银川市动物免疫抗体监测工作几点思考

马伟林

（银川市金凤区良田畜牧兽医工作站，宁夏银川 750019）

银川市动物免疫抗体监测工作几点思考

马伟林

（银川市金凤区良田畜牧兽医工作站，宁夏银川 750019）

动物免疫抗体水平检测是对某一区域内动物免疫效果进行检验的一项重要的技术手段，可以及时、准确地掌握该区域内动物免疫抗体的整体水平，是动物疫病防控工作的重要基础，也是动物疫情流行病学调查和疫情分析评判的关键环节，可为制定科学的免疫程序、考核免疫质量、综合分析动物疫情发生的风险及应采取的防控措施提供理论依据。自2006年以来，全国所有省、市、自治区均采用此项技术考核动物免疫质量，宁夏回族自治区也不例外，但由于抗体水平检测工作程序多、过程长，其检测结果会受到很多因素的影响，往往与真实水平还存在着一定的差异。笔者作为乡镇畜牧兽医工作站的负责人在工作中对各种影响因素进行了分析，并提出了相应的措施，供相关人员参考。

1 免疫因素

1.1 动物自身因素

动物的遗传因素、营养状况、母源抗体的干扰和免疫抑制疾病等因素将直接影响到动物免疫应答的强弱。机体对接种的免疫应答在一定程度上是受遗传控制的，因此不同品种甚至同一品种不同个体的动物，对同一种抗原的免疫反应强弱也有差别。有的动物个体甚至有先天免疫缺陷，从而导致免疫失败。动物维生素及氨基酸的缺乏都会使机体的免疫功能下降；种畜禽个体免疫应答的差异以及不同批次动物来自不同的种畜禽等原因，造成新生幼畜和雏禽母源抗体水平参差不齐，若母体抗原水平过高，反而干扰了后天免疫，不能产生应有的免疫应答；有些疾病严重影响疫苗的免疫效果，引起免疫抑制，从而影响疫苗的免疫效果。环境卫生状况不良，圈舍及周围环境中存在大量的病原微生物，在使用疫苗期间动物已受到病原的感染，这些都会影响疫苗免疫的效果，从而影响到了动物免疫抗体的检测结果。银川市金凤区南部主要是原郊区农民和泾源县移民，其饲养技术水平、圈舍环境卫生都大不相同，这些因素都会影响监测结果。

1.2 疫苗方面

疫苗质量、疫苗的保存和运送、疫苗的使用是免疫成败的关键因素。应从正规生产单位购买疫苗，保证疫苗效价和抗原含量以及疫苗的正常形状等，正确保存和运输疫苗，确保疫苗质量和免疫效果。要严格按照疫苗的使用说明使用疫苗，严格遵守免疫操作规程，确保免疫效果，尽量避免疫苗联合使用，以防止两种疫苗间的互相干扰，影响抗体的产生，二者要间隔1周以上接种。同时根据当地疫病流行情况和本场实际而制定合理免疫程序，以保证免疫效果。动物防疫员在工作中对疫苗的冷链保存也有差别，负责任的冷藏包里加些冰块，不负责的则什么措施都没有，转一天下来，疫苗早已失去效价，那还有什么抗体水平。近几年口蹄疫、禽流感疫苗都制成三价疫苗，即O型口蹄疫 、A型口蹄疫、亚洲1型口蹄疫疫苗制成三价联苗，禽流感-6毒株、-7毒株、-8毒株制成三价联苗。在免疫注射时一次注射，但监测结果却是三种结果，总有不合格的类型。去年11月自治区动物疫病控制中心监测金凤区的结果是O型口蹄疫和禽流感—8毒株抗体水平不合格，我们分析原因就是疫苗的因素，今年春季动物防疫我们建议规模养殖场对禽流感和口蹄疫三价联苗采取间隔15d两次免疫注射的方式，今年监测的结果就是禽流感三种类型、牛羊O型口蹄疫全部合格，牛羊A型口蹄疫合格率是85%。

2 样品因素

2.1 样品的采集时机

动物在进行免疫接种后，要经过一定的时间才能在体内产生免疫抗体，并逐渐到达峰值，体内产生抗体时间因所使用疫苗的种类不同而异，一般活疫苗产生抗体的时间早，而灭活疫苗产生抗体的时间较晚。所以一定要选择好检测样品的采集时间，通常进行免疫抗体检测的采样时间为疫苗接种后28d至90d最合适，所检测出的结果能够判定动物的免疫效果。 今年银川市金凤区进行春季重大动物疫病抗体集中监测行动，我站对辖区两个奶牛场各采集20份血样，当时一个奶牛场注射三价口蹄疫才19d，另一个才8d，监测结果O型口蹄疫免疫抗体合格率分别是95%和90%，A型口蹄疫合格率分别是85%和60%。过了10d，自治区动物疫病控制中心在其中的一个奶牛场（免疫时间较长的）采集20份血样，监测结果O型、A型、亚洲1型合格率全部100%。另一种情况就是免疫时间较长，监测结果合格率也较低，辖区有一个养殖6000只羊的规模场，去年自治区监测时小反刍兽疫免疫抗体合格率是45%，羊三价口蹄疫中的O型合格率才是60%，A型和亚洲1型合格率是85%，反馈的结果是七月份注射的疫苗，采样监测时已经11月份，今年春季金凤区监测该场时是4月28日采样20份，监测结果是小反刍免疫抗体合格率是100%，口蹄疫O型是55%、A型是60%，反馈结果是该场1月份间隔15天注射两次口蹄疫三价疫苗，3月份间隔15d注射小反刍兽疫疫苗。所有我建议规模养殖场的免疫时间和我们集中免疫的时间要一致，最多不超过1个月，监测时间应和免疫时间相互协调，最好在免疫抗体水平最高时。

