HER2和β-catenin在食管癌中表达的临床病理意义

(西安市第四医院消化科，陕西 西安 710004)

·临床医学·

HER2和β-catenin在食管癌中表达的临床病理意义

王君化*

(西安市第四医院消化科，陕西 西安 710004)

目的观察HER2和β-catenin在食管癌中的表达，并探讨其临床意义。方法以2013年10月～2014年10月在本院接受治疗的食管癌患者为观察对象，且同一病例的食管癌切除标本包括癌组织和5 cm以外的癌旁组织。观察HER2和β-catenin在癌组织和癌旁组织中的阳性表达率，比较不同临床病理特征的食管癌患者的HER2和β-catenin表达情况，分析HER2和β-catenin表达与患者预后的关系。结果HER2在癌组织中的阳性表达率高于癌旁正常组织，而β-catenin在癌组织中的阳性表达率低于癌旁正常组织(P<0.05)；中低分化、淋巴结转移、浸润深度为T3+T4、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期以及死亡的食管癌患者其癌组织中的HER2阳性表达率较高，而不同年龄、性别的患者HER2阳性表达率无明显差别；中低分化、淋巴结转移、浸润深度为T3+T4、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期以及死亡的食管癌其癌组织中的β-catenin阳性表达率较低，而不同年龄、性别的患者β-catenin阳性表达率无明显差别；HER2阳性表达率与患者生存率呈明显负相关，而β-catenin阳性表达率与患者生存率呈明显正相关(r=0.346、0.452，P<0.05)。结论HER2在食管癌患者中高表达，β-catenin在食管癌患者中低表达，且与患者预后密切相关。

食管癌； HER2； β-catenin； 生存率

食管癌是常见的消化道肿瘤，全世界每年约有30万人死于食管癌。其发病率和死亡率各国差异很大，我国是世界上食管癌高发地区之一，每年平均病死约15万人[1]。近年来食管癌的发生率呈现出了逐年上升的趋势，相关临床研究证实，35%左右的食管癌早期诊断时已失去手术机会[2]。

免疫靶向治疗是近年来肿瘤综合性治疗的重要方式，对于无法手术的患者可以通过联合放化疗以及生物靶向治疗来提高患者的中位生存时间。肿瘤的基础理论研究发现，β-链蛋白(β-catenin)最早作为一种粘附因子被发现，广泛存在于各种类型的细胞，在参与这些细胞的增殖、分化和凋亡等方面发挥了重要的调节作用[3]。人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor-2,HER2)基因具有酪氨酸激酶活性，可以通过对于下游癌基因转录翻译产物的络氨酸酶的修饰作用，进而调控细胞周期。HER2以及β-catenin广泛参与到了乳腺癌、甲状腺癌以及卵巢癌等恶性肿瘤的发生发展[4-5]，但在食管癌中的研究较少。本次研究重在探讨HER2和β-catenin在食管癌中的表达，并探讨其临床意义，从而为食管癌的免疫治疗提供新的靶点。

1 资料与方法

1.1研究对象选取2013年10月～2014年10月在本院接受治疗的食管癌患者为研究对象。纳入标准：(1)年龄≥18周岁；(2)术后病理确诊为食管癌；(3)无其他系统严重疾病。排除标准：(1)不符合纳入标准者；(2)预期存活时间≤6个月；(3)自愿参与本项研究者。根据纳入、排除标准共纳入研究对象85例，男42例，女43例、年龄45～72岁，平均58.75±15.64岁；其中高分化者52例，中、低分化者33例；淋巴结转移者35例，未转移者50例；浸润深度：T1+T2者：50例，T3+T4者35例；TNM分期[6]：Ⅰ+Ⅱ期者45例，Ⅲ+Ⅳ期者40例。

