Axl及其配体Gas6在宫颈鳞癌中的表达与意义

程甜甜，杨贤子，骆志国

(湖北省十堰市太和医院·湖北医药学院附属医院肿瘤科,湖北 十堰 442000)



Axl及其配体Gas6在宫颈鳞癌中的表达与意义

程甜甜，杨贤子，骆志国

(湖北省十堰市太和医院·湖北医药学院附属医院肿瘤科,湖北 十堰 442000)

目的：探讨Axl及其配体Gas6 蛋白在宫颈鳞癌组织中的表达情况及其与临床特征的关系。方法：收集87 例经手术切除的宫颈鳞癌组织、42例宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)组织和28例正常宫颈组织。采用免疫组化SP法分别检测Axl及其配体Gas6 蛋白的表达情况，并分析其表达在良恶性组织之间和不同临床病理状态下的差异。结果：Axl及Gas6 蛋白在宫颈鳞癌组织中的阳性表达率较高，而在CIN组及正常宫颈组织中较低，差异有统计学意义(P<0.05) 。Axl及Gas6 蛋白的表达在不同宫颈鳞癌组织分化程度和盆腔淋巴结转移之间差异有统计学意义(P<0.05) 。而在年龄、临床分期和肿瘤大小之间无统计学意义，P值均>0.05。经Spearman等级相关分析发现宫颈鳞癌组织中Axl和Gas6蛋白表达存在正相关(rs=0.74，P=0.03) 。结论：Axl及其配体Gas6蛋白的表达水平与宫颈鳞癌发生、增殖、侵袭及盆腔淋巴结转移关系密切。深入机制的研究可能使Axl蛋白成为宫颈鳞癌靶向治疗一个新的潜在的分子靶点。

子宫颈癌；Axl；Gas6；免疫组织化学

Axl 是构成TAM受体酪氨酸激酶的蛋白分子之一，该酶还包括Tyro 3、Mer两个蛋白分子。Axl蛋白拥有两个配体：生长停滞特异性蛋白6(growth arrest-specific protein 6, Gas6)和人血浆抗凝蛋白 S(Protein S)[1]。研究证明Axl/Gas6信号通路异常活化可导致下游信号传导失控而引起多种肿瘤(如乳腺癌、肺腺癌、前列腺癌等)的发生、发展，与肿瘤的增殖、侵袭、转移、肿瘤休眠、肿瘤细胞耐药等密切相关[2-3]。但国内有关Axl及其体Gas6蛋白在宫颈鳞癌组织中的表达情况研究鲜有报道，本文对此进行了初步的探讨和研究。

1 材料与方法

1.1 一般资料

收集2009年3月1日至2011年4月1日湖北省十堰市太和医院妇科经手术切除的 210 例宫颈组织标本，去除临床资料不齐全的，共选取病理科存档的石蜡标本 157 例。年龄24 ～ 65 岁，平均年龄(38.73±6.53)岁，中位年龄39岁。全组病例均经病理确诊，其中宫颈鳞癌87 例，宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)组织 42 例(本研究中列为CIN组)，因子宫肌瘤行子宫全切术的正常宫颈组织28 例(本研究中列为对照组)。根据国际妇产科联盟(FIGO)2009年修订的分期标准，宫颈癌患者中I期60例，IIA期27例；其中24例有盆腔淋巴结转移；高分化37例，中低分化50例。CIN Ⅰ 17例，CIN Ⅱ～Ⅲ 25例。所有患者术前均未接受过放疗、化疗、激素和中草药物等治疗。

1.2 主要的试剂和抗体

本研究中兔抗人Axl 及 Gas6多克隆抗体均购自 Santa Cruz公司，DAB 显色试剂和二步法(SP法)抗兔/鼠通用型免疫组化检测试剂盒购自北京中杉生物技术公司。

1.3 免疫组织化学染色法

所有的手术标本送至本院病理科进行石蜡包埋，进行厚度为4 μm连续切片。按免疫组化SP法的实验步骤严格操作。免疫组化阳性结果的判断标准：Axl 和Gas6蛋白阳性表达均为细胞浆内出现黄色或棕黄色颗粒，而胞核和间质不着色。染色强度评分标准：0分为无染色；1分为淡黄色染色；3分为深黄色或棕黄色染色；2分为介于1分和3分之间的染色强度。在×400倍的正置显微镜视野下随机选择5个阳性染色区域(含至少100个细胞)，计算出阳性细胞百分比的平均值，并规定：≤10%为0分，11%～ 25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分。将上述两项评分结果相乘，并规定：0分为阴性(-)；1～3分为弱阳性(+) ；4～8分为阳性(++)；9～12分为强阳性(+++)。将强阳性(+++)和阳性(++)的定义为阳性表达，并计算出相应的阳性表达率。具体见文献[2]。

