obestatin对3T3-L1前脂肪细胞增殖和凋亡的研究

霍兴华，闫长虹（菏泽医学专科学校；山东 菏泽 274000）

obestatin对3T3-L1前脂肪细胞增殖和凋亡的研究

霍兴华，闫长虹
（菏泽医学专科学校；山东 菏泽 274000）

目的探讨Obestatin对3T3-L1前脂肪细胞增殖和凋亡的影响。方法四甲基偶氮唑盐法检测Obestatin对3T3-L1前脂肪细胞增殖影响；AnnexinⅤ-FITC/PI流式细胞术分析obestain对3T3-L1前脂肪细胞凋亡率，应用方差分析和t检验。结果obestatin抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖，剂量依赖性，与对照组相比，P＜0.05，有显著性差异。加入obestatin干预后前脂肪细胞凋亡率较对照组显著升高（P＜0.05）。结论Obestatin抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖并且促进其凋亡。

肥胖抑制素；前脂肪细胞；细胞增殖；细胞凋亡

前脂肪细胞是具有增殖能力和向脂肪细胞分化潜力的一类前体细胞。如果能找到抑制前脂肪细胞增殖和分化和促进其凋亡的药物，则有望抑制肥胖的发生。

Obestatin(肥胖抑制素)是2005年由Zhang[1]等发现的一种由ghrelin基因编码的生物活性多肽，拮抗ghrelin刺激食欲的作用。另外Obestatin可以抑制胃的运动和空肠收缩。用Obestatin处理过的大鼠，体质指数增加缓慢。研究表明Obestatin与ghrelin在调节摄食和体重上是一对功能相反的调节因子[2]。有研究发现ghrelin作用于3T3-L1前脂肪细胞后，细胞增殖分化加速，细胞凋亡减慢。Obestatin对前脂肪细胞的增殖和凋亡是否有作用。本文观察obestatin 对3T3-L1前脂肪细胞增殖和凋亡的影响，进一步探讨obestatin在肥胖发生过程中的作用。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料 3T3-L1前脂肪细胞株购自美国ATCC公司，大鼠Obestatin购自Phoenix公司，地塞米松、牛血清蛋白、小牛血清、DMEM培养基，MTT等其他试剂均购自于上海实生细胞生物技术有限公司。

1.2 3T3-L1前脂肪细胞增值的检测将1.5×104/ml 3T3-L1前脂肪细胞接种于96孔板，在含1%小牛血清的DMEM培养基中（37℃，5%CO2）培养24 h。当细胞融合70%时，加入无小牛血清的DMEM培养液过夜。试验组加入不同浓度的obestatin（10-5、10-6、10-7、10-8、10-9mol/L），以生理盐水作为对照组。作用24 h、48 h时加入MTT培养液培养6 h，然后将培养液吸干，每孔加入200 μ l DMSO，混匀后酶标仪570 nm波长处测定各孔吸光度值，建立细胞数目曲线，计算加药后24 h、48 h的细胞数目。

1.3 3T3-L1前脂肪细凋亡的检测 Annexiv-FITC/PI染色流式细胞仪检测。收集正常组3T3-L1前脂肪细胞以及加入不同浓度Obestatin的3T3-L1前脂肪细胞（Obestatin浓度同细胞增殖试验），用细胞凋亡检测试剂盒处理后上流式细胞仪检测，用Flowjo软件分析计数，不同凋亡时期的细胞占细胞总数的百分比为凋亡率。

1.4 统计学处理 应用PEMS3.2软件，所获数据采用方差分析和t检验。

2 结果

2.1 Obestatin对3T3-L1前脂肪细胞增殖凋亡的影响

应用不同浓度的Obestatin干预3T3-L1前脂肪细胞增殖、凋亡过程，与对照组相比，加入Obestatin后明显抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖，凋亡率显著增加，并且浓度越大抑制作用越强，与对照组相比，P＜0.05，有显著性差异。见表1。

表1 obestatin对3T3-L1前脂肪细胞增殖、凋亡的影响

表1 obestatin对3T3-L1前脂肪细胞增殖、凋亡的影响

注：(*P＜0.05，**P＜0.01)

