黑地黄丸改善5/6肾切除大鼠肾衰模型肾功能的研究*

刘伟伟，张 亮，张 丽，孙响波，张法荣

1山东中医药大学第一临床医学院，山东 济南 250014；2山东中医药大学；3山东省中医院

黑地黄丸改善5/6肾切除大鼠肾衰模型肾功能的研究*

刘伟伟1，张 亮1，张 丽2，孙响波2，张法荣3△

1山东中医药大学第一临床医学院，山东 济南 250014；2山东中医药大学；3山东省中医院

目的:通过观察黑地黄丸对5/6肾切除肾衰大鼠(CRF大鼠)的血清尿素氮（BU N）、肌酐(Scr)水平的影响，探讨黑地黄丸对CRF大鼠肾功能的影响，并寻求最佳剂量。方法:将70只W i st ar大鼠随机分为空白组，模型组，黑地黄丸高、中、低剂量组，尿毒清组，洛丁新组，共7组，除空白组外其他各组大鼠均行5/6肾切除术，建立CRF大鼠模型，连续给药12周后，采用酶偶联速率法测定血清尿素及采用碱性苦味酸法测定血清肌酐动脉含量。结果:与模型组比较，黑地黄丸高、中、低剂量组血清BU N、Scr显著降低(P＜0.01)。与黑地黄丸低剂量组比较，黑地黄丸高剂量组、尿毒清组血清BU N降低(P＜0.05)；与黑地黄丸低剂量组比较，黑地黄丸高剂量组、尿毒清组血清Scr显著降低(P＜0.01)。结论:黑地黄丸可以明显降低肾衰大鼠的血清BU N、Scr，从而改善肾功能，延缓CRF进程，其中尤以黑地黄丸高剂量组效果最佳。

黑地黄丸；5/6肾切除大鼠肾衰模型；血清尿素氮；肌酐

慢性肾衰竭是临床常见的疑难病症，其病死率居高不下，严重危害人类的生命健康。张法荣等［1］在应用黑地黄丸治疗慢性肾衰竭的临床观察中发现，黑地黄丸治疗慢性肾衰竭总有效率为80.56%。本研究通过建立5/6肾切除大鼠肾衰模型，观察黑地黄丸对肾衰大鼠血清尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)的影响，旨在进一步探讨黑地黄丸对肾功能的影响，并寻求最佳剂量。

1 材料与方法

1.1 药材 黑地黄丸(以熟地黄12 g，苍术12 g，干姜6 g，大枣6 g)为原料用泛制法制作水丸(300丸/瓶)，由本院药剂科自制；尿毒清(广州康臣药业有限责任公司生产，5 g/袋，批号: 20100314)；盐酸贝那普利片(商品名:洛丁新，北京诺华制药有限公司生产，10mg/片，批号:x0264)。

1.2 仪器与试剂 EL340i型全自动酶标仪(赛默飞世尔仪器有限公司提供)；GL20A全自动高速冷冻离心机(湖南仪器仪表总厂离心机厂提供)；SSW型电热恒温水浴箱(上海博讯实业有限公司提供)；水合氯醛(山东大学齐鲁医院，批号:20120702)；肌酐(批号:3454)、尿素氮(批号:0758)试剂盒，均由北京利德曼公司提供。

1.3 实验动物 SPF级健康雄性Wistar大鼠［实验动物质量合格证号:SCXK(鲁)20090001］，体质量(200±20)g，由山东大学实验动物中心提供。

1.4 方法

1.4.1 分组 造模前试饲养1周，实验前1天大鼠称重，根据平均体质量将大鼠分为模型组，黑地黄丸高、中、低剂量组，尿毒清组，洛丁新组，与正常组共7组，每组大鼠10只。

1.4.2 造模 参照文献［2］，实验第1天除正常组外，其余各组大鼠均腹腔注射10%水合氯醛麻醉，在肋脊角左下1 cm处向左下做一3 cm左右切口，充分暴露左侧肾脏，用眼科手术剪分别剪除左肾上、下各1/3左右皮质，吸收性明胶海绵压迫止血3分钟，开止血夹，观察有无明显出血，复位残肾，1周后行第二次手术，结扎肾蒂，切除右肾，分别于手术结束后第3、6周末取血测定各造模组大鼠血清BUN、Scr水平，以Scr水平显著高于正常组

