MMP-2的表达及微血管密度与乳腺癌淋巴结转移的关系

任俊玲，王亚兵，陈 斌

(1.芜湖市第一人民医院 普外科，安徽 芜湖 241000；2.皖南医学院第一附属医院 弋矶山医院 甲乳外科，安徽

芜湖 241001)



·临床医学·

MMP-2的表达及微血管密度与乳腺癌淋巴结转移的关系

任俊玲1，王亚兵2，陈 斌2

(1.芜湖市第一人民医院 普外科，安徽 芜湖 241000；2.皖南医学院第一附属医院 弋矶山医院 甲乳外科，安徽

芜湖 241001)

目的：探讨乳腺癌组织中基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)的表达及微血管密度(microvessel density,MVD)与乳腺癌生物学特性的相关性。方法：采用免疫组织化学方法检测62例乳腺癌组织中MMP-2和MVD(CD34)表达。结果：淋转组MMP-2的阳性表达率(74%)、表达强度及MVD值(48.05±13.49)明显高于非淋转组(P<0.05)；MVD值在MMP-2不同表达中存在差异；MMP-2的表达和MVD的含量在不同乳腺癌TNM分期中存在差异。结论：MMP-2可通过促进降解细胞外基质、促进乳腺癌新生血管形成而促进乳腺癌的进展，MMP-2及MVD在乳腺癌发展及转移中可能发挥重要作用。

乳腺癌；基质金属蛋白酶-2；微血管密度

【DOI】10.3969/j.issn.1002-0217.2016.06.008

乳腺癌是女性中位列第一的恶性肿瘤，是危害妇女身心健康的常见疾病[1]。肿瘤血管密度与肿瘤的增殖、生长、侵袭转移直接相关，也和多种细胞因子的作用相关。基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)是MMPs的一员，它在肿瘤的浸润转移中起重要作用，研究提示其可通过降解细胞基底膜和细胞外基质,促进新生血管发生[2]。本文采用免疫组化法检测淋转组和非淋转组乳腺癌组织中的MVD值和MMP-2表达，为阐述其在乳腺癌淋巴结发生转移中的生物学意义提供理论依据。

1 资料与方法

1．1 一般资料 62例皖南医学院弋矶山医院甲乳外科2008年1月～2010年12月收治并行乳腺癌改良根治术的患者，根据病理有无淋巴结转移分成两组，淋转组38例，非淋转组24例。年龄32～68岁，中位年龄49岁，均为女性。全组病例经病理确诊，包块浸润性小叶癌3例，浸润性导管癌50例，其他9例。

1．2 标本及试剂 标本用10%甲醛固定，石蜡包埋、切片。试剂：标记的山羊抗兔IgG、兔抗人MMP-2多克隆抗体、生物素标记的羊抗鼠IgG、鼠抗人CD34单克隆抗体均购自福州迈新公司；DAB显色试剂盒由北京中衫金桥公司提供。

1．3 检测方法 采用免疫组织化学法(SABC法)，将标本4 μm厚切片，常规脱蜡，去除内源性过氧化物酶，微波修复抗原，分别滴加MMP-2和CD34 40℃过夜，同时，用不加一抗的切片作阴性对照，滴加生物素化二抗工作液，滴加三抗SABC试剂 DAB显色，苏木精轻度复染，中性树胶封片，显微镜下观察。

1．4 结果 染色后，400高倍视野下，观察10个视野，阳性表现为胞质内出现棕黄色颗粒，每个视野选100个肿瘤细胞，按肿瘤细胞中阳性比例计算百分率，<10%为阴性(-)；10%～24%为阳性(+)；25%～50%为阳性()；>50%为阳性()。因至少出现两个T<1的情况，予合并同类项，即：阳性细胞<10%为阴性(-)；阳性细胞>10%为阳性(+)；阳性对照取博士德公司提供的阳性切片，阴性对照取PBS液代替一抗的乳腺癌组织切片。MVD计数参照Weidner方法[3]进行，即低倍镜下选取热点(高血管密集区)，计数高倍镜下棕色颗粒的数目，以3个视野下微血管数的平均数表示。

1．5 统计学处理 应用SPSS 13.0统计软件进行统计分析，有序变量、连续变量之间的比较分别采用χ2检验、t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2．1 MMP-2的表达与乳腺癌淋巴结转移的关系 MMP-2以胞浆着色为主，淋转组38例患者中阳性表达28例(74%)，阴性表达10例(26%)；非淋转组24例患者中阳性表达5例(21%)，阴性表达19例(79%)，两组比较差异有统计学意义(P<0.01)，见表1。MMP-2的阳性和阴性表达分别见图1A、B。

