电针对阿尔茨海默病模型动物认知功能和组织病理学影响的研究进展①

谢艺婷，柳维林，陈立典，陶 静

电针对阿尔茨海默病模型动物认知功能和组织病理学影响的研究进展①

谢艺婷1，柳维林1，陈立典2，陶 静1

随着人口老龄化的发展，阿尔茨海默病(AD)的发病率逐渐升高。电针以百会为中心的不同穴位，能够改善AD模型动物的认知功能、脑部形态、β-淀粉样蛋白沉积以及tau蛋白磷酸化等。

阿尔茨海默病；电针；配穴；参数；动物模型；综述

阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)是一种高发于老年、起病隐袭的神经系统退行性疾病，以近期记忆力障碍、社会行为能力下降、人格衰退和其他认知功能损伤为主要临床表现[1]。据统计，65岁以上的老年人中，5%左右患有AD；随着年龄增长，患病率逐渐增加，到85岁，每3～4名老年人中就会有1人患上AD[2]。神经细胞外出现β-淀粉样蛋白(amyloid protein β,Aβ)聚集形成的老年斑(senile plaque,SP)，以及神经细胞内过度磷酸化的tau蛋白聚集形成的神经纤维缠结(neurofibrillary tangle,NFT)是AD主要的病理特征[3]。AD动物模型有老化型(包括自然老化型、快速老化型和D-半乳糖致老化型)、损伤型(包括胆碱能系统损伤型、Aβ损伤型、tau蛋白损伤型和铅中毒损伤型)，以及转基因型(包括APP转基因型、tau转基因型和多重转基因型)。

研究证明[4-5]，电针治疗AD有明显临床疗效。但在配穴及电针参数的选择上还存在着争议。本文分析近5年不同配穴和电针参数对AD模型动物行为学和组织病理学的影响，为临床AD治疗提供选穴依据。

1 AD的中医学认识

中医学无AD病名，与AD有关的记载当属中医“癫疾”“狂证”“郁证”“文痴”“善忘”“神呆”“呆病”等范畴[6]。痴呆首次出现在《景岳全书·杂证谟·癫狂痴呆》：“痴呆证，凡平素无痰，而或以郁结，或以不遂，或以思虑，或以疑惑，或以惊恐，而渐至痴呆”[7]。老年痴呆从中医理论分析，病机病因主要为肾亏，五脏不足，血瘀痰阻[8]。历代医家对痴呆病因病机的认识虽有所不同，但大多从虚、实两端入手。

2 不同配穴的疗效

记忆是人脑对曾经经历过事物的识记、保持、再现或再认，它是进行思维和想象等高级心理活动的基础[9]。记忆障碍会导致学习新信息困难。

AD早期阶段记忆衰退主要限于情景记忆[10]；随着疾病的发展，语义记忆成为区分中度和重度AD的指标[11]。有文献证明[12]，AD早期外显记忆明显受损，内隐记忆直到较晚阶段才受损。研究发现[13-15]，电针可以改善AD的学习记忆能力。但其选穴各有不同。

2.1 百会

百会有助于益心安神、生髓养脑，主要用于心神病症的治疗[16]。有研究发现[17-18]，脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)表达的调控可以降低AD神经细胞的凋亡，增加突触可塑性，改善学习记忆功能。陈立典等[16,19-20]电针APP/PS1双转基因小鼠百会，采用1 Hz/20 Hz疏密波，每天30 min，持续4周，观察到脑内BDNF表达水平升高，Morris水迷宫实验定位航行逃避潜伏期和路径长均缩短，空间探索穿越平台次数增加，表明电针百会穴能改善小鼠认知障碍。Li等[21]对APP/PS1小鼠电针百会，2 Hz/15 Hz、1 mA，每天30 min，每周5 d，共20 d，Morris水迷宫测试证明小鼠学习记忆能力改善，免疫荧光和Western blotting测试发现脑内BDNF表达增加。

