GLP体系下全自动血凝分析仪的3Q验证*

张 谦，张 微，吕晓丽，曹晓东，常福厚,△

(内蒙古医科大学:1.新药安全评价研究中心；2.药学院,呼和浩特 010110)



·论 著·

GLP体系下全自动血凝分析仪的3Q验证*

张 谦1，张 微1，吕晓丽2，曹晓东1，常福厚1,2△

(内蒙古医科大学:1.新药安全评价研究中心；2.药学院,呼和浩特 010110)

目的 以Sysmex CA7000全自动血凝分析仪为例，探究良好实验室规范(GLP)体系下全自动血凝分析仪3Q验证过程。方法 选择凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(FIB)4项检验指标，对仪器的批内精密度、日间精密度、准确性、线性、携带污染率进行性能验证。结果 PT、APTT、TT、FIB的批内精密度CV值分别为1.33%、1.57%、1.47%、1.90%；日间精密度CV值分别为1.73%、1.52%、1.55%、2.14%；在准确度方面，PT、APTT、TT、FIB的正常质控CV值分别为7.45%、3.88%、-4.98%、4.36%，PT、APTT的异常质控CV值分别为8.11%、8.77%；FIB的线性相关系数(r)值为0.999 3，a值为1.02；标本携带污染率最高CV值为2.15%；所测结果均符合行业通用标准和仪器厂家要求。结论 通过GLP体系下的3Q验证，Sysmex CA7000血凝分析仪各方面性能优良，可以用于临床检验部的检验工作。

良好实验室规范； 全自动血凝分析仪； 3Q验证

良好实验室规范(GLP)主要是针对食品化妆品、新药等进行安全性评价实验而制订的规范[1-3]。GLP实验室目的是严格控制食品化妆品、新药等安全性评价试验的各个环节，在最大限度上消除可能影响实验结果的主观和客观因素，降低误差，确保实验结果的真实、可靠[4-5]。国家食品药品监督管理总局(CFDA)、美国食品与药物管理局(FDA)均有相应文件明确规范GLP实验室中备案仪器设备应定期进行3Q验证[6]。以确保仪器产生的实验数据可靠、准确。所谓3Q验证，即指仪器的安装验证(IQ)、操作验证(OQ)和性能验证(PQ)[7]。CA7000全自动血凝分析仪购置后，查看仪器预安装的地点及周边环境、配套设施是否符合要求，安装仪器运行所需的硬件及软件，即进行安装验证。安装验证完成后，调试仪器、设置仪器参数、校准仪器项目、开机运行仪器、查看各项功能是否正常、对操作人员进行操作培训，即完成仪器的操作验证。临床检验部全自动血凝分析仪在新药非临床安全性评价中承担血液学指标的检测，其检测数据是否准确在一定程度上影响着药物毒理学结果[8]。而其中涉及的性能验证是整个3Q验证中的关键步骤，需要在实验前精心设计验证指标和验证方案[9]。以Sysmex CA7000全自动血凝分析仪为例，探究在GLP体系下CA7000全自动血凝分析仪的性能验证过程。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂 仪器为Sysmex CA7000全自动血凝分析仪；试剂为凝血酶原时间(PT)测定试剂盒(批号105273)、活化部分凝血活酶时间(APTT)测定试剂盒(批号112183)、凝血酶时间(TT)测定试剂盒(批号121150)、纤维蛋白原(FIB)测定试剂盒(批号1320791)；质控品为正常凝血质控品(批号182018)、异常凝血质控品(批号183015)。试剂、质控品生产厂家为上海太阳生物技术有限公司。

1.2 方法

1.2.1 批内精密度 根据NCCLS EP5-A文件取当日门诊患者新鲜血浆制成混合血浆[10]，取混合血浆快速、连续、重复检测20次，计算标准偏差(s)和变异系数CV值，CV值必须小于或等于厂家的要求。

1.2.2 日间精密度 根据NCCLS EP5-A文件将正常凝血质控品用1.0 mL蒸馏水复溶[10]，取正常凝血质控连续测定20 d，每日检测1次，计算标准偏差(s)和变异系数CV值，CV值必须小于或等于厂家的要求。

1.2.3 准确性 根据NCCLS EP15-A文件分别取两个水平的定值质控品(正常、异常)验证凝血4项的准确度[11]，每个项目重复测定3次，CV值应小于或等于厂家规定的10%。