1.2方法组织采用石蜡包埋，切片机切取组织，厚度5 mm，用多聚赖氨酸处理。在脱蜡之前，将切片置于60 ℃恒温箱中烘烤60 min。将切片用二甲苯浸泡10 min，更换二甲苯后再浸泡10 min。水化后进行抗原修复，3%H2O2一甲醇溶液处理切片15 min，加入一抗 HER2和β-catenin鼠单抗100 μL，37 ℃，湿盒孵育1 h。加入增强剂50 L，室温湿盒孵育20 min。加入HRP标记二抗50 μL，室温37 ℃，孵育30 min。每张片子加2滴新鲜配制的DAB溶液，显微镜下观察。HOF03光学显微镜购自上海波斯特精密仪器有限公司，一抗HER2(批号:2016L01387克隆号：14Y2)和β-catenin鼠单抗(批号:2014L01304 克隆号：14C6)购自南京凯基生物科技有限公司，HRP标记二抗兔抗鼠购自罗氏检测公司。

1.3评价指标观察HER2和β-catenin在癌组织和癌旁组织中的阳性表达率[7-8]，比较不同临床病理特征的食管癌患者的HER2和β-catenin表达情况，分析HER2和β-catenin表达与患者预后的关系。HER2和β-catenin阳性表达图见图1。

图1 HER2和β-catenin阳性表达图 A:HER2阳性表达图;B:HER2阴性表达图；C:β-catenin阳性表达图;D:β-catenin阴性表达图

1.4统计学处理所有数据经双人录入后，采用SPSS 11.5统计软件进行统计学分析。计数资料采用例或百分率表示，计量资料采用均数±标准差表示。HER2和β-catenin在癌组织和癌旁组织中的阳性表达率及不同临床病理特征的食管癌患者的HER2和β-catenin表达情况采用卡方检验进行分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 HER2和β-catenin在癌组织和癌旁组织中的阳性表达率比较HER2在癌组织中的阳性表达率高于癌旁正常组织，而β-catenin在癌组织中的阳性表达率低于癌旁正常组织(P<0.05)。见表1。

表1HER2和β-catenin在癌组织和癌旁组织中阳性表达率的比较(例,%)

组别HER2阳性阴性β⁃catenin阳性阴性癌组织65(7647)20(2353)23(2705)62(7295)癌旁正常组织17(2000)68(8000)48(5647)37(4353)χ2值54．27915．116P值<0．001<0．001

2.2不同临床病理特征的食管癌患者的癌组织HER2阳性表达率的比较由表2可知，中低分化、淋巴结转移、浸润深度为T3+T4、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期以及死亡的食管癌患者其癌组织中的HER2阳性表达率较高，而不同年龄、性别的患者HER2阳性表达率无明显差别。见表2。

表2不同临床病理特征的食管癌患者的HER2阳性表达率的比较(例,%)

项目例数阳性阴性χ2值P值年龄(岁)0．7740．379 ≥654835(72．9)13(27．1) <653730(81．1)7(18．9)性别0．2040．652 男4233(78．57)9(21．43) 女4332(74．42)11(25．58)分化程度6．2500．012 高分化5235(67．31)17(32．69) 中、低分化3330(90．91)3(9．09)淋巴结转移10．4950．001 有3533(94．29)2(5．71) 无5032(64．00)18(36．00)浸润深度7．3990．007 T1+T25033(66．00)17(37．78) T3+T43532(92．50)3(7．50)TNM分期10．7890．001 Ⅰ+Ⅱ期4528(62．22)17(37．78) Ⅲ+Ⅳ期4037(92．50)3(7．50)预后8．0470．005 死亡2020(100．00)0(0．00) 存活6545(69．23)20(30．77)

2.3不同临床病理特征的食管癌患者的β-catenin阳性表达率的比较中低分化、淋巴结转移、浸润深度为T3+T4、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期以及死亡的食管癌其癌组织中的β-catenin阳性表达率较低，而不同年龄、性别的患者β-catenin阳性表达率无明显差别。见表3。

表3不同临床病理特征的食管癌患者的β-catenin阳性表达率的比较(例，%)