为造模成功，建立CRF大鼠模型。造模前后各组大鼠Scr水平，见图1。

图1 造模前后各组大鼠Scr水平

1.4.3 给药 黑地黄丸高、中、低剂量组分别给予黑地黄丸［0.00648、0.00324、0.00162 g/(g·d)］，尿毒清组给予尿毒清颗粒［0.00225/(g·d)］，洛丁新组灌胃给予洛丁新［0.0009 mg/(g·d)］，于造模成功后温水溶解灌胃给药(0.01 mL/g)，正常组与模型组给予等体积生理盐水灌胃，1次/d，共12周。

1.4.4 取材与检测方法

1.4.4.1 取材 各组大鼠术后第3周末、第6周末均在采血前禁食12小时，断尾取血2 mL送检；实验最后1天用10%水合氯醛麻醉(0.35 mg/g体质量)，开腹，暴露腹主动脉，采用无菌采血器和7号针头进行腹主动脉采血，采集1 mL左右的动脉血送检血常规，4 mL左右的动脉血，3 000 r/min，离心15分钟分离血清，送生化室检测生化指标，检测BUN、Scr等。

1.4.4.2 检测方法 BUN、Scr采用日本OLYMPUS公司全自动生化分析仪进行检测，Scr用酶偶联速率法，BUN使用碱性苦味酸法。

1.5 统计学方法 实验结果采用SPSS 17.0统计软件进行分析，各组实验数据以(s)表示，采用 One-way ANOVA、LSD-t检验进行统计分析，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

与模型组比较，黑地黄丸高、中、低剂量组血清BUN、Scr显著降低(P＜0.01)。与黑地黄丸低剂量组比较，黑地黄丸高剂量组、尿毒清组血清BUN降低(P＜0.05)；与黑地黄丸低剂量组比较，黑地黄丸高剂量组、尿毒清组血清Scr显著降低(P＜0.01)。见表1。

表1 黑地黄丸对5/6肾切除大鼠肾衰模型血清BU N、Scr的影响(s)

表1 黑地黄丸对5/6肾切除大鼠肾衰模型血清BU N、Scr的影响(s)

注:*表示与正常组比较，P＜0.01；△表示与模型组比较，P＜0.01；▲表示与黑地黄丸低剂量组比较，P＜0.05 (血清尿素组)；▲表示与黑地黄丸低剂量组比较，P＜0.01 (血清肌酐组)。