1.2.4 线性范围 根据CLSI EP6-A文件从当日门诊患者标本中筛选高值和低值标本[12]，高值标本为1号，低值标本为5号，二者3∶1混合为2号，1∶1混合为3号，1∶3混合为4号，配制成具有5个浓度梯度的标本，每个标本检测1次，将实测值与理论值作比较(偏离应小于10%)，将两组数据进行线性回归拟合，应用Excel2010软件中函数CORREL和函数SLOPE求得相关系数(r)和斜率(a)，a值在1±0.03范围内，r>0.98。

1.2.5 携带污染率 根据CLSI EP10-A文件[13]，高值标本对低值标本的污染：低值标本(L)为1、3号，高值标本(H)为2号，每个标本顺序测定3次，记录结果L1、L2、L3、H1、H2、H3、L4、L5、L6利用公式K1=[L4-mean(L1,L2,L3)]/mean(L1,L2,L3)，结果应小于或等于厂家标识的10%；低值对高值标本的污染率：高值标本(H)为1、3号，低值标本(L)为2号，每个标本顺序测定3次，记录结果H1、H2、H3、L1、L2、L3、H4、H5、H6利用公式K2=[H4-mean(H1,H2,H3)]/mean(H1,H2,H3)，结果应小于或等于厂家标识的10%。

1.3 统计学处理 采用SPSS20.0统计软件进行统计学处理。

2 结 果

2.1 批内精密度 批内精密度检测结果均小于厂家标识的要求，验证通过。见表1。

表1 批内精密度

2.2 日间精密度 日间精密度检测结果均小于厂家标识的要求，验证通过。见表2。

表2 日间精密度

2.3 准确性 准确性检测结果均小于厂家标识的要求，验证通过。见表3。

表3 准确性

注：TT、FIB无异常质控，仅验证正常水平。

2.4 线性范围 只验证以浓度为结果的项目，依次测定FIB 5个浓度梯度的标本，实测值分别为8.13、6.22、4.57、2.73、0.79 mg/dL，与理论值相比相对偏差均小于10%，FIB的线性相关系数r值为0.999 3，a值为1.02，符合仪器厂家要求，表明该全自动血凝仪在稀释范围内呈良好的线性相关性。

2.5 携带污染率 各项目携带污染率均小于判定标准10%，符合行业通用标准要求。见表4。

表4 携带污染率(%)

3 讨 论

对CA7000的性能验证表明，批内精密度CV值为1.33%～1.90%，日间精密度CV值为1.52%～2.14%，均在仪器厂家标识范围内；准确性方面，正常质控CV最大值7.45%，异常质控CV最大值8.77%，均小于仪器厂家标识的10%；FIB的线性相关r值为0.999 3，a值为1.02，a值在1±0.03范围内，r>0.98。携带污染率的CV值为-0.35%～2.15%，均小于厂家标识的10%。说明CA7000血凝分析仪具有良好的精密度和准确性，良好的线性范围和低携带污染率从另一角度也保证实验结果的真实、可靠性。

3Q验证中的PQ验证频率为每年1次[14]。仪器有下列情况之一则需要重新验证：仪器的放置地点改变、仪器的检测方法改变、仪器进行重大维修[15]。GLP体系下仪器的性能验证需在部门负责人的监督下由有经验的工作人员完成[16]。性能验证报告由检测人员和部门负责人签名确认后连同原始数据和之前完成的安装验证和操作验证报告共同以书面形式归档，即一个完整的3Q验证过程，3Q验证过程需要质量保障部门人员的监督[17]。

经过GLP体系下的3Q验证，此台Sysmex CA7000全自动血凝分析仪各项性能指标良好，所测定的实验数据真实、准确，可用于药物非临床研究安全性评价的临床检验中血液学指标的检测。

