武汉地区人群血清游离脂肪酸参考区间的探索*

周 燕，马 培，韩 露

(武汉大学中南医院：1.消化内科;2.基因诊断中心，武汉 430071)



·论 著·

武汉地区人群血清游离脂肪酸参考区间的探索*

周 燕1，马 培2，韩 露2

(武汉大学中南医院：1.消化内科;2.基因诊断中心，武汉 430071)

目的 初步建立武汉地区人群血清游离脂肪酸(NEFA)酶法参考区间。方法 选择该院健康体检者1 250例作为研究对象，采用奥林巴斯AU5400生化分析仪及Sekisui酶法检测试剂检测血清NEFA。回归分析NEFA的影响因素，正态分布法估计NEFA 95%参考区间，并验证参考区间。结果 回归分析显示体质量指数(BMI)及年龄对NEFA有显著影响(P<0.01)。NEFA在大于或等于60岁最高，18～<45岁次之，45～<60岁最低；NEFA在BMI<18.5 kg/m2组最高。估计武汉地区健康人群NEFA 95%参考区间为204.6～975.2 μmol/L。临床验证者的测定范围为242.0～831.2 μmol/L，符合上述参考区间。结论 初步建立武汉地区健康人群NEFA参考区间。

酶法； 血清游离脂肪酸； 参考区间

游离脂肪酸(NEFA)是一类非酯化脂肪酸，主要成分为油酸、亚油酸、软脂酸等。NEFA不仅是人体包括心、肝、骨骼肌等器官优先选择的能源物质，还是参与氧化应激及胰岛素抵抗的重要物质[1-3]。在介导血管内皮细胞损伤致动脉粥样硬化及冠心病的发生、发展中起到重要作用。血清NEFA水平与脂代谢、糖代谢及内分泌功能等密切相关。研究表明，与血清三酰甘油及胆固醇比较，NEFA水平更能敏感地反映机体脂代谢的变化[4]。因此建立NEFA参考区间十分必要。本文检测分析武汉市部分健康体检者的NEFA水平，旨在初步建立武汉地区健康人群血清NEFA参考区间，为心血管疾病等提供诊疗依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择长期居住于武汉地区，于2013年5～9月在武汉大学中南医院进行体检的健康汉族成年人。所有受试者经武汉大学中南医院伦理委员会审核批准，本人签署知情同意书。

1.2 纳入与排除标准[5]所有入选对象经病史询问、常规体格检查以及实验室检查包括心电图、X线片、腹部B型超声波检查、肝肾功能检测等，各项检测指标均显示正常。排除冠心病、脑卒中、高血压、血脂异常、糖尿病、非酒精性脂肪肝、其他动脉粥样硬化性疾病病史等，排除乙肝病毒携带者及年龄小于18岁者。

1.3 方法与试剂 收集清晨空腹全血，经4 000 r/min离心5 min，收集血清，于-80 ℃冰箱储存。血清标本在检测前复苏至室温并保持15 min，于武汉大学中南医院检验科进行检测，检测系统为奥林巴斯AU5400生化分析仪，检测试剂为Sekisui NEFA检测试剂盒，产品批号803RIJ。校准物质为Sekisui NEFA，批号816RKI，具有校准物质溯源性。质控品为2个定值质控品，批号分别为1004231、1103147。以上试剂由积水医疗科技(中国)有限公司生产提供。

1.5 参考区间验证 随机从上述参考人群按不同年龄分组共抽取60例用于参考区间的验证。若检测结果最少95%(57例)位于新建参考区间内，不超过3例结果未位于该参考区间，判定参考区间有效。若有4例或4例以上在该参考区间外，须另外收集第2组参考人群重新检测。第2组检测数据不超过4例结果落在参考区间外，则认为验证有效；若第2组数据超过4例结果在参考区间外，首先检查检测系统性能及检测程序是否正确，再考虑该项目是否具有人群生物特性，进行下一步的调查，重新建立生物参考区间[6]。

2 结 果

2.1 参考人群的选择 参照排除标准后，收录符合本研究要求的共1 250例健康者，年龄18～88岁。其中男588例，平均年龄(43±19)岁；女662例，平均年龄(40±17)岁。

2.2 参与检验中心的标准化 空白及校准物质OD值分别为0.000 005±0.001与0.215 7±0.001 176，校准曲线校准系数为0.976。高、低浓度质控品均值及标准差分别为804.47±29.17、340.54±9.40，均在控，确认检测系统性能及检测程序正确。