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3 讨论

黑地黄丸出自《素问·病机气宜保命集》。全方由苍术一斤(米泔浸)，熟地黄一斤，川姜冬一两、夏五钱、春七钱组成。方中苍术芳香温燥，能健脾和胃，燥化湿浊；熟地黄具有滋阴养血，填精益髓之功，二药合用补泻兼施、标本兼顾、刚柔相济。佐以干姜，温运中焦，健壮脾气，大枣补中益气，扶脾安胃。熟地黄、大枣得苍术、干姜滋阴养血不碍湿；苍术、干姜得熟地黄、大枣温通发散不助湿。4药相合，滋而不腻，温而不燥，共呈甘苦合用，刚柔互济的配伍特点，构成滋水燥湿，滋液沁脾之良方。研究发现CRF营养不良与患者持续存在的微炎症状态有密切关系，二者可能是互为因果关系［3］。有关学者［4］认为黑地黄丸治疗慢性肾衰竭的药理机制主要在于改善CRF营养不良和微炎症状态。现代研究熟地黄对猕猴细胞免疫功能和红细胞稳定性有明显的增强作用［5］，有效成分地黄多糖b在体内外实验中能明显促进白细胞介素-2 (IL-2)的分泌，显示了免疫调节活性［6］，且地黄具有止血和促进血细胞增殖的药理活性，同时可以通过影响白血球和血小板来抗炎［7］。苍术根茎甲醇提取物的水提部分含有多糖成分，有较强的免疫调节作用［8］，其还含有多种营养物质是苍术保健作用的重要物质基础［9］，且苍术中提取分离出的苍术内酯甲具有抗炎作用［10］。大枣多糖显著提高气血两虚模型动物的血象及血清粒-巨噬细胞集落刺激因子水平，具有良好的补血作用［11］，且大枣中的黄酮类化合物具有抗过敏、抗炎作用［12］。干姜的醚提物、水提物都有抗炎作用［13］，其抗炎作用可能是通过调节肾上腺皮质的功能而发挥的［14］。可见在治疗CRF方面黑地黄丸具有提高机体免疫力、改善造血功能、抗炎等作用，从而纠正肾性贫血、防治肾间质纤维化、改善CRF患者肾功能。通过实验观察，与模型组比较，黑地黄丸高、中、低剂量组血清BUN显著降低(P＜0.01)，与黑地黄丸低剂量组比较，黑地黄丸高剂量组、尿毒清组血清BUN降低(P＜0.05)，可以看出各治疗组干预第12周时黑地黄丸高、中、低剂量组、尿毒清组、洛丁新组均能降低血清肌酐水平，以黑地黄丸高剂量组和尿毒清组效果最好。与模型组比较，黑地黄丸高、中、低剂量组、尿毒清组血清Scr显著降低(P＜0.01)，与黑地黄丸低剂量组比较，黑地黄丸高剂量组、尿毒清组血清Scr显著降低(P＜0.01)，可以看出各治疗组干预第12周时黑地黄丸高、中、低剂量组、尿毒清组、洛丁新组均能降低血清肌酐水平，以黑地黄丸高剂量组和尿毒清组效果最好。由此可见，黑地黄丸可以明显降低肾衰大鼠的血清BUN、Scr，从而改善肾功能，延缓CRF进程，其中尤以黑地黄丸高剂量组效果最佳。

［1］ 张法荣，王芳，付海霞，等.黑地黄丸治疗慢性肾衰竭的临床观察［J］.中国中西医结合肾病杂志，2009，2(10):156-157.

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Study on Black DiHuang Pills in Improving Renal Function of the Rats with Renal Failure Undergoing 5/6 Nephrectomy

LIU Weiwei1,ZHANG Liang1,ZHANG Li2,SUN Xiangbo2,ZHANG Farong3△
1 The First Clinical Medical College of Shandong University of Chinese Medicine,Jinan 250014,China;
2 Shandong University of Chinese Medicine;3 Shandong Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine

Objective:To survey the effects of black DiHuang pills on renal function of the rats with chronic renal failure(CRF),find out the optimal dosage by observing its effects on the levels of serum urea and creatinine of CRF rats undergoing 5/6 nephrectomy.Methods：Seventy Wistar rats were divided into seven groups randomly,the blank group,the model group,and high,middle and low dosages groups of black DiHuang pills,NiaoDuQing group and Lotensin group.The rats received 5/6 nephrectomy except the ones in the blank group to establish CRF rat models,the contents of serum urea were detected by the method of enzyme coupling ratio and the contents of serum creatinine detected by basic picric acid method after the rats were medicating for 12 weeks.Results：Compared with the model group,the levels of serum BUN and Scr decreased in high,middle and low dosages groups of black DiHuang pills significantly(P＜0.01).Compared with low dosages group of black DiHuang pills,the levels of serum BUN of high dosage group of black DiHuang pills and NiaoDuQing group lowered (P＜0.05).Compared with low dosages group of black DiHuang pills,the level of serum Scr in high dosages group of black DiHuang pills and NiaoDuQing group decreased significantly(P＜0.01).Conclusion：Black DiHuang pills can decrease the levels of serum BUN and Scr of the rats with renal failure obviously,therefore to improve renal function and delay the progress of CRF,especially high dosage of black DiHuang pills.

black DiHuang pills;5/6 nephrectomized rats with renal failure;BUN;Scr

R285.5

A

1004-6852(2016)10-0017-03

2016-04-13

山东省科技发展计划项目(编号2010G 0020214)。

刘伟伟(1990—)，女，在读博士研究生。研究方向:中医药治疗肾病的临床与实验研究。

△通讯作者:张法荣(1965—)，男，博士研究生导师，教授，主任医师。研究方向:中医药治疗肾病的临床与实验研究。