晚期糖化终产物受体在食管鳞癌组织中的表达及其意义

孙淼淼，姜国忠，赵志华，刘 凯，陈奎生

(1.河南省肿瘤医院病理科，河南 郑州 450003；2.郑州大学第一附属医院病理科、河南省肿瘤病理重点实验室，河南 郑州 450052)

晚期糖化终产物受体在食管鳞癌组织中的表达及其意义

孙淼淼1，姜国忠2，赵志华2，刘 凯2，陈奎生2

(1.河南省肿瘤医院病理科，河南 郑州 450003；2.郑州大学第一附属医院病理科、河南省肿瘤病理重点实验室，河南 郑州 450052)

目的 探讨食管鳞癌组织中晚期糖化终产物受体(RAGE)的表达及意义。方法 采用免疫组化S-P法对50例食管鳞癌组织、30例癌旁不典型增生组织以及50例正常食管黏膜组织中RAGE蛋白表达进行检测；运用原位杂交方法对50例食管鳞癌组织、30例癌旁不典型增生组织以及50例正常食管黏膜组织中RAGE mRNA表达进行检测。结果 食管鳞癌组织中RAGE蛋白、mRNA阳性表达率明显高于癌旁不典型增生组织及正常食管黏膜组织，三者两两比较差异均有统计学意义(P均<0.05)；食管鳞癌组织中RAGE蛋白、mRNA阳性表达率与肿瘤浸润深度、淋巴结转移有关(P均<0.05)。结论 RAGE高表达可能与食管鳞癌发生和发展有关。

食管鳞癌；晚期糖化终产物受体；免疫组化；原位杂交

食管癌是我国常见的恶性肿瘤之一，其发生机制至今尚不十分清楚。晚期糖化终产物受体(receptors for adanced gIycation end products，RAGE)是一种表达于多种细胞表面的生物分子，初期研究表明RAGE及其配体的结合与糖尿病并发的肾病以及神经系统的发育有关，近期研究发现RAGE在肿瘤生长、转移等方面起着重要作用[1-2]，有关RAGE与食管癌发生、发展关系的研究尚未见文献报道。本研究采用免疫组化及原位杂交方法对食管鳞癌组织、癌旁不典型增生组织以及正常食管黏膜组织中RAGE蛋白、mRNA表达进行检测，探讨RAGE在食管鳞癌组织中的表达及其意义。

1 材料与方法

1.1 材料 50例食管鳞癌组织、30例癌旁不典型增生组织以及50例正常食管黏膜组织标本取自2013年1月至12月期间河南省肿瘤医院手术切除的标本。所取标本均经体积分数10%福尔马林溶液固定，经脱水，石蜡包埋，进行连续切片，备用。50例食管鳞癌患者中，男26例，女24例；年龄34～79岁，中位年龄61岁，年龄≥60岁者30例，<60岁者20例；浸润至黏膜下层或浅肌层者10例，浸润至深肌层者12例，浸润至全层或外膜者28例；有淋巴结转移者25例，无淋巴结转移者25例。所有被选择的患者术前均未接受过放疗、化疗及其他相关治疗。

1.2 主要试剂 RAGE单克隆抗体购自武汉艾美捷科技有限公司；RAGE探针由苏州吉玛基因股份有限公司设计并合成；S-P免疫组化通用试剂盒、SA-AP显色试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 免疫组化主要步骤 严格依照免疫组化S-P法试剂盒说明书进行实验。采用已知RAGE阳性表达的鼻咽鳞癌组织作为阳性对照，应用PBS代替一抗作阴性对照。

1.4 原位杂交主要步骤 组织经新鲜配制二甲苯脱蜡,梯度酒精脱水后,用新鲜配制的体积分数3% H2O2灭活内源性过氧化物酶；质量分数3%柠檬酸新鲜配制蛋白酶消化标本DNA结合蛋白；滴加不含探针的预杂交液(42 ℃),预杂交4 h；滴加含探针的杂交液，42 ℃湿盒内杂交12 h；滴加SA-AP 37 ℃，30 min，BCIP/NBT,避光显色2～4 h。用已知RAGE mRNA阳性表达的鼻咽鳞癌组织作为阳性对照；用不含探针的预杂交液孵育标本作为阴性对照。