2.2 样品的采集方法

用于免疫抗体水平检测的是样品血清，因此血清的质量直接影响到抗体水平的检测结果，血液的采集方法、时间、血清的析出、血清的分离过程都是关系血清质量的因素。因此，在采集血样时，要注意时间特别是羊和鸡，要空腹采样，否则血清就成胶冻状，导致采样失败，另外，一定要遵守操作规程，采血部位要严格消毒，防止污染，采血量要适当（一般为2～3 ml），要一次性采够量，采血完成后，将采血器拉杆拉到底，留出血清析出空间，否则，影响血清的析出和质量。

2.3 样品的处置和保管

血液采集后处置不当会影响血清的析出和质量，血清的处置和保管直接影响到抗体检测的结果，所以必须做好样品的保管和处置。一般用于抗体检测的血液不加任何抗凝剂，用于保存血液和血清的塑料离心管一定要清洁、干燥、无污染，血清析出后要及时进行分装，用吸管或注射器缓缓吸出，装入准备好的离心管中保存。一般情况下，在5 d内进行检测试验的血清可放置于4 ℃的冰箱内保存，待检超过5 d的，要置-20 ℃下冷冻保存，并尽量避免反复冻融。

2.4 样品的分装

样品的分装过程中，器械的污染、交叉使用均可影响到抗体检测结果，所以，在样品分装过程中，所使用的吸管、注射器、离心管等器械一定要干燥、清洁，不能交叉重复使用，特别不能将不同的样品混合成一份，也不能一式多样。

3 实验室因素

3.1 检测器械

在实验室进行抗体检测的过程中，所使用检测器械的质量，器械的清洗、保管方法，仪器的准确性、灵敏性等都将影响到检测结果的准确性，特别是不按照有关规定对各种仪器设备进行维护和校准，认为只要所用仪器不出故障就可正常使用，忽略了由于仪器出现偏差严重影响了实验结果的准确性。所以，一定要保证检测器械的质量，每次试验后要对所使用过的器械进行彻底清洗、消毒，严格按照规定的方法保管器械，定期对试验仪器进行校准和测试，确保其准确性和灵敏度，从而保证检测结果的准确性。

3.2 检测试剂

做抗体检测时所用的试剂虽然都是经有关部门审核批准的生产企业生产，但不同生产厂家生产的试剂，其特异性和灵敏性存在差异，同一厂家不同批次的产品也有差别，试剂在运输和保管中出现包装损坏、泄漏、污染等均会影响到检测结果。因此，应选择质量优良的检测试剂，并严格按照试剂的说明书进行保管和使用，坚决不能使用过期试剂。

3.3 检测人员

实验室所有检测试验都是通过检验人员的具体操作而完成的，检验人员的理论和技术操作水平是关系到检测结果的最关键因素，个别检验员对试验原理理解不透，在试验过程中不能严格遵守操作规程，不能熟练掌握试验器械和仪器的使用，出现加样误差、加样器与吸头不配套、重复使用吸头等，导致加样不准确，造成检测结果出现偏差、检验员对试验结果判定不准确等现象，均可导致抗体水平的检测结果不准确。所以，实验室配备的人员要有相当的从事血清学检测的工作资历并经过严格的培训，每个工作人员都要认识到此项工作的特殊性、严肃性，树立高度的责任感和高度负责的精神，要熟练掌握相关的技术原理和操作方法，特别是检测的程序和规范，熟练掌握与实验有关的仪器设备，要让实验人员认识到仪器的维护和校正的重要性，对所用仪器设备定期检定校准和维护以保证每次试验的准确性。

3.4 实验室温度

抗体检测试验的原理就是抗原抗体反应，而抗原抗体反应需要一定的时间和特定的反应温度，在一些试验中，由于抗原被包被在固相表面，抗原抗体反应只能在固相表面进行，远离固相表面的物质要依靠浓度差的改变缓慢地加入反应，而且这个反应要在特定的温度下进行。一些实验人员为求快出结果而使反应时间不够和温度不合适导致试验出现错误的结果。因此，在进行抗体检测试验时，实验室温度一般要保持在20℃～25 ℃，在操作时一定要使各步反应达到足够的时间并保证其温度条件，确保试验结果的准确性。

4 小结

经分析，影响动物免疫抗体水平检测结果的因素主要有样品的采集、处理、保存，检测试剂的质量，试验仪器和器械的维护和保养，检验人员的素质等因素。所以，在做动物免疫抗体水平检测时，一定要做好样品的采集处理和保存工作，保证样品质量；选择优良的试剂，并严格按照说明书进行操作；加强对实验室设备和仪器的维护和保养；严格遵守试验操作规程和要求，确保检测结果的准确性。