1.4 统计学分析

采用SPSS 17.0软件进行数据处理，数据以表示；两组定性资料组间和四格表资料比较均用χ2检验；相关性分析采用Spearman相关分析。以P<0.05判定差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Axl和Gas6蛋白在宫颈鳞癌、宫颈上皮内瘤变及正常宫颈组织中的表达

Axl及Gas6蛋白在宫颈鳞癌组织中的阳性表达率均明显高于宫颈上皮内瘤变及正常宫颈组织，差异有统计学意义(P<0.05)。然而，宫颈上皮内瘤变与正常宫颈组织之间表达的差异无统计学意义(P>0.05)，见表1和图1。

表1 Axl 和Gas6 在不同宫颈组织中的表达情况(%)

*P<0.05，与癌组织比较。

2.2 Axl和Gas6蛋白在不同临床病理参数的宫颈鳞癌组织中的表达情况

Axl 及Gas6 蛋白的表达在不同年龄、临床分期和肿瘤大小之间无统计学意义，P值均>0.05；而在不同组织分化程度和盆腔淋巴结转移中差异有统计学意义(P<0.05)。随分化程度的降低和盆腔淋巴结转移的增多呈逐渐增加趋势(P<0.05)。见表2。

2.3 在宫颈鳞癌组织中Axl 和Gas6 蛋白之间的相关性分析

经Spearman等级相关分析，Axl 与Gas6 的rs值为0.74，Axl 和Gas6在宫颈鳞癌中的表达呈正相关(P=0.03)。

表2 Axl和Gas6蛋白在不同临床病理参数的宫颈鳞癌组织中的表达情况(%)

临床病理参数nAxl的阳性表达率Gas6的阳性表达率P值年龄 ≤50岁2948．3(14/29)34．5(10/29)0．176 >50岁5851．7(30/58)37．9(22/58)TNM分期 I期6041．7(25/60)35．0(21/60)0．084 IIA期2748．1(13/27)44．4(12/27)肿瘤大小 <4cm6646．9(31/66)39．4(26/66)0．069 ≥4cm2157．1(12/21)47．6(10/21)组织分化程度 高分化3732．4(12/37)29．3(11/37)0．021 中低分化5054．0(27/50)48．0(24/50)盆腔淋巴结转移 有2454．1(13/24)45．8(11/24)0．033 无6338．1(24/63)34．9(22/63)

3 讨论

2012年中国肿瘤登记中心发布最新数据指出随着我国经济水平的提高和生活方式的开放，宫颈癌的发病率逐年增高，其发病率为12.96/10万，已超过了2014年美国ACS cancer statistics的结果(宫颈癌发病率为12.36/10万)，且我国的宫颈癌还存在着年轻化的趋势[4-5]。虽然我国宫颈癌的治愈率和5年生存率随着医疗技术的进步而有所提高，且依靠定期检测高危型人乳头瘤病毒感染或CIN的患者可以减少宫颈癌的发病率，但宫颈癌的早期诊断和临床预后仍不理想，究其原因还是用于早期诊断和判断临床预后的肿瘤标志物或指标过少。

Axl基因最早是从人慢性髓细胞白血病中分离出来的原癌基因。该基因编码的蛋白结构上与神经细胞黏附分子十分相似。胞质区为酪氨酸激酶样区，具有激酶活性。大量的研究发现：Axl与其配体Gas6蛋白结合后会发生胞内区酪氨酸残基的磷酸化，从而通过激活多个信号传导通路来调节细胞的生物学活性变化，包括细胞的增殖、凋亡、黏附和转移、炎症反应等[6-9]。

近年来，关于Axl与肿瘤的相关性研究已成为了热点。研究发现Axl在肿瘤细胞中的高表达与细胞的恶性表型、肿瘤分化差、预后不良等密切相关[10]。国内的黄钢等[11]研究发现：在前列腺癌组织中Axl及其配体Gas6蛋白的阳性表达率高于良性前列腺增生组织，且两者表达与肿瘤的性质关系密切。张明帅等[12]通过Western blotting技术和免疫组化技术发现在乳腺癌组织中Axl和Gas6蛋白的表达显著高于良性对照组织及癌旁组织。这也证实了Axl和Gas6蛋白在有腋窝淋巴结转移乳腺癌的阳性表达率高于无淋巴结转移的患者(80% vs.48%)。Sun等[13]发现与正常的子宫内膜组织相比，Axl及Gas6蛋白在人类子宫内膜癌组织中表达显著升高，而癌组织中凋亡细胞的百分比下降。因此，我们猜测Axl及其配体Gas6蛋白的异常表达可能与癌细胞增殖、凋亡、细胞粘附与转移等生物功能的变化密切相关。