1.5 免疫组化及原位杂交结果判断 依据参考文献[3]，应用双盲法对结果进行观察，在显微镜下观察并计数，每张切片观察10个视野(×200)，并取平均值。按阳性细胞数所占的百分比分为：阴性(-)，阳性细胞≤5%；弱阳性(+)，阳性细胞占>5%～25%；阳性(++)，阳性细胞占>25%～50%；强阳性(+++)，阳性细胞>50%。为便于统计，将弱阳性(+)和阴性(-)归为阴性，阳性(++)和强阳性(+++)归为阳性。

1.6 统计学处理 采用SPSS 17.0进行数据统计学处理，率的比较采用χ2检验；等级资料的相关性分析采用Spearman等级相关分析，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 RAGE蛋白在食管鳞癌组织、癌旁不典型增生组织以及正常食管黏膜组织中的表达 RAGE蛋白阳性表达于细胞质，阳性染色为棕黄色颗粒，RAGE在食管鳞癌组织、癌旁不典型增生组织以及正常食管黏膜组织中的蛋白阳性表达率分别为80.0%(40/50)、63.3%(19/30)和30.0%(15/50)，组间总体比较差异有统计学意义(χ2=7.23，P<0.05)。见图1、表1。

图1 RAGE 蛋白在食管鳞癌组织(A)、癌旁不典型增生组织(B)以及正常食管黏膜组织(C)中的表达 表1 RAGE蛋白在食管鳞癌组织、 癌旁不典型增生组织和正常食管黏膜组织中的表达

组别n阳性阴性阳性率/%χ2P食管鳞癌组织50401080．0癌旁不典型增生组织30191163．37．230．034正常食管黏膜组织50153530．0

2.2 RAGE蛋白的表达与食管鳞癌患者临床病理学特征的关系 RAGE蛋白的阳性率与食管鳞癌肿瘤浸润深度、淋巴结转移有关(P均<0.05)，而与患者的年龄、性别无关(P均>0.05)。见表2。

2.3 RAGE mRNA在食管鳞癌组织、癌旁不典型增生组织以及正常食管黏膜组织中的表达 RAGE mRNA阳性表达于细胞质，阳性染色为蓝紫色颗粒，RAGE在食管鳞癌组织、癌旁不典型增生组织和正常食管黏膜组织中的mRNA阳性表达率分别为84.0%(42/50)、60.0% (18/30)和26.0%(13/50)，组间总体比较差异有统计学意义(χ2=8.10，P<0.05)。见图2、表3。

表2 食管鳞癌组织中RAGE蛋白的表达与患者的临床病理学特征的关系

临床病理指标nRAGE蛋白表达阳性阴性阳性表达率/%χ2P性别 男2621580．80．1090．379 女2419579．2年龄/岁 ≥603024680．00．0120．912 <602016480．0浸润深度 浅肌层104640．0 深肌层128466．71．8760．042 全层28280100．0淋巴结转移 有2524196．01．6500．039 无2516964．0

图2 RAGE mRNA在食管鳞癌组织(A)、癌旁不典型增生组织(B)以及正常食管黏膜组织(C)中的表达

2.4 食管鳞癌组织中RAGE mRNA的表达与食管鳞癌患者的临床病理学特征的关系RAGE mRNA的阳性表达率与食管鳞癌肿瘤浸润深度、淋巴结转移有关(P均<0.05)，而与患者年龄、性别无关(P均>0.05)。见表4。

3 讨论

RAGE是免疫球蛋白超家族的新成员之一。研究[4]发现RAGE表达于正常肺组织中，但在炎性组织

中其表达上升。在缺氧和缺乏营养的情况下，RAGE信号途径的持续活化，导致细胞自溶增强、凋亡和减少坏死，进而导致慢性炎症的发生[5]。

表3 RAGE mRNA在食管鳞癌组织、癌旁不典型增生组织以及正常食管黏膜组织中的表达

组别n阳性阴性阳性率/%χ2P食管鳞癌组织5042884．0癌旁不典型增生组织30181260．08．100．032正常食管黏膜组织50133726．0

表4 食管鳞癌组织中RAGEmRNA的表达与食管鳞癌患者临床病理学特征的关系

临床病理指标nRAGEmRNA表达阳性阴性阳性率/%χ2P性别 男2622484．60．0210．086 女2420483．3年龄/岁 ≥603025583．30．0310．090 <602017385．0浸润深度 浅肌层105550．0 深肌层129375．03．2580．031 全层28280100．0淋巴结转移 有2524196．03．0410．035 无2518772．0

研究[6]表明RAGE表达水平显著增高不但与炎症相关病理状态有关，而且其高表达还与包括结肠癌、前列腺癌、胰腺癌、肺癌等恶性肿瘤的发生有关，同时参与了胃癌、结直肠癌、胰腺癌及前列腺癌的浸润和转移，还有研究[7]报道RAGE表达水平的增高与肿瘤组织的分化、瘤体大小等有关。

