流式细胞术筛查血小板抗体方法的建立及应用

韩博文

（天津旷博协和生物技术有限公司，天津 300384）

流式细胞术筛查血小板抗体方法的建立及应用

韩博文

（天津旷博协和生物技术有限公司，天津 300384）

目的 建立一种用流式细胞术筛查血小板抗体的方法，并将其应用于临床治疗中。方法 将78例需进行血小板抗体检测的患者进行AB两组试验，分别用常规处理法和流式细胞术来进行检测，观察两组的检测结果。结果 A组的检出率为25.65%，而B组的检出率为35.90%，相比而言，B组的检出率明显高于A组，而且检测的时间也要短于A组，但是两者的阳性率无明显差异。经检测，B组中还发现有10例含抗HLA抗体，有1例含抗HPA-5b抗体，有9例为自身抗体。结论 对于筛查血小板的抗体，流式细胞术的建立以及应用为临床治疗提供了很大的便利，该方法不仅检测速度快，操作简单，还实现了标准化，非常适用于临床检测。

流式细胞术；血小板抗体；方法建立；临床应用

通过对常规处理法和流式细胞术的比较来具体探讨流式细胞术在临床检测中的应用与效果，并作如下分析。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2016年本市医院的共100例血小板患者的资料，对不同年龄，不同症状的患者进行检查，针对血小板来进行针对性检查。患者均无其他相关疾病，并且满足了患者检测的相关标准，保证了医院数据处理中的准确性。且并未注射激素或进行免疫性抑制等治疗。将患者进行AB两组不同的检测试验。

1.2 方法

所有患者均在本省同一家医院内进行治疗，A组采用常规处理法，即经典酶联免疫吸附试验（ELISA），B组采用流式细胞术（FCM）。

（1）制备样本：采取的静脉血应该在15毫升以上，然后放入抗凝试管中，防止血液凝固。15 ml血液中13 ml用于血小板自身抗体检测试验盒检测，即ELISA，用离心法分离血小板，之后进行冷却。剩余的2 ml用于流式细胞术（FCM）检测。

（2）经典酶联免疫吸附试验（ELISA）技术检测：按照使用说明书来进行检测。

（3）流式细胞术（FCM）技术检测：将2 ml周血600转离心，得1 ml上清，加入1 ml多聚甲醛（2%）混匀，2000转离心，弃上清，加入2 mlPBS洗涤，2000转离心，弃上清，加入2 mlPBS重悬备用，取100 ul重悬液与20 ulCD41-PE（北京旷博生物技术股份有限公司）混匀，孵育20分钟后上机检测。

1.3 统计学方法

采用SPSS 20.0统计学软件对数据进行分析，计数资料以百分数（%），例（n）表示，采用x2检验；计量资料以“±s”表示，采用t检验；以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

经统计，经典酶联免疫吸附试验（ELISA）检测中，血小板抗体的检出患者有20例，血小板自身抗体阳性为14例，阳性率为70%。其中，血小板表面自身抗体13例（66.70%），游离在血浆中的血小板自身抗体9例（47.60%）。在流式细胞术（FCM）法检测中，血小板抗体的检出患者有28例，检出率为35.90%；血小板自身抗体阳性为24例，阳性率为85.70%。其中，血小板表面自身抗体22例（78.60%），游离在血浆中的血小板自身抗体16例（57.10%）。此外，流式细胞术（FCM）法检测出有10例含抗HLA抗体，有1例含抗HPA-5b抗体，有9例为自身抗体。经分析，常规处理法，即经典酶联免疫吸附试验（ELISA）与流式细胞术（FCM）检测血小板自身抗体阳性率差异并无统计意义（P=0.227＞0.05），流式细胞术（FCM）血小板表面自身抗体检出率高于游离在血浆中的血小板自身抗体检出率（P=0.039＜0.05）， 经典酶联免疫吸附试验（ELISA）血小板表面自身抗体检出率高于游离在血浆中的血小板自身抗体检出率（P=0.043＜0.05）。

3 讨 论

血小板作为一种血液中常存在的一种物质，一旦数量发生了异常，就很容易引起其他种类疾病。例如，血小板自身抗体（PAIgG）在血小板膜上与其相应抗原结合后，会使血小板很容易就被单核吞噬细胞系统大量破坏，从而会减少血小板的寿命，使血小板的数量锐减，这样会影响人类自身的免疫系统，使得自身免疫系统的免疫能力下降，体液免疫和细胞免疫功能下降，因此，对于常规检测方式来说，耗血量比较大，增加患者负担。相反，流式细胞术（FCM）作为一种克服了原本障碍的新型抗体检测技术，在临床上的使用逐渐增多。耗血量大大减少，对单个细胞也可以进行检测，除此之外，检测速度快，操作简便，而且流式细胞术还可以将检测方法标准化。

本文采用78例患者进行研究分析，将这78为患者分别进行免疫吸附试验（ELISA）和流式细胞术（FCM）进行检测，流式细胞术（FCM）的检出率为35.90%，阳性率为85.70%。经典酶联免疫吸附试验（ELISA）的检出率为25.65%，阳性率为71.40%。上述两种方法的阳性率的差异没有统计意义（P＞0.05）。但是两者的耗时相差较大，流式细胞术（FCM）仅用一个多小时，而酶联免疫吸附试验（ELISA）却耗时五小时。由此可见，流式细胞术检测的速度非常快，而且结果也具有可靠性。

综上，相较于经典酶联免疫吸附试验（ELISA）来说，流式细胞术（FCM）会更加便捷，同时在速度上可以有更大的进步，在样本采取中，需要的血量很少。非常适用于临床医学中对于血小板抗体的检测。

[1] 陈 雪.流式细胞仪在临床医学中的应用[J].重庆.2014(5).

[2] 张之南.血液病诊断及疗效标准[M].北京.2008(8).

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ISSN.2095-6681.2017.29.106.01

李 豆