[1]吴建辉，闫晗，苏欣，等．GLP人员的岗位职责与各类人员的培训[J]．中国药理学与毒理学杂志，2013，27(3)：458．

[2]于文莲，陈会明，宋乃宁，等．良好实验室规范与实验室认证[J]．分析试验室，2010，29(5)：120-122．

[3]余珊珊，李正奇．GLP认证现场检查常见问题简析[J]．药物评价研究，2014，37(4)：295-299．

[4]杨琛懋，马璟．关于GLP实验室仪器验证的探讨[J]．毒理学杂志，2007，21(4)：285．

[5]贾栗，赵瑞勤，赵君，等．GLP体系下生化分析仪的3Q验证过程及要点[J]．军事医学，2013，37(10)：752-755．

[6]王三龙，沈连忠，齐卫红，等．安全药理遥测系统进行3Q验证的关注点[J]．中国药学杂志，2010，45(10)：797-800．

[7]刘晓萌，谢寅，孟建华，等．GLP实验室仪器验证的质量保证[J]．中国药理学与毒理学杂志，2013，27(3)：607-607．

[8]冯厚梅，孙德华，郑磊，等．Sysmex CA 7000全自动凝血仪性能评价[J]．检验医学，2011，26(1)：58-62．

[9]吴洪海，李五一，阮慧，等．综合性高校GLP实验室建设的探索[J]．实验技术与管理，2013，30(2)：202-204．

[10]NCCLS.EP5-A2 Evaluation of precision performance of quantitative measurement methods:approved guideline-second edition[S].Wayne,PA,USA:NCCLS,2004.

[11]Clinical and Laboratory Standards Institute.EP15-A2 User verification of performance for precision and trueness:approved guideline-second edition[S].Wayne,PA,USA:CLSI,2005.

[12]NCCLS.EP6-A2 Evaluation of the linearity of quantitative analytical methods[S].Wayne,PA,USA:NCCLS,2000.

[13]Clinical and Laboratory Standards Institute.EP10-A3 Preliminary evaluation of quantitative clinical laboratory measurement procedures:approved guideline-third edition[S].Wayne,PA,USA:CLSI,2006.

[14]吕会田．GLP条件下实验仪器的验证和管理[J]．中国药理学与毒理学杂志，2013，27(3)：457-458．

[15]古海锋，郭洪祝，厉进忠，等．药品检验用仪器设备性能验证指导原则和技术标准的探讨[J]．中国药事，2014，28(7)：710-714．

[16]项新华，黄海伟，左宁，等．建立性能管理为核心的仪器设备质量管理新模式[J]．中国药事，2014，28(7)：721-725．

[17]杨锋，王红星，艾应先，等．质量控制在GLP中的实践与体会[J]．中国卫生质量管理，2011，18(4)：70-72．

3Q verification of automatic blood coagulation analyzer under good laboratory practice system*

ZHANGQian1，ZhangWei1，LVXiaoli2，CAOXiaodong1,CHANGFuhou1,2△

(1.CenterforNewDrugSafetyEvaluationandResearch,InnerMongoliaMedicalUniversity,Hohhot,InnerMongolia010110,China;2.CollegeofPharmacy,InnerMongoliaMedicalUniversity,Hohhot,InnerMongolia010110,China)

Objective To explore the procedures of 3Q validation for blood coagulation analyzer under the good laboratory practice(GLP) system based on the Sysmex CA7000 automatic blood coagulation analyzer.Methods Four test indicators of PT,APTT,TT and FIB were chosen to conduct the performance verification in the within-run precision,between-day precision,accuracy,linearity,carry-over contamination rate of the automatic blood coagulation analyzer．They were prothrombin time(PT),activated partial thromboplastin time(APTT),thrombin time(TT),and fibrinogen(FIB).Results The within-run precisionCVvalues of PT,APTT,TT and FIB were 1.33%,1.57%,1.47% and 1.90%,respectively; the inter-day precisionCVvalues of PT,APTT,TT and FIB were 1.73%,1.52%,1.55% and 2.14% respectively; in terms of accuracy,the normal quality controlCVvalues were 7.45%,3.88%,-4.98% and 4.36% respectively; the abnormal quality controlCVvalues of PT and APTT were 8.11% and 8.77% respectively; the r value of FIB linear correlation coefficient was 0.999 3,the a value was 1.02; the highestCVvalue of carry-over contamination rate was 2.15%; the detected results all conformed to the general industry standards and requirements of instrument manufacturer.Conclusion The 3Q validation under the GLP system proves that the Sysmex CA7000 automatic blood coagulation analyzer is good in performance and is appropriate for the laboratory work of clinical laboratory department．

good laboratory practice; automatic blood blood coagulation analyzer; 3Q verification

国家自然科学基金资助项目(81260499)。

张谦，男，自然科学研究实习员，主要从事临床医学检验研究。△

10.3969/j.issn.1673-4130.2016.23.001

A

1673-4130(2016)23-3241-03

2016-04-11

2016-07-13)