生殖道沙眼衣原体感染相关的生物学标志评估

韦绚 秦秀妹 黄静 于路妹 李志勤

广西桂林医学院第二附属医院 1)妇产科 2)检验科 桂林 541001

生殖道沙眼衣原体感染相关的生物学标志评估

韦绚1)秦秀妹1)黄静1)于路妹2)李志勤1)

广西桂林医学院第二附属医院 1)妇产科 2)检验科 桂林 541001

目的 探讨可以评估生殖道沙眼衣原体感染相关的生物学指标。方法 选取2014-08—2015-12间诊断为生殖道沙眼衣原体感染的32例育龄妇女为感染组。选取同期无感染的32例育龄妇女为未感染组。采用ELISA法对比2组HD-5、TNF-α、IL-8、IL-1α、IL-6的表达。同时利用脂多糖(LPS)刺激体外培养的正常宫颈上皮细胞，对比LPS刺激后细胞与正常细胞不同时间点的HD-5、TNF-α水平变化。结果 感染组HD-5、TNF-α、IL-8、IL-1α、IL-6表达均显著高于未感染组。LPS刺激后细胞在感染1d、2d后的HD-5、TNF-α水平均显著高于正常细胞，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 沙眼衣原体属于生殖道感染的重要病菌，应注意检查及预防。

生殖道；沙眼；衣原体；感染；宫颈上皮细胞

沙眼衣原体是常见的人类致病菌[1]，且致病范围十分广泛，除生殖道疾病外甚至还可导致呼吸道、眼结膜等疾病[2]。近年来，随着医疗水平的不断进步，沙眼衣原体与人类生殖道感染的关系备受关注。部分沙眼衣原体可从下生殖道上行进而感染上生殖道，最终导致患者不孕、不育[3-5]。现对可以评估生殖道沙眼衣原体感染相关的生物学指标进行探讨，以更好为临床诊断与治疗提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2014-08—2015-12间在我院诊断为生殖道沙眼衣原体感染的32例育龄妇女为感染组，年龄22～52岁，平均33.2岁。选取同期进行体检的无生殖道感染的32例育龄妇女为未感染组，年龄23～53岁，平均33.3岁。2组患者的基本资料对比，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。1.2 研究方法 (1)患者均使用无菌生理盐水对阴道进行灌洗，停留1 min后抽回液体，保存于-80℃低温医用冰箱中。采用ELISA试剂盒(尚柏公司生产)统一检测2组HD-5、TNF-α、IL-8水平以及IL-1α、IL-6的表达。严格按照说明书进行操作。(2)LPS刺激：用组织块培养法培养由良性病变切除子宫患者的远离鳞柱交界部的宫颈上皮组织5 d左右，并统一选取第4代细胞，接种在35 mm培养皿中，置入100 ng/mL的LPS进行刺激。分别收集0d、1d、2d后细胞营养液并分离上清液，保存于-80℃低温医用冰箱中，采用ELISA方法测定HD-5、TNF-α水平变化。

1.3 观察指标 对比2组HD-5、TNF-α、IL-8、IL-1α及IL-6表达。比较LPS刺激后细胞与正常细胞在不同时间段HD-5及TNF-α水平。

2 结果

2.1 2组HD-5、TNF-α、IL-8、IL-1α、IL-6水平对比 感染组HD-5、TNF-α、IL-8、IL-1α、IL-6水平均显著高于未感染组，比较差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 2组HD-5、TNF-α、IL-8、IL-1α、IL-6指标对比(例，

注：与未感染组相比，*P<0.05

2.2 LPS刺激后的细胞与正常细胞在不同时间段HD-5水平对比 0 d时2组HD-5水平无明显差异，而1 d后、2 d后LPS刺激后细胞的HD-5水平均显著高于正常细胞，比较差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 LPS刺激后细胞与正常细胞在不同时间段HD-5水平对比