图 1 MMP-2在乳腺癌组织的阳性(A)和阴性(B)表达

2.2 MVD与乳腺癌淋巴结转移的关系 肿瘤血管内皮细胞染色呈棕黄色、均匀一致。通常肿瘤边缘MVD值高，也可位于肿瘤组织内的任何部位。本研究显示乳腺癌淋转组MVD值(40.85±13.49)明显高于非淋转组的MVD值(32.96±8.44)，见表2、图2,可见CD34标记的MVD的含量在乳腺癌淋转组与非淋转组之间存在差异。

表1 淋转组与非淋转组MMP-2的比较

组别nMMP-2-+χ2P淋转组38102816.5040.000非淋转组24195

注：淋转组与非淋转组比较P<0.01。

表2 淋转组与非淋转组MVD的比较

组别nMVDtP淋转组3848.05±13.494.900.000非淋转组2432.96±8.44

注：淋转组与非淋转组比较P<0.01。

a：淋转组，B：非淋转组。

图2 MVD在乳腺癌组织中的表达

2.3 MVD在MMP-2阳性与阴性表达中的差异 62例乳腺癌组织中MMP-2阳性33例，其MVD值49.67±12.15，MMP-2阴性29例，其MVD值33.72±10.47，二者差异有统计学意义，表明MVD在MMP-2阳性与阴性表达中存在差异(P<0.01)。见表3。

MMP-2nMVDtP阳性3349.67±12.155.490.000阴性2933.72±10.47

注：MMP-2与MVD的比较P<0.01。

2.4 MMP-2的表达和MVD的含量在不同乳腺癌TNM分期中的差异 见表4、5。62例乳腺癌中TNM分期Ⅰ期26例，MMP-2阳性5例(19.2%)，MVD值32.04±8.73；Ⅱ期26例，MMP-2阳性19例(73.1%)，MVD值44.31±7.49；Ⅲ期10例，MMP-2阳性9例(90%)，MVD值63.20±11.57；Ⅲ期MMP-2阳性表达率、MVD值显著高于Ⅰ期、Ⅱ期，MMP-2的表达和MVD的含量在乳腺癌TNM分期中存在差异(P<0.01)。见表4、5。

表4 MVD含量在乳腺癌TNM分期中的差异

TNM分期nMVDFPⅠ期2632.04±8.7347.140.000Ⅱ期2644.31±7.49Ⅲ期1063.20±11.57

表5 MMP-2表达在乳腺癌TNM分期中的差异

TNM分期nMMP-2-+χ2PⅠ期2621521.620.000Ⅱ期26719Ⅲ期1019

3 讨论

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤，且发病趋于年轻化[4]。浸润和转移是乳腺癌致死的重要原因，乳腺癌组织中MVD、MMP-2的表达与其浸润、转移、预后的关系成为目前研究的热点。

肿瘤的浸润、转移是个多步骤、多阶段、多基因参与的复杂过程，其中基底膜细胞基质的降解是其发展的必要阶段，因此，细胞外基质的降解过程的研究成为热点[5]。基质金属蛋白酶(metalloprpteinases,MMPs)是一组肽链内切酶，能裂解维系蛋白结构的肽键，主要参与结缔组织的降解，在肿瘤的生长及转移中起重要作用，研究认为，MMP-2与乳腺癌关系密切，特别与乳腺癌的侵袭和转移有关[6]。MMP-2表达增高者，乳腺癌恶性程度高，侵袭、转移发生率高，且预后较差[7]。MMP-2使基底膜丧失完整性的重要原因是降解其主要成分Ⅳ型胶原和层粘连蛋白，MMP-2可通过影响毛细血管内皮细胞，促进新生血管形成，从而促进肿瘤生长、扩散，还可通过降解基底膜及肿瘤基质，突破基底屏障，促使肿瘤侵袭转移。本组实验发现淋转组38例患者中阳性表达28例(74%)，阴性表达10例(26%)；非淋转组24例患者中阳性表达5例(21%)，阴性表达19例(79%)，两组比较差异显著(P<0.01)。 这与尚培中等[8]报道结果相似，由此可见，MMP-2在乳腺癌的浸润和转移中起重要作用，可作为乳腺癌预后的标记物，对肿瘤的侵袭、转移范围及程度进行评估。