项目例数阳性阴性χ2值P值年龄(岁)0．2480．618 ≥654814(29．17)34(70．83) <65379(24．32)28(75．68)性别0．0960．756 男4212(28．57)30(71．43) 女4311(25．58)32(74．42)分化程度8．8240．003 高分化5220(38．46)32(61．54) 中、低分化333(9．10)30(90．90)淋巴结转移4．9180．027 有355(14．29)30(85．71) 无5018(36．00)32(64．00)浸润深度7．3650．007 T1+T25019(38．00)31(62．00) T3+T4354(11．43)31(88．57)TNM分期8．1140．004 Ⅰ+Ⅱ期4518(40．00)27(60．00) Ⅲ+Ⅳ期405(12．50)35(87．50)预后6．4480．011 死亡201(5．00)19(95．00) 存活6522(33．85)43(66．15)

2.4 HER2和β-catenin的阳性表达率与患者生存率的关系HER2阳性表达率与患者生存率明显负相关(r=-0.346，P<0.05)，而β-catenin阳性表达率与患者生存率呈明显正相关(r=0.452，P<0.05)。

3 讨 论

食管癌早期临床症状多不明显，可表现为非特异性的食物梗噎感、胸骨后烧灼样疼痛不适，食管癌典型的症状为进行性咽下困难，先是难咽干的食物，继而是半流质食物，最后水和唾液也不能咽下。食管癌进展期对于临近部位的器官或者组织的压迫作用可以产生Horner综合征、声音嘶哑，部分患者可有明显的恶病质表现。通过食管镜或者胃镜对于食管以及食管胃贲门交界处黏膜上皮的观察，可以对于可疑的早期病变进行内镜下取材活检。但相关研究证实，我国农村地区食管癌的早期临床诊断水平较低，约1/3左右的患者临床确诊时已失去手术机会[6-7]。而单纯放化疗治疗的临床效果有效，Kanaya N等[8-9]学者分析了食管下端鳞状细胞癌患者的放化疗资料，发现联合放化疗的总体病情缓解率不足55%，患者术后五年生存率并无明显改善。肿瘤的生物免疫学治疗是近年来发展较快的学科，对于食管癌早期病变过程中相关癌基因以及癌蛋白修饰产物的研究，有利于进一步揭示食管癌临床进展的相关因素，并为食管癌的靶向治疗提供理论基础。

HER2主要通过有丝分裂原活化蛋白激酶(MAPK)及磷脂酞肌醇—3—激酶(P13K)两条途径将信号传递至入核，这种信号转导的级联反应最终引起核内早期反应基因转录水平的增加,使细胞增殖、转化[10]。β-catenin参与到了细胞粘附、细胞极性的维持以及正常上皮组织的分化等病理过程，同时可以通过对于wnt通路激活进而调控细胞凋亡相关蛋白BCL-2以及BAX的表达，参与到恶性肿瘤[11]的早期过程[12-13]。本次研究的创新性在于首次探讨了HER2和β-catenin与食管癌患者临床病理特征如细胞分化程度或者淋巴结转移间的关系。