有关RAGE表达与食管癌发生、发展的关系研究至今尚未见报道。本研究采用免疫组化S-P法检测了50例食管鳞癌组织、30例癌旁不典型增生组织以及50例正常食管黏膜组织中RAGE蛋白表达；运用原位杂交方法检测了50例食管鳞癌组织、30例癌旁不典型增生组织以及50例正常食管黏膜组织中RAGE mRNA表达。结果显示，食管鳞癌组织中RAGE蛋白、mRNA阳性表达率明显高于癌旁不典型增生组织以及正常食管黏膜组织，三者两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)；RAGE蛋白、mRNA阳性表达率与肿瘤浸润深度、淋巴结转移有关(P均<0.05)。本研究结果提示，RAGE高表达可能与食管鳞癌发生、发展有关。

[1] Kuniyasu H，Oue N，Vvakikawa A,et al.Expression of receptors for adanced gIycation end products (RAGE) is closeIy associated with the invasive and melastalic activily of gastric cancer[J]．J Pathol，2002，196(2)：163-170．

[2] Landesberg R,Woo V,Huang L，et al.The epression of the receptor for gIycation endproducts (RAGE)in oral squamous carcinomas[J]．Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod，2008，105(5)：617-624．

[3] 孙淼淼，孙玉生，赵志华，等.细胞周期检测点激酶1在食管鳞癌组织中的表达及其意义[J].中华实验外科杂志，2014,31(5)：1128-1130.

[4] Pan H，He L，Wang B，et al.The relationship between RAGE gene four common polymorphisms and breast cancer risk in northeastern Han Chinese[J].Sci Rep，2014，4:43555.

[5] Su S，Chien M，Lin C，et al.RAGE gene polymorphism and environmental factor in the risk of oral cancer[J].J Dent Res，2015，94(3):403-411.

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[7] Wang X，Cui E，Zeng H，et al.RAGE genetic polymorphisms are associated with risk，chemotherapy response and prognosis in patients with advanced NSCLC[J].PLoS One，2012，7(10):e43734.

作者简介：王宏琴(1971-)，女，主管药师，主要从事肿瘤药学的基础与临床研究。E-mail：18537333189@163.com

Expression and Signficance of Receptors for Adanced Giycation End Products in the Esophageal Squamous Carcinoma Tissues

Sun Miaomiao1，Jiang Guozhong2，Zhao Zhihua2，Liu Kai2，Chen Kuisheng2

(1.DepartmentofPathology，HenanTumorHospital，Zhengzhou450003China;2.DepartmentofPathology，theFirstAffiliatedHospital，ZhengzhouUniversity，Zhengzhou450052，China)

Objective To investigate the expression and clinical significance of receptors for adanced gIycation end products (RAGE) in the esophageal squamous cell carcinoma tissues.Methods The expressions of RAGE protein in 50 cases of esophageal squamous cell carcinoma tissues，30 cases of adjacent atypical hyperplasia tissues and 50 cases of normal esophageal mucosa tissues were detected by immunohistochemistry; the expressions of RAGE mRNA in 50 cases of esophageal squamous cell carcinoma tissues，30 cases of adjacent atypical hyperplasia tissues and 50 cases of normal esophageal mucosa tissues were detected by in situ hybridization.Results The positive expression rates of RAGE protein and mRNA in the esophageal squamous carcinoma tissues were significantly higher than those of the atypical hyperplasia tissue adjacent to carcinoma and the normal esophageal mucosa (P<0.05).RAGE protein and mRNA positive expressions were associated with tumor infiltration depth，lymph node metastasis (P<0.05).Conclusion The high positive expression rates of RAGE may be related to the occurrence and development of esophageal squamous carcinoma.

esophageal squamous carcinoma; receptors for adanced gIycation end products; immunohistochemistry; in situ hybridization

河南省基础与前沿技术研究计划项目(编号：122300410073)

孙淼淼(1979-)，女，博士，副教授，副主任医师，主要从事肿瘤病理工作。E-mail：sunmiaomiaohd@163.com

陈奎生(1964-)，男，博士，教授，博士生导师，主要从事肿瘤病理工作。E-mail：chenksh2002@163.com

10.3969/j.issn.1673-5412.2016.06.003

R735.1；R730.23

A

1673-5412(2016)06-0467-04

2016-09-13)