组别对照组10-5mol/L 10-6mol/L 10-7mol/L 10-8mol/L 10-9mol/L凋亡率(%) 56.3±5.7 61.4±6.2 66.2±5.6 72.8±4.7 69.5±5.4 57.2±4.3 24h 5.75±0.16 4.51±0.07** 4.78±0.09** 4.93±0.12* 5.12±0.10* 5.47±0.08 48h 8.92±0.11 6.46±0.15** 7.21±0.06** 7.72±0.18** 7.93±0.14* 8.17±0.17

3 讨论

随着生活水平提高，肥胖发生率逐年提高。肥胖是一种慢性代谢性疾病，以体内脂肪细胞体积增大和脂肪数目增多为主要特征[4]。由于肥胖原因比较复杂，并且机制不明，所以对于肥胖的发生并没有有效的控制措施。因此，对于肥胖的病因以及治疗措施的研究成为各个实验室的热点。脂肪细胞是由前脂肪细胞增殖分化来的。因此，研究前脂肪细胞增殖和凋亡的过程中受到哪些因素的影响对控制肥胖的发生以及肥胖的治疗具有重要的意义。

Obestatin是Ghrelin基因编码的生物活性多肽，可以拮抗Ghrelin的促进食欲作用。在调节摄食和能量平衡过程中是一对相反的因子[2]。有研究表明Ghrelin可以促进3T3-L1前脂肪细胞的增殖和分化，抑制其凋亡。本文用不同浓度的Obestatin对3T3-L1前脂肪细胞增殖和凋亡的影响。结果表明10-5mol/ L～10-8mol/L Obestatin作用24 h、48 h后，明显抑制前脂肪增殖。这就表明可以利用Obestatin调控前脂肪细胞的增殖，抑制增殖，脂肪细胞数目减少，从而降低肥胖的发生率。Obestatin可以促进3T3-L1前脂肪细胞的凋亡，以10-7mol/L作用最明显。这表明可以利用Obestatin促进前脂肪细胞凋亡的作用，促进肥胖患者脂肪细胞加速凋亡，从而达到降低体重，治疗肥胖的目的[5]。以上两方面的研究表明应用Obestatin后，脂肪细胞的数目减少。

综上所述，Obestatin可以抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖，促进其凋亡，与Ghrelin作用相反。这些实验表明Obestatin在抑制肥胖发生过程中具有重要作用。这一发现为治疗肥胖开辟了新的视野。但是Obestatin抑制3T3-L1前脂肪细胞增殖、促进凋亡的机理还需要进一步研究。

[1] 刘静,林汉华,程佩萱,等.Ghrelin对3T3-L1前脂肪细胞增殖和凋亡作用的研究[J].临床儿科杂志,2009,27(7):666-669.

[2] 张征,邹大进,陈月,等.Obestatin抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖与分化[J].第二军医大学学报,2007,28(9):929-932.

[3] 李新明,高忠东,李群,等.红景天提取物对3T3-L1脂肪细胞增殖及细胞分化的影响[J].安徽农业科学,2015,(5):25-26,139.

[4] 李雪梅,翟丽东,王鹏华,等.脂肪因子Chemerin对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响[J].中华医学杂志,2015,95(26):2099-2103.

[5] 何阳,宋沙,薛志杰,等.不同品种犊牛血清对3T3-L1前脂肪细胞增殖与分化的影响[J].中国草食动物科学,2014,34(3):26-29.

Effect of Obestatin on The Proliferation and Apop tosis of 3T3-L1 Pread ipocytes

Huo Xinghua，Yan Changhong
(Heze Medical College，Heze 274000，Shandong)

ObjectiveTo explore the effect of ghrelin on the proliferation and apoptosis of 3T3-L1preadipocytes.Methods MTT method was used to detect proliferation of 3T3-L1 preadipocytes by obestatin.The influence of obestatin on the apoptotic rate of 3T3-L1 preadipocytes was analyzed by Annexin V-FITC/PI flow cytometry.analysis of variance and t test.ResultsCompared with the blank control group，obestatin-treatedgroups(various concentrations of obestatin)had significantly less ceils(P＜0.05).After the intervention of obestatin，the apoptotic rate of preadipocytes increased significantly when compared with control group（P＜0.05）.ConclusionObestatin can inhibi t the proliferation of 3T3-L1 preadipocyes and its apoptosis.

Obestatin;Preadipocytes；Proliferation；Apoptosis

R725

：A

：1008-4118（2016）01-0006-02

10.3969/j.issn.1008-4118.2016.01.003

2015-11-19