2.2 百会/涌泉

涌泉位于足心，滋肾生髓。针刺百会、涌泉二穴能养肾精，通脑窍，驱邪毒，化浊气，有益智清神、治疗痴呆的疗效[15]。电针百会和涌泉可提高AD模型动物的学习记忆功能[22-29]，但各家使用的电针参数有不同。高堂珂等[22]应用1 Hz/ 50 Hz、0.1 mA疏密波刺激7月龄APP/PS1双转基因小鼠，每次15 min，隔天1次，共6周。加吾拉·阿不力孜等[23]电针APP/PS1双转基因小鼠，采用2 Hz/100 Hz、1 mA疏密波，每次15 min，隔天1次，共5周。白杨等[24]电针5月龄APP/PS1转基因小鼠，采用2 Hz/50 Hz、1 mA疏密波，每次15 min，隔天1次，共5周。Xue等[25]电针APP 695 V717 I转基因小鼠，采用2 Hz/100 Hz、3～5 mA疏密波，每天15 min，共3个月。Li等[26]电针APPswe/PS1dE9双转基因小鼠，采用2 Hz/100 Hz疏密波，每次15 min，每天1次，共3 d。王鑫等[27]电针6月龄APP/ PS1双转基因小鼠，采用1 Hz/50 Hz、0.3 mA疏密波，每次15 min，隔天1次，共6周。国海东等[28]采用SPF级Sprague-Dawley大鼠构建AD动物模型，采用20 Hz连续波，每次30 min，每天1次，7 d为1个疗程，共4个疗程。高怀云等[29]在自然衰老的Sprague-Dawley大鼠筛选出AD大鼠，施以2 Hz/100 Hz、2～4 V疏密波，每次20 min，每天1次，7 d为1个疗程，共3个疗程。以上研究均表明电针百会和涌泉可改善AD模型动物的学习记忆功能。

但有研究结果表明，电针这两个穴位对AD模型动物学习记忆能力改善无效。李芙等[30]电针4月龄APP/PS1双转基因小鼠，采用1 Hz/50 Hz、0.5 mA疏密波，每次15 min，隔天1次，共6周，Morris水迷宫测试未能发现学习记忆能力改善。

2.3 百会/肾俞

中医认为，老年痴呆发病位置虽然在脑，但与肝、肾、脾等脏器密切相关，肾脏亏虚在老年病病理变化中起着核心作用。AD治疗通常以补肾填髓、健脑益智为主，针灸常选督脉、肾经及背俞穴，百会和肾俞较为常用。李婧等[31]电针预刺激清洁级Sprague-Dawley大鼠百会和肾俞，通2 Hz、1 mA、3 V电流，留针15 min，5 d为1个疗程，中间休息2 d，共8个疗程。刺激结束后行造模，造模2周后行行为学检测，显示预刺激百会和肾俞可改善AD大鼠的学习记忆能力。周华等[32]也利用频率2 Hz的电针预刺激清洁级Sprague-Dawley大鼠，每次20 min，每天1次，6 d为1个疗程，中间休息1 d，共3个疗程，结果也显示电针预刺激百会和肾俞可提高AD模型大鼠的学习记忆能力。

2.4 百会/水沟/印堂

百会、印堂二穴是临床治疗痴呆的常用效穴；水沟位于鼻之下、口之上，吸纳清气而通天气，摄五谷精微而通地气；三穴合用有协调阴阳的功效[33]。动物研究证实三个穴位对脑功能有不同程度影响[34]。曹瑾等[34]用“通督启神”法刺激7月龄雄APPswe/PS1dE9双转基因小鼠，点刺人中，平刺百会和印堂穴，采用2 Hz、0.1 mA、2 V疏密波刺激，每次20 min，每天1次，共15 d，Morris水迷宫测试证实小鼠的学习记忆能力改善。Jiang等[35]电针快速老龄化(SAPM8)小鼠的百会、水沟和印堂，采用2 Hz、0.6 mA、2V疏波，每天1次，持续15 d，Morris水迷宫测试小鼠空间学习和记忆功能改善。

