影响蛋鸡抗体检测结果的因素

郇秀荣

（山东安池农牧科技有限公司，山东济南250000）

影响蛋鸡抗体检测结果的因素

郇秀荣

（山东安池农牧科技有限公司，山东济南250000）

随着养鸡业的不断发展以及养鸡密度的增大，环境污染日益严重，新城疫、禽流感等病已成为困扰养鸡业最严重、最难控制的疾病，给广大养鸡户造成严重的经济损失。而注射新城疫及禽流感疫苗是预防该病发生的有效且经济的手段，可大大降低鸡群的发病机率和经济损失。但疫苗防疫后产生抗体的高低直接影响免疫效果。为了及时了解和掌握免疫效果，抗体检测是一个非常有效的工具，它能从数据上让我们直观地了解免疫后鸡体产生相应抗体的高低，指导我们更加合理的制定免疫程序和确定免疫时间，确保鸡群健康，发挥优良的生产性能。

抗体检测是利用某些病毒（如新城疫、禽流感病毒等）能够与鸡红细胞作用发生凝集现象（红细胞凝集），而这种红细胞凝集现象又可被特异性的免疫血清所抑制，即红细胞凝集抑制现象这一结果并通过换算成直观的数值来判定免疫效果。在进行抗体检测的实际操作中，抗体结果受到诸多因素的影响，现对其影响分析因素分析总结了六个，以便正确进行检测实验，使检测结果能最大程度反映实际免疫效果，保证鸡群健康，确保生产性能发挥正常。

1 抗原因素

抗原保存的温度和时间要严格按要求进行，抗原保存温度要求-15℃，最好加1%的甘油做保护剂，否则效价会降低。免疫抗体检测实质上是一个抗原抗体反应的过程。每次检测之前一定先准确标定抗原的效价，最好同时标定2～3遍取其平均值，抗原效价低于26则不能使用，然后根据其准确效价配制所需浓度的病毒液(如4单位和8单位病毒)。配制的抗原效价过高或过低对结果都有很大影响。过高，测定样品的抗体效价偏低；过低，测定样品的效价偏高。

抗原所用病毒毒株要和生产疫苗所用毒株一致，否则对检测的抗体数值影响较大。如禽流感疫苗毒株用RE-7，而抗原毒株用RE-6则会影响抗体结果1～2个滴度。用甲厂生产的抗原检测乙厂生产的疫苗免疫后的抗体结果也不一致，一般也至少有1～2个滴度的误差。

2 红细胞因素

不同来源的红细胞会使结果出现差异，所以红细胞来源一定要相同且是未免疫的公鸡。但要注意有时不同的公鸡提供的红细胞对新城疫、禽流感H9亚型的检测影响不大，但对禽流感H5亚型抗体测定效价差异很大。临床上常用0.5%或1%的公鸡红细胞，但不管用哪个浓度，配制时一定要准确，不同浓度的红细胞对抗体测定也有影响。

3 样品因素

被检样品要求足量、新鲜，按要求存放和处理。血清无杂质、无污染、无溶血现象，鸡蛋无变质、污染、散黄现象。

4 温度因素

检测时若室温较高，血凝和血凝抑制试验的反应速度就会加快，同时红细胞的解凝时间也变短，室温低时则呈现相反的结果。当室温过高时，配制的各种试剂应现配现用或及时存放于4℃冰箱中，使用时再取出。由于室温高时反应速度加快，故判定结果的时间也要相应提前，否则测出的抗体结果会偏高。当冬季温度低时可延长反应时间，或者把反应板置37℃培养箱中进行实验。

5 仪器用具因素

96孔V型反应板洗刷不及时或洗刷不彻底，有时会使反应前后跳孔而无法判定结果，反应板使用前要检查是否清洁。在实验做完后，反应板应先用自来水反复冲洗甩干后浸泡在1%～3%的盐酸溶液中24h，然后再用蒸馏水反复冲洗，见V型孔孔底无任何沉积物后自然干燥或烘干后备用。采公鸡血使用的离心管、注射器和装血清或卵黄用的小瓶以及配制抗原用的烧杯、移液器的吸头等都要照此程序洗涤使用。

移液器在使用前要检查移液器嘴是否拧紧，使用前在液体中反复吸排，检查吸排量是否准确，移液器用完后要回到松弛状态，即拧到最大刻度。

6 操作人员因素

配制抗原、1%的鸡红细胞时用量的计算和取样量一定要准确，确保配制出符合浓度要求的试剂。

加样时，不管抗原还是血清，一定要掌握准确的剂量，通常为30μl。移液器是定量的，但操作人员用力大小不匀时，吸取的量就不均匀，取样不准确就会造成检测结果的误差。

稀释血清时，先把移液器内的液体排空，再吸出30μl，排至下一孔去稀释，反复吸排3次以上，依此类推。在移去液体时，移液器尽量呈垂直状态。加完样的96孔V型反应板要充分振荡，以便反应完全彻底。

结果读数应在规定作用时间之后进行，过短出现凝集不完全；过长则会出现洗脱现象。能完全抑制红细胞凝集的样品最高稀释倍数为该检测样品的凝集抑制效价。即抗原对照孔内的红细胞完全凝集，阳性血清对照孔内的红细胞完全沉淀，样品检测孔内完全凝集抑制时，才判定结果。

以上所述是抗体检测容易出现影响结果的因素，所以进行抗体检测实验时一定要严格操作，出现误差时要认真分析查找原因，使检测结果准确，客观评价免疫效果，指导养鸡适时免疫，预防鸡群疾病的发生，保证鸡群健康生产。□

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