注：与正常细胞相比，*P<0.05

2.3 LPS刺激后细胞与正常细胞在不同时间段TNF-α水平对比 0 d时2组TNF-α水平无明显差异，而1 d后、2 d后刺激后细胞的TNF-α水平均显著高于正常细胞，比较差异有统计学意义(P<0.05)，见表3。

表3 LPS刺激后细胞与正常细胞在不同时间段TNF-α水平对比

注：与正常细胞相比，*P<0.05

3 讨论

沙眼衣原体是目前全球范围内主要性传播疾病之一[6]，可通过性传播以及围产期传播，会导致患者出现宫颈炎、子宫内膜炎、盆腔感染性疾病、新生儿肺炎、异位妊娠等[7]。沙眼衣原体会异化其他感染病原传播，其中沙眼衣原体在女性患者中感染时的靶细胞为宫颈上皮细胞。由此，宫颈上皮细胞在作为机械屏障的同时还具有限制病原侵入黏膜下的作用[8]，还能分泌防御素5(human defensin5，HD-5)等直接在病原中产生作用，同时分泌IL-8、TNF-α等细胞因子对患者免疫反应进行调节[9]。有报道表明[10]，患者在感染沙眼衣原体后出现的免疫应答反应具干扰病原、抑制感染继续进展的作用。而反复以及慢性感染会导致出现炎症相关的组织损害与疤痕形成。因此，对HD-5、TNF-α等细胞因子进行深入探讨研究，可明确沙眼衣原体感染机制，为临床治疗提供参考依据。

本次观察发现：感染组HD-5、TNF-α、IL-8水平以及IL-1α、IL-6含量均显著高于未感染组。其中HD-5属于人类防御素之一，是先天性免疫系统中的重要因子。其主要位于细胞浆内，当外界出现感染后会主动释放，从而达到抑制细菌生长的功效。IL-8属于具有化学趋化作用的炎性因子，可通过诱导白细胞在感染部位进行聚集而达到抗菌的功效。与此同时，IL-1α与IL-6可在病原体感染的早期增强黏附分子与趋化因子的表达。而TNF-α主要作用是可显著减少L-色氨酸，而L-色氨酸属于病原生长所必需物质，因此能有效抑制沙眼衣原体感染以及生长[11]。此外，本文显示感染组经LPS刺激后细胞在感染1 d后、2 d后HD-5、TNF-α水平均显著高于正常细胞。笔者认为，经LPS刺激后正常宫颈上皮细胞上清液中HD-5水平明显增加，提示正常宫颈上皮细胞在遭受病原刺激后可持续分泌HD-5进行抗菌。TNF-α经LPS刺激后分泌量呈时间依赖性增加，表明宫颈上皮细胞在发生感染后可在免疫损伤方面发挥一定作用。另有研究表明[12]，沙眼衣原体感染由于血清型较多且易发生变异，因此易产生耐药，且通常合并一种或几种性传播疾病，由于临床大部分药物效果有限，可将HD-5列为阴道局部给药的备选之一。

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[12]郑熠，胡权.生殖道沙眼衣原体感染的分子流行病学研究进展[J].国际流行病学传染病学杂志,2016,43(1):58-61.

(收稿 2016-06-15)

Evaluation of biological markers associated with Chlamydia pneumoniae infection in genital tract

WeiXuan,QinXiuzhu,HuangJing,YuLumei,LiZhiqin.

DepartmentofObstetricsandGynecology,theSecondAffiliatedHospitalofGuilinMedicalCollege，Guilin541001，China

Objective To explore the biological marker of Chlamydia infection in genital tract. Methods In our hospital diagnosed as genital Chlamydia trachomatis infection of childbearing age women in 32 cases from the August 2014 to December 2015, remembered as the infection group. The other non reproductive tract infections 32 cases of women of childbearing age remember as the uninfected group. Using ELISA method and compared between the two groups HD-5, TNF-α, IL-8 level and IL-1α, IL-6 content. At the same time, the lipopolysaccharide in vitro stimulation of normal cervical epithelium under the package, compared with the LPS stimulated cells and normal cells at different time points of HD-5, TNF-α.Results The levels of HD-5, TNF-α, IL-8,IL-6 and IL-1α were significantly higher in the infection group than those in the uninfected group, and the levels of the infection group were significantly higher. After LPS stimulation, the levels of HD-5, TNF-IL-6 and 1d in LPS group were significantly higher than those in the normal group after infection with 2d.Conclusion Chlamydia pneumoniae is an important pathogen of reproductive tract infection, and should be paid attention to and prevention.

Genital tract; Chlamydia; Infection; Cervical epithelial cells

广西壮族自治区卫生厅科研课题(Z2014337)

R446.5

A

1077-8991(2017)01-0007-03