本次研究分析了HER2和β-catenin在癌组织和癌旁组织中的阳性表达率比较，发现HER2在食管癌组织中的表达明显高于食管癌旁组织，而β-catenin在食管癌旁组织中的表达更高，提示HER2可能促进了食管癌病灶的早期发生发展，而β-catenin对于抑制肿瘤细胞增殖、侵袭或者分化等病理过程中可能具有重要的保护作用。乔建兵等[14-15]学者发现，食管癌组织中浸润深度为T1+T2的患者，其免疫组化分析结果可见HER2的阳性表达率可达33%，明显高于癌旁组织4.8%的阳性率，同时低分化的鳞状细胞癌患者，其HER2阳性表达水平可上升3～4倍。本次研究的结果与乔建兵等较为一致，中低分化、淋巴结转移、浸润深度为T3+T4、TNM分期为Ⅲ+Ⅳ期的食管癌患者其癌组织中的HER2阳性表达率较高，临床上对于食管癌根治性手术的患者，术后联合检测HER2蛋白的表达，对于评估患者的临床转归、术后联合放化疗方案的制定等可能具有重要的参考价值。β-catenin不仅是一种细胞间的黏附分子，可以与E钙黏蛋白形成复合体，再与肌动蛋白的细胞骨架相连，进一步加强细胞之间的紧密连接，保持细胞的稳定性，同时对于抑制细胞异常扩增和减轻细胞侵袭能力等方面具有重要的生物学意义。本次研究发现，β-catenin与食管癌患者的临床病理特征间的关系较为明显，细胞分化水平较差、浸润深度较高以及临床分期较晚的患者，β-catenin蛋白水平的表达反而较低，提示β-catenin对于抑制食管癌病灶的临床进展具有重要的保护意义。β-catenin作为一个新的癌基因与食管癌的发生有关，对其作用机制的进一步深入研究有可能使其成为肿瘤治疗的新靶点。最后，本次研究发现HER2阳性表达率与患者生存率明显负相关，而β-catenin阳性表达率与患者生存率明显正相关，HER2和β-catenin与食管癌患者的临床预后或者临床治疗结局具有密切的关系，HER2阳性率越高患者的预后越差，病死率越高，而β-catenin阳性率越高患者的预后越好，患者食管癌手术或者放化疗治疗后的生存率更高，通过术后检测HER2和β-catenin的表达，可以为评估患者的远期生存时间提供参考。

HER2在食管癌患者中高表达，β-catenin在食管癌患者中低表达，EGFR过表达、β-catenin表达的下降可能在食管鳞癌的发展、浸润、转移中起重要作用，提示联合监测二者的表达可为食管癌进展程度和预后判断提供帮助,亦为食管癌的基因治疗提供一个新的思路。

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ExpressionandSignificanceofHER2and-catenininEsophagealCarcinoma

WANG Junhua
(Xi’anFourthHospital,Xi’an,Shanxi710004,China)

ObjectiveTo observe the expression of HER2 and-catenin in esophageal carcinoma,and to explore its clinical significance.MethodsEsophageal cancer patients treated in our hospital from October 2013 to October 2014 were selected as the observation object,and esophageal cancer resection specimens of the same case included cancer tissue and adjacent to the 5 cm.Observe positive expression rate of HER2 and beta catenin in cancer tissue and paracancerous tissue,compare the different clinical and pathological features of esophageal cancer patients with HER2 and beta catenin and analyze the relation between expression of HER2 and beta catenin and the prognosis of patients.ResultsThe positive expression of HER2 in cancer tissues was higher than that in normal tissues,but the expression of beta-catenin in cancer tissues was lower than that of normal tissues,the difference was statistically different(P<0.05);Low differentiation,lymph node metastasis,infiltration depth for T3 + T4,TNM stage III and IV and the death of esophageal cancer patients in their cancer tissues of women with HER2 positive rate is higher,and in different gender and age in patients with HER2 positive expression rate had no significant difference;low differentiation,lymph node shift,depth of invasion for T3 + T4,TNM stage III and IV and the death of esophageal cancer tumor tissue of beta catenin positive expression rate is low,and positive expression of beta catenin in patients with different age and gender rate has no obvious difference.The positive expression rate of HER2 was negatively correlated with the survival rate of patients,but the positive expression rate of-catenin was positively correlated with the survival rate of the patients (r=0.346,0.452,P<0.05).ConclusionsHER2 is highly expressed in esophageal cancer patients,and the expression of-catenin in esophageal cancer patients is low,which is closely related to the prognosis of patients with esophageal cancer.

Esophageal carcinoma; HER2; -catenin; survival rate

10.15972/j.cnki.43-1509/r.2016.05.012

2016-03-17；

2016-06-28

*通讯作者，E-mail:121281256@qq.com.

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