2.4 1 250例健康者的NEFA水平 经K-S法检验，P<0.01，NEFA水平为偏态分布，经对数转换后P=0.2，符合正态分布。参考人群分别按性别、年龄及BMI分组，经比较男、女间NEFA平均水平差异无统计学意义(P=0.125)；年龄分组差异有统计学意义(P=0.001)，≥60岁组最高，18～<45岁组次之，45～<60岁组最低，≥60岁组与18～<45岁组及45～<60岁组差异均有统计学意义(P=0.002)，18～<45岁组较45～<60岁组高(P<0.01)；BMI分组中，BMI<18.5 kg/m2组较18.5～23.9 kg/m2组高(P<0.01)，但与大于23.9 kg/m2组比较差异无统计学意义(P=0.263)，18.5～23.9 kg/m2组与大于23.9 kg/m2组差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 1 250例健康者NEFA水平[M(P25，P75)，μmol/L]

2.5 NEFA水平与临床指标回归分析 经多变量线性逐步回归分析，BMI及年龄对NEFA有显著影响(P<0.01)。图1A为不同年龄段各BMI亚组的NEFA水平比较，可见各BMI组的NEFA水平随年龄增加先降低后升高的趋势，并且不同年龄段BMI<18.5 kg/m2组均较18.5～23.9 kg/m2组高(P=0.02，0.019，0.049)，其他组间差异无统计学意义(P>0.05)。图1B为不同BMI各年龄组的NEFA水平比较，可见各年龄组的NEFA水平随BMI增加而先降低后升高的趋势，同样可见不同年龄组BMI<18.5 kg/m2组均较18.5～23.9 kg/m2组高，差异有统计学意义(P<0.05)，其他组间差异无统计学意义(P>0.05)。

注：A为不同年龄组BMI亚组的NEFA水平，B为不同BMI组年龄亚组的NEFA水平。

图1 不同年龄及BMI组的NEFA水平

2.6 估计武汉地区人群NEFA 95%参考区间 武汉地区人群NEFA 95%参考区间为204.6～975.2 μmol/L。不同年龄组NEFA区间：18～<45岁参考区间为206.6～1 011.5 μmol/L，45～<60岁为198.9～914.6 μmol/L，≥60岁为250.2～1 051.1 μmol/L。

2.7 NEFA 95%参考区间的验证 按年龄分组，每组共选取参考个体20例，男女均为10例。60例临床验证者NEFA检测范围为242.0～831.2 μmol/L，检测范围未超出估计参考区间204.6～975.2 μmol/L。18～<45岁组NEFA检测范围为242.0～749.8 μmol/L，45～<60岁组检测范围为227.5～765.1 μmol/L，≥60岁组的检测范围为268.6～831.2 μmol/L，均属于各自的参考区间，因此确认本研究建立的参考区间具有临床适用性。

3 讨 论

本研究使用日本积水医疗株式会社研制的酶法试剂，该法具有良好精密度、高特异性、可直接用于自动生化分析仪等优点。使用该法检测1 250例健康成人血清NEFA水平，初步建立武汉市健康人群NEFA酶法参考区间。

血清NEFA与饮食习惯、年龄、性别及种族密切相关，本研究对象均为黄种人，饮食习惯未知，根据性别及年龄进行分组统计分析，以确定是否需要建立不同组别的参考区间。多元线性回归分析BMI及年龄对NEFA水平有显著影响，可根据此两类因素估计独立参考区间，考虑临床方便应用，本研究采用年龄分组估计独立参考区间。BMI是反映成人体质量与身高的关系，是判断人体胖瘦程度的一项重要指标，在筛查肥胖、超重等方面亦得到公认。根据《中华人民共和国卫生行业标准》对中国成人体质量判定，将参考人群分为不同BMI组，分别为体质量过低组、体质量正常组及体质量超重或肥胖组。本研究发现各个年龄组中随BMI增加，NEFA水平由高降低后轻度升高，体质量正常者水平最低。可见NEFA与BMI密切相关。据国内外有关BMI与心血管疾病的研究发现，BMI与心血管病病死率负相关[7]。肥胖也是导致心血管疾病重要危险因素，也是代谢综合征的主要表现及重要致病因素。在低BMI亚裔老年人群中发现，低BMI同样加重了高水平血清脂联素致心血管病病死率，是新理论“脂联素悖论”的新研究结果之一[8]。本课题研究也发现低BMI者NEFA水平高。NEFA在心血管疾病的危险分层中作用尚不明朗，有较多争议，且在急性心肌梗死及急性冠脉综合征致病机理亦未知，但众多科研人员在大宗著名的流行病学调查中发现健康成人随访22年后，基础NEFA水平高者发生心源性猝死率升高[9]。诸多证据间接解释了NEFA与BMI的密切关系，高或低BMI及高水平NEFA在心血管疾病中均有发病作用，是心血管疾病的危险因素。