本研究通过免疫组化技术分别检测Axl及Gas6蛋白在不同宫颈组织中的表达水平。在宫颈鳞癌组织中Axl及Gas6蛋白的阳性表达率显著增高，与CIN及正常宫颈组织相比，差异均有统计学意义(P< 0.05)。随后，进一步分析在不同临床病理特征下的上述两种蛋白表达情况，发现中低分化的宫颈鳞癌患者Axl及Gas6 蛋白的阳性表达率分别为54.0%和48.0%，显著高于高分化组的32.4%和29.3%，差异有统计学意义(P<0.05)。同时也发现在盆腔淋巴结转移组中Axl及Gas6蛋白的阳性表达率分别为54.1%和45.8%，高于无淋巴结转移组的38.1%和34.9%，差异有统计学意义(P<0.05) 。但我们并没有发现Axl及Gas6蛋白的表达与宫颈鳞癌的年龄、临床分期和肿瘤大小存在相关性，P值均>0.05。经Spearman等级相关分析发现宫颈鳞癌组织中Axl和Gas6蛋白表达存在正相关(r=0.742，P=0.026) 。因此，本研究表明Axl、Gas6蛋白的表达水平与宫颈鳞癌发生、增殖、侵袭及盆腔淋巴结转移关系密切。

综上所述，Axl及其配体Gas6蛋白的异常表达在多种恶性肿瘤的发生、黏附和转移、抑制凋亡等方面发挥重要的作用，可以将其作为诊断肿瘤的潜在标志物。进一步深入研究Axl及其配体Gas6蛋白在宫颈鳞癌发生、发展中的分子机制，并针对其激活的下游信号传导通路设计出特异性抑制剂，很可能找到预防和治疗宫颈鳞癌的方法和药物。Axl可能成为宫颈癌靶向治疗一个新的潜在分子靶点。

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[12]张明帅,朱丽萍,欧江华,等.Axl及其配体在乳腺癌组织中的表达及临床意义[J].临床肿瘤学杂志,2014,19(1):29-33.

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(学术编辑：谭榜宪)

The expression and significance of Axl and its ligand Gas6 in tissue of cervical squamous cell carcinoma

CHENG Tian-tian,YANG Xian-zi,LUO Zhi-guo

(DepartmentofMedicalOncology,TaiheHospitalAffiliatedtoHubeiUniversityofMedicine,Shiyan442000,Hubei,China)

Objective：This study aimed to detect the expression of Axl and its ligand Gas6 in tissue of cervical squamous cell carcinoma (CSCC) and analyze the correlation between Axl and Gas6 expression and clinicopathological features.Methods：The expression of Axl and its ligand Gas6 proteins in 87 cases of CSCC and 42 cases of cervical intraepithelial neoplasia (CIN) and 28 cases of normal cervical epithelium were examined by the standard streptavidin-biotin-peroxidase (SP) complex method. Then the expressive levels of Axl and Gas6 proteins between the benign and malignant tissues, and different clinicopathological features were analyzed.Results：The expression of Axl and Gas6 proteins in CSCC were significantly higher than that in CIN and normal cervical epithelium groups (P< 0.05). Axl and Gas6 high expression was negatively correlated with the degree of CSCC histological differentiation, and positively correlated with pelvic lymph node metastasis (P<0.05), but no with age,clinical stage and tumor size (P>0.05).The expression of Axl was positively correlated to Gas6 using spearman rank correlation method (rs=0.74，P=0.03).Conclusion：Axl and Gas6 proteins play an important role in the occurrence and development of carcinoma of uterine cervix,and may be closely associated with the degree of CSCC histological differentiation and pelvic lymph node metastasis.Our study suggested that Axl and Gas6 proteins may serve as potential biomarkers in molecular-targeted therapy of cervical cancer.

Carcinoma of uterine cervix;Axl;Gas6;Immunohistochemistry

10.3969/j.issn.1005-3697.2016.02.23

2015-07-08

程甜甜(1981-)，女，硕士研究生。E-mail: 59929508@qq.com

时间：2016-4-25 11∶31

http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20160425.1131.046.html

1005-3697(2016)02-0228-04

R735.33

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