2.5 其他

还有一些配穴虽未被广泛使用，但是也有文献证明其对改善AD模型动物的行为学具有一定作用。张海燕等[36]给雄性Sprague-Dawley大鼠侧脑室注射链脲佐菌素制备AD模型，斜刺百会，直刺涌泉，接电针仪，选择20 Hz、2 V断续波，强度为肢体轻微抖动；接着直刺双侧太溪、肾俞、足三里，5 min捻转1次，共30 min，每天1次，7 d为1个疗程，间歇1 d，共3个疗程。行为学测试显示，AD大鼠的学习记忆能力改善。朱晓东等[37]给大鼠灌服D-半乳糖制备AD模型，针刺百会、神庭、肾俞、太溪和足三里，行针2 min，采用疏密波刺激以上穴位30 min，10 d为1个疗程，共3个疗程，跳台试验发现大鼠逃避潜伏时间明显缩短，证明电针能改善AD大鼠的学习记忆能力。佟欣等[38]采用D-半乳糖建立AD大鼠模型，针刺百会、肾俞和足三里，得气后，采用150 Hz连续波，以大鼠肢体轻度抖动为度，3～5 min，每天1次，6 d为1个疗程，疗程间休息1 d，共4个疗程，跳台试验发显示大鼠认知行为改善。张晓东等[39]给健康雄性Wistar大鼠侧脑室注射链脲霉素建立AD模型，平刺百会，直刺大椎，予30 Hz、2 V电刺激，强度为肢体局部轻微颤动；接着直刺双侧太溪、肾俞、足三里，间隔5 min捻转1次，持续30 min，每天1次，7 d为1个疗程，间歇1 d，共4个疗程，Morris水迷宫测试显示电针能够改善AD大鼠学习记忆能力。黄键等[40]给雄性Sprague-Dawley大鼠侧脑室注射Aβ25-35制备AD模型，针刺百会、大椎，予30 Hz、2 V电刺激，强度肢体轻微抖动；然后针刺大鼠双侧太溪、肾俞和足三里，间隔5 min捻转1次，持续40 min，每天1次，7 d为1个疗程，间歇1 d，共3个疗程，发现大鼠学习记忆能力改善。

综上可知，AD模型动物最常联合选用百会和涌泉，其次为以百会为主，配以涌泉、肾俞、水沟、印堂、大椎、太溪、足三里、神庭等。电针参数一般选择1～2 Hz/15～100 Hz疏密波电流0.1～5 mA或以肢体局部轻微颤动为度，时间30 min。

3 电针对AD模型动物脑形态学的影响

AD患者的病理学特征之一是脑皮层和海马区神经细胞减少[41]。头部CT检查显示，AD患者脑萎缩首先出现在内侧颞叶区域，以海马萎缩为主[42]；还会出现扣带回、额叶等区域萎缩[43-44]。电针可能改善AD模型动物脑部的损伤。

吴羽楠等[16]发现，电针治疗后小鼠脑内神经元排列较紧密规整，神经元结构破坏程度减轻。

加吾拉·阿不力孜等[23]发现，电针对小鼠海马超微结构有良性调节作用，具体表现在血管基膜完整，结构层次清晰；突触前后膜较清晰，突触小泡增多，突触后致密物的厚度减小；线粒体结构完好，粗面内质网以及核糖体减少，细胞质中出现少量溶酶体。

沈峰等[45]给Sprague-Dawley大鼠双侧海马注射聚集态Aβ25-35构建AD模型，针刺双侧肾俞、内关和大椎，与2 Hz、1 mA连续波刺激20 min，每天1次，每周6次，共2周，光镜观察发现海马神经元损伤明显改善。

总之，电针刺激百会、百会和涌泉，或肾俞、内关和大椎，均能改善AD模型动物脑部形态，主要影响海马神经元。参数一般选择1～2 Hz/100 Hz、1 mA、2 V，以疏密波为主，每次刺激15～20 min。

4 电针对AD模型动物脑内Aβ沉积的影响

Aβ聚集形成老年斑是AD的主要病理特征之一[41]。尽管Aβ不是AD的唯一致病原因，但它在AD的发展中起着核心作用。一方面，AD患者Aβ的清除率降低，导致Aβ不能被有效清除，产生免疫反应[46]；另一方面，Aβ诱导线粒体损伤，从而导致氧化应激和钙离子超载，环氧酶的表达及活性降低，引起细胞色素C的释放和半胱胺酸天冬氨酸蛋白酶激活，从而导致细胞凋亡[47]。如果能减少脑内Aβ沉积，可能在某种程度上减缓AD病程。

不同参数电针百会，能减少脑内Aβ沉积[19-21]。电针百会和涌泉穴也可有效抑制Aβ在脑内沉积[22,25,27-28,30,48]。

李翀等[49]采用雄性6月龄快速老化小鼠亚系，电针左侧足三里，采用4 Hz/30 Hz、3 mA疏密波刺激10 min，每天1次，共21 d，发现Aβ阳性物质总面积、百分比等指标均降低。