经统计分析，年龄分组的NEFA水平显著不同，≥60岁组最高，18～<45岁组次之，45～<60岁组最低，年龄为影响NEFA水平的因素之一。NEFA平均水平为(528.8±229.3)μmol/L，与国内某些研究水平不同，李义龙等[10]评估296例健康者水平后设置参考区间96～740 μmol/L与本研究相较，低值、高值均较低，范围较窄，本研究与冯明等[11]研究比较水平类似。分析各类研究水平不同原因，考虑主要原因为个体间生物学变异导致，Widjaja等[12]报道血清NEFA的个体间生物学变异可达45%，且分析前变异如样品采集时间、采集部位、空腹时间、饮食运动状态至标本离心、标本保存条件等不同均可影响NEFA水平。另外，上述研究例数较少，必要的标本例数决定了参考限的精度，标本例数较少可以导致参考限精度降低，国际临床化学和实验室医学联盟推荐每组400例标本[13]，分组越多，需要的标本数量越大。本研究标本量较大，降低了因标本量因素造成的评估偏移。本文检测60例健康者血清NEFA得出验证范围为242.0～831.2 μmol/L，落在本研究估计参考区间内，但较估计参考区间“窄”，且较厂家提供的参考区间129～769 μmol/L水平略高。是否继续使用厂家提供或本文估计范围，仍需临床科室协助观察，建议半年后再一次进行验证，如验证范围与本次相似或临床发现有不适用的支持信息，实验室须自建NEFA生物参考区间[6]。

美国国家胆固醇教育计划研究表明，基于有高冠心病风险的健康人群建立的血清总胆固醇水平参考区间，可能出现体检者血清胆固醇水平远低于此参考区间上限，但其发展为不成熟冠心病的风险仍比一般人群高。因此，推荐建立血清胆固醇参考区间的人群应该选为冠心病发生率低地区的人群及发生率高的低风险人群。本研究采用的参考人群为武汉地区表面健康人群，心血管疾病发生风险未知，按国际临床化学协会剔除的建立参考区间的方法要求严格、程序复杂，自行制订存在客观难度，NEFA生物参考区间的建立仍需定期召开评审会议并咨询临床意见，在一定程度上保证NEFA参考区间的适用性。

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Investigation on reference interval of serum non-esterified fatty acid among population in Wuhan area*

ZHOUYan1,MAPei2,HANLu2

(1.DepartmentofGastroenterology; 2.CenterforGeneDiagnosis,ZhongnanHospital,WuhanUniversity,Wuhan,Hubei430071,China)

Objective To preliminarily establish the reference interval of serum non-esterified fatty acids(NEFA)among population in Wuhan area by enzymatic assay.Methods NEFA level of serum samples from A total of 1 250 individuals undergoing healthy physical examination in our hospital were selected as the research subjects.The Olympus AU5400 biochemistry analyzer and SEKISUI reagents were adopted to detect serum NEFA level.The regression analysis was adopted to analyze the NEFA influencing factors.The NEFA 95% reference interval was estimated by using the normal distribution method and the reference interval was verified.Results The regression analysis showed that the body mass index(BMI)and age had significant effect on NEFA(P<0.01).NEFA was highest in the group aged ≥60 years old,followed by the group of 18-<45 years old,and lowest in the group of 45-60 years old; NEFA was highest in the group of BMI<18.5 kg/m2.The 95% reference interval of NEFA for healthy population in Wuhan area was estimated as 204.6-975.2 μmol/L.The detected NEFA level for clinical verifiers was 242.0-831.2 μmol/L,which conformed to the above reference interval.Conclusion The serum NEFA reference interval among healthy population in Wuhan area is primarily established.

enzymatic assay; serum non-esterified fatty acids; reference interval

国家重点基础研究发展规划“973”资助项目(2012CB720605)。

周燕，女，副主任技师，主要从事消化疾病临床检验研究。△

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.23.004

A

1673-4130(2016)23-3249-03

2016-03-11

2016-05-29)