HPLC法测定清热胶囊中连翘苷的含量

潘 喆,张 辉,宋文静

(天津市南开区中医医院，天津 300102)

HPLC法测定清热胶囊中连翘苷的含量

潘 喆,张 辉*,宋文静

(天津市南开区中医医院，天津 300102)

目的：建立HPLC法测定清热胶囊中连翘苷含量。方法：取清热胶囊样品经中性氧化铝柱预处理，再以Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm, 5 μm)为色谱柱，乙腈-水(25∶75)为流动相，检测波长为277 nm，流速为1.0 ml/min。 结果：连翘苷含量与峰面积在0.216 0～2.16 μg范围内具有良好的线性关系(r=0.999 7)；平均回收率为99.7%，RSD为1.18%(n=9)。结论：该方法简便、准确、重复性好，可用于清热胶囊中连翘苷的含量测定。

连翘苷，HPLC，清热胶囊，含量测定

清热胶囊是天津市南开区中医医院的院内制剂，主要含有连翘、大青叶、拳参、板蓝根等中药，具有清热解毒、透热达表、利咽消肿的功效，适用于外感风热、咽喉肿痛、口干咽燥、久热不退者。目前该制剂的质量标准只规定了拳参和连翘的薄层鉴别，没有定量检测方法。连翘苷作为清热胶囊中主要有效成分之一，本课题拟采用HPLC法测定其含量，建立一种准确可靠、专属性强、简便快捷的定量方法，从而进一步提升该制剂质量标准，更好地控制该制剂的质量。

1 仪器与试药

美国戴安UltiMate TM3000高效液相色谱仪(检测器：VWD-3100；泵：ISO-3100SD；自动进样器：WPS-300SL)；KH3200B型超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司)。连翘苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号110821-200111)；清热胶囊由本院制剂室提供(批号130909、131208、140110)。甲醇、乙腈为色谱纯；娃哈哈纯净水(批号201307253221TJ，天津娃哈哈食品有限公司)；其他所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm, 5 μm)；流动相：乙腈-水(25∶75)；检测波长：277 nm；柱温：20 ℃；流速：1.0 ml/min；进样量：10 μl；理论塔板：按照连翘苷峰计算应不低于3 000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 取干燥至恒重的连翘苷对照品约5 mg，精密称定，置25 ml量瓶中，加70%乙醇溶解稀释至刻度，摇匀即得浓度为0.216 0 mg/ml的对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取清热胶囊内容物约3.0 g，精密称定后置于锥形瓶中，精密加甲醇15 ml，再称定重量，然后放置过夜，超声处理30 min，放冷，再次称重，并用甲醇补足减失的重量，摇匀后过滤，立即精密量取滤液5 ml，蒸至近干，加中性氧化铝1.5 g到中性氧化铝柱(100～120目，1 g，内径为1～1.5 cm)中，用70%乙醇80 ml洗脱后收集洗脱液，再浓缩至干，残渣用50%甲醇溶解转移，至5 ml量瓶中并稀释至刻度，摇匀，过滤，取滤液，即得供试品溶液[1]。

2.2.3 阴性样品溶液的制备 取缺少连翘的阴性样品，依照供试品溶液的同法进行操作制备。连翘苷对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液的HPLC色谱图见图1。

2.3 线性关系考查 精密称取连翘苷对照品储备液制成浓度为0.216、0.432、0.864、1.728和2.16 μg/ml的溶液。依次注入高效液相色谱仪，并记录得到的色谱图，以峰面积为纵坐标，对照品的进样量 (μg) 为横坐标，绘制标准曲线，得到回归方程Y=0.034 4X-0.023 5(r=0.999 7)，连翘苷的进样量在0.216 0～2.16 μg范围内呈良好的线性关系。

2.4 精密度试验 取同一对照品溶液，连续进样6次测定，根据所得峰面积值计算，RSD为0.496%，仪器精密度良好。

2.5 重复性试验 精密称取同一批号样品(140110)6份，按上述方法分别测定其含量，测得样品中连翘苷平均含量为0.698 5 mg/粒，RSD为1.53%。

2.6 稳定性试验 将清热胶囊(140110)按供试品溶液制备项下方法制备供试品溶液后立即进样，然后每隔2 h进样1次，共进样4次，最后隔1 d进样1次。RSD为1.79%。结果表明，连翘苷峰面积值在24 h内稳定。

2.7 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品9份(批号140110，含量：2.328 3 mg/g)，精密称定，分别精密加入连翘苷对照品溶液适量，按“2.2.2”项下方法操作，按“2.1”项下色谱条件分别测定。结果平均回收率为99.7%，RSD值为1.18%。见表1。

1.连翘苷

编号样品中含量(mg)加入量(mg)测得量(mg)回收率(%)13．48590．25923．741298．523．48620．25923．7484101．233．49590．25923．752499．043．48850．32403．8155100．953．48780．32403．809699．363．49040．32403．809598．573．49780．38883．8926101．583．49200．38883．877499．193．48990．38883．876199．3

2.8 样品含量测定 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液10 μl，依照上述色谱条件测定， 3批样品中连翘苷的含量测定结果见表2。

表2 连翘苷含量测定结果

3 讨论

3.1 流动相的考查 为了达到较好的分离效果，参照《中国药典》和其他文献资料[2-10]，分别以乙腈-水(25∶75)和乙腈-0.5%磷酸溶液(25∶75)作为流动相，结果发现两者对结果影响相差不大，均能使连翘苷得到较好的分离，峰形较好，拖尾较轻，可以作为分离清热胶囊中连翘苷的流动相，故本研究选用前者。

3.2 提取方式的考查 通过比较，超声提取和回流提取测得的含量相近，但由于超声提取简便，因此本实验采用超声提取这种方式。

3.3 超声时间的考查 在提取时间上分别以15、30和60 min作比较分析。结果表明，超声15 min的提取率较低，而超声处理30和60 min无明显区别，故选用提取时间30 min。

3.4 含量测定的结果 本实验以连翘苷为对照品，参考《中国药典》的方法制定本院院内制剂清热胶囊的含量测定方法，本法易于操作，结果准确，重复性良好，提高了质量标准，可用于本品的质量控制。

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2016-01-11

张辉，E-mail：zh307@sina.com。

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1006-5687(2016)02-0016-02