以上研究表明，电针能抑制AD模型动物脑内Aβ沉积。百会和涌泉配伍最常被使用，其次是百会。百会、涌泉、太溪、肾俞和足三里配伍，以及单独刺激足三里也被证实能够改善AD模型动物脑内Aβ沉积。最常使用的电针频率为1～2 Hz/15～100 Hz、电流0.1～5 mA或以肢体轻微抖动，以疏密波为主，刺激时间10～30 min。

5 电针对AD模型动物脑内tau蛋白磷酸化的影响

tau蛋白异常聚集从而形成NFT也是AD重要的病理特征[41]。tau蛋白磷酸化水平是多种特异蛋白激酶磷酸化以及蛋白磷酸酯酶脱磷酸这两种作用相互平衡的结果。过度磷酸化的tau蛋白同样会影响AD病程[50]。一方面，过度磷酸化的tau蛋白和微管蛋白结合能力降低，从而丧失促进微管装配的功能；另一方面，它还会和微管蛋白竞争，与正常tau蛋白及其他大分子微管相关蛋白结合，导致微管解聚[51]。

吴羽楠等[16]电针APP/PS1转基因小鼠百会28 d，发现tau蛋白磷酸化水平明显减少。朱晓东等[37]电针AD模型大鼠百会、神庭、肾俞、太溪和足三里，观察到tau蛋白阳性细胞数明显下降。黄键等[40]电针AD模型大鼠百会、大椎，并针刺太溪、肾俞和足三里，发现海马tau蛋白磷酸化水平下降。

综上所述，刺激百会、神庭、肾俞、太溪、足三里、大椎等穴，均能降低AD模型动物脑内tau蛋白磷酸化水平。电针频率选用1 Hz或30 Hz，电压2 V，以疏密波为主，刺激时间30～40 min。

6 结论与展望

AD被人们所认识至今已有百年历史，目前治疗手段以药物为主，但效果有限，且长时间服用有很大毒副作用。电针在针灸的基础上结合电刺激，不仅能显著延缓AD病程，改善症状，而且安全可靠。研究者结合自己临床经验，提出不同的选穴，其中以百会和涌泉配伍，电针频率1 Hz/50 Hz疏密波、电流1 mA或以肢体轻微抖动为度，持续刺激30 min最常使用。但也有研究表明百会和涌泉配伍无效，这可能与老鼠未达到出现行为学变化的月龄、样本量不够或使用行为学检测不规范有关。

规范AD治疗的选穴和电针参数具有积极意义。需要进行大样本、对照试验验证最佳的穴位和电针参数，为临床采用电针治疗AD提供依据。

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Researches of Electroacupuncture for Cognitive Function and Histopathology in Alzheimer's Disease Model(review)

XIE Yi-ting1,LIU Wei-lin1,CHEN Li-dian2,TAO Jing1
1.College of Rehabilitation Medicine,Fujian University of Traditional Chinese Medicine,Fuzhou,Fujian 350122, China;2.Fujian University of Traditional Chinese Medicine,Fuzhou,Fujian 350122,China

TAO Jing.E-mail:taojing01@163.com

With the development of aging population,the morbidity of Alzheimer's disease(AD)is increasing.Electroacupuncture on several acupoints,especially Baihui(GV20),may improve the cognitive function,brain morphology,and reduce β-amyloid deposition and tau protein phosphorylation,inAD models.

Alzheimer's disease;electroacupuncture;acupoint;parameters;animal model;review

R749.1

A

1006-9771(2017)05-0539-04

2016-11-17

2017-01-04)

10.3969/j.issn.1006-9771.2017.05.010

[本文著录格式]谢艺婷，柳维林，陈立典，等.电针对阿尔茨海默病模型动物认知功能和组织病理学影响的研究进展[J].中国康复理论与实践,2017,23(5):539-542.

CITED AS:Xie YT,Liu WL,Chen LD,et al.Researches of electroacupuncture for cognitive function and histopathology in Alzheimer's disease model(review)[J].Zhongguo Kangfu Lilun Yu Shijian,2017,23(5):539-542.

福建省康复技术协同创新中心课题(No.X2016001-协同)。

1.福建中医药大学康复医学院，福建福州市350122；2.福建中医药大学，福建福州市350122。作者简介：谢艺婷(1993-)，女，汉族，福建泉州市人，硕士研究生，主要研究方向：神经康复与认知科学。通讯作者：陶静。E-mail:taojing01@163.com。