛应用于快速诊断HPS。扩增的DNA以地高辛（DIG-11-DUTP）为标记，可作为探针用于斑点杂交法检测病毒基因组的存在[10]。

5 预防和治疗

目前，在禽类养殖生产中主要以加强卫生饲养管理，提高鸡群自身免疫力；做好鸡群内外消毒工作，防止病原体在鸡群内水平传播为主。由于FAV-1血清型较多且不同血清型引起保护性免疫的抗原基因不同，因此疫苗的研制和应用困难较大，研制有效的疫苗是迫切需要解决的问题。有研究结果显示，已经研制出的疫苗主要有油乳剂灭活疫苗、弱毒疫苗及DNA重组疫苗。

5.1 油乳剂灭活疫苗油乳剂灭活疫苗主要诱导机体产生体液免疫，产生的抗体能中和、清除细胞外的病毒和细菌，而对细胞的病原体作用很小。所以具有安全性能好、稳定性强、对机体刺激小等特点[11]。在印度通常使用灭活的鸡心包积液综合征-4感染的细胞培养物加入油佐剂进行乳化制备的疫苗。在3周龄时免疫0.5ml剂量的疫苗（105.5TCID50/0.1ml）对在1、2、3、4或6周攻毒鸡心包积液综合征病毒都能够提供100%的防护[12]。油乳剂灭活疫苗的研制相比与其它疫苗而言，目前已经有比较成熟的研发技术，价格低廉，更加适合用于大型养殖场等生产上的使用和普及。

5.2 弱毒疫苗目前，将鸡胚连续12次传代获得的鸡心包积液综合征-4型弱毒疫苗已经研发出来，用不含鸡心包积液综合征母源抗体的肉鸡在14d时分别免疫16代弱毒鸡心包积液综合征疫苗和商业化的肝器官疫苗，免疫16代弱毒鸡心包积液综合征疫苗的鸡获得了94.73%的保护率，没有接种疫苗的对照组出现了高发病率和高死亡率以及组织病理学的损伤[5]。然而，商业化的肝器官疫苗只有10%的保护率。这个新发明的鸡心包积液综合征弱毒疫苗证实具有免疫原性，并具有防控鸡心包积液综合征病毒感染的潜力。

5.3 DNA重组疫苗DNA疫苗又称基因疫苗。该疫苗既具有减毒疫苗的优点同时又无逆转的危险，因此越来越受到人们的重视。虽然目前还没有面向市场大规模应用，但是在疟疾、流感、轮状病毒、HIV的DNA疫苗的研究上已经取得了突破性的进展[13]，被看做是继传统疫苗及基因工程亚单位之后的第三代疫苗。

5.4 药物治疗该病发病的靶器官主要是右心室、肺脏、肾脏以及肝脏。用强心药物（如牛磺酸、樟脑磺酸钠、安钠咖）来维持心脏功能，呋塞米等高效利尿药来消除组织间液的水分从而充分缓解心包积液和肝肾水肿，同时可另外加用维生素、ATP、肌苷、辅酶A等补充能量[14]。已证实在接种后的肉鸡饲料中添加精氨酸可以保护细胞和体液免疫的抗FADV-4病毒的作用。

5.5 管理措施虽然该病目前还没有确切有效的治疗方法，若要从根本上解决这一问题，除了疫苗防疫之外，还需要按一般准则对鸡舍和器具进行正确消毒、灭菌，加强通风和给予适宜光照等一些基本措施加强饲养管理，预防鸡群感染病毒。由于心包积液会使心脏压塞，导致心跳加快而浅、供氧不足，且热应激会加重这一负担[15]，这可能也是夏季本病发病率高、死亡率高的一个主要原因。因此从饲养管理上我们应该注意一下几点：

5.5.1 禁止外来人员和接种人员的进入以及屋舍的通风和适宜的光照。

5.5.2 鸡舍、饲料房、笼具、垫料在进鸡前1～2周都必须严格做好清洗消毒的准备工作。彻底清除发霉的垫料，冲洗地面，用过氧乙酸或百毒杀喷雾消毒，对已污染的禽舍，每立方米空间用甲醛溶液42ml、高锰酸钾21g，混合后，密闭熏蒸消毒。

5.5.3 密闭式鸡舍，注意负压不要过大，以防止鸡舍缺氧。必要时可适当加大进风口面积，加大风力风速。也可以使用正压通风，以保证氧气供应。

5.5.4 发病鸡群的饮水中加入2.5%碘伏使其终浓度达0.07%～0.1%，可有效缩短感染HPS鸡的病程并降低死亡率。

5.5.5 在发病季节和发病区，注意养殖密度不宜过大，甚至可以降低养殖密度。这样鸡群需要的能量能够充分供应，且温度容易调控。

6 小结与展望

大多数I亚群禽腺病毒对鸡的致病作用还未完全确定，目前国内的一些省份和地区流行的禽腺病毒血清型众多且存在差异，从而增大了防控的难度，做好心包积水症流行病学调查工作是当务之急。因此，为了更好地防控HPS在我国的流行和传播，需结合本病的流行特征和发病规律等制定综合防控方案，加强饲养管理的同时要注重生物安全，注意对症治疗，切勿使用对肝脏和肾脏有毒害作用的药物，否则会加大鸡群的死亡率。

目前，国内尚缺乏对包涵体肝炎-心包积液综合征的商业化疫苗和有效治疗手段，导致该病在国内传播和蔓延。因此，我们目前的首要任务就是要研制出有效的疫苗用于规模化生产，此外，养殖户也需加大对鸡舍的安全卫生管理，从而实现对该病更有效的防控。本研究为进一步开展国内禽腺病毒流行病学调查及进一步研究禽类心包积液提供了理论基础。

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S858.31

C

1673-1085（2017）06-0034-04

2017-05-10

赵向远（1993-），女，山东人，硕士研究生，研究方向为动物遗传育种与繁殖，2257416591@qq.com。*通讯作者：董晓（1969－），女，副教授，博士，研究方向为生理学，1163155358@qq.com。