MVD不但可以确定血管生长水平、肿瘤位置，还可用来评估肿瘤靶向治疗的疗效，是目前检测肿瘤微血管水平的金标准[9]。肿瘤血管生成是实体瘤生长和转移的必要条件。乳腺癌的生长、转移是一个极为复杂的过程，其中肿瘤组织内MVD是较为重要的影响因素。本研究显示：淋转组MVD值(40.85±13.49)明显高于非淋转组MVD值(32.96±8.44),可见CD34标记的MVD的含量在乳腺癌淋转组与非淋转组之间存在差异，这可能与乳腺癌组织中MVD越高，就越容易为癌细胞提供营养，促进癌细胞的增殖、分化有关。大量研究表明：MVD在乳腺癌淋转组和非淋转组间存在差异，MVD高，转移率高，这与Shpitz等[10]报道一致。

本研究表明，淋转组MMP-2的阳性表达率(74%)、表达强度及MVD值(48.05±13.49)明显高于非淋转组(P<0.05)；MMP-2的表达和MVD的含量在不同乳腺癌TNM分期中存在差异；MVD值在MMP-2不同表达中存在差异。 提示MMP-2的阳性表达及CD34标记的MVD的含量越高，乳腺癌细胞的浸润与转移越高，MMP-2可通过促进降解细胞外基质、促进乳腺癌新生血管形成而促进乳腺癌的进展。因此，MMP-2及MVD在乳腺癌发展及转移中可能发挥重要作用，检测乳腺癌中MMP-2的表达及MVD值可能有助于判断乳腺癌预后。

[1] 邵志敏，沈镇宙，徐兵河.乳腺肿瘤学[M].2版.上海：复旦大学出版社，2013:1.

[2] PUZOVIC V,BRCIC I,RANOGAJEC I,etal.Prognostic values of ETS-1,MMP-2 and MMP-9 expression and co-expression in breast cancer patients[J].Neoplasma,2014，61(4):439-446.

[3] WEIDNER N，SEMPLE JP，WELCH WR，etal．Tumor angiogenesis and metastasis-correlation in invesive breast carcinoma[J]．Engl J Med，1991，324：1.

[4] 郑莹，吴春晓，吴凡.中国女性乳腺癌死亡现状和发展趋势[J].中华预防医学杂志，2011,45(2)：105-108.

[5] SWARTZ MA,IIDA N,ROBERTS EW,etal.Tumor microenvironment complexity:emerging roles in cancer therapy[J].Cancer Res,2012,72:2473-2480.

[6] SULLU Y,DEMIRAG GG,YILDIRM A,etal.Matrix metalloproteinase-2(MMP-2) and MMP-9 expression in invasive ductal carcinoma of the breast[J].Pathol Res Pract,2011,207:747-753.

[7] KATUNINA AI,GERSHTEIN ES,ERMILOVA VD,etal.Matrix metalloproteinases 2,7,and 9 in tumors and sera of patients with breast cancer[J].Bull Exp Biol Med,2011,151(3):359-362.

[8] 尚培中，张金江，贾国洪，等.基质金属蛋白酶-2和唾液酸化Lewis-X在乳腺癌中的表达及其意义[J].中华乳腺病杂志(电子版)，2008,2(2)：28-31.

[9] 郭易萍，李子樵，练子富.肿瘤新生血管检测的研究进展[J].国际生物学工程杂志，2011,34(5)：314-317.

[10] SHPITZ B,ANGIOGENESIS.P53 and C-erbB-2 immunoreactivity and clinicopathological features in male breast cancer[J].J Surg Oncol,2000，75(4):252-257.

MMP-2 expression,microvessel density and metastasis of lymph node in breast cancer

REN Junling,WANG Yabing,CHEN Bin

Department of Surgery,Wuhu No.1 People′s Hospital,Wuhu 241000,China

Objective：To investigate the relationship between matrix metalloproteinase-2(MMP-2) expression,microvessel density(MVD) and the biological property in breast carcinoma.Methods:Immunohistochemistry was used to detect MMP-2 expression and MVD in the breast cancer tissues obtained from 62 patients.Results:Patients with lymph node metastasis had significantly higher positive rate of MMP-2(74%) and MVD(48.05±13.49) than those without lymph node involvement(P<0.05).MVD value varied to a certain extent in diverse MMP-2 expression,and MMP-2 expression and MVD content were distinct in patients with diverse TNM staging for breast cancer.Conclusion:MMP-2 may promote the progression of breast cancer through hastening the degradation of extracellular matrix and accelerating neovascularization,suggesting that MMP-2 and MVD play critical part in the development and lymph node metastasis of breast carcinoma.

breast carcinoma;matrix metalloproteinase-2;microvessel density

1002-0217(2016)06-0537-03

安徽省卫生厅医学科研项目(09B132)

2016-07-15

任俊玲(1982-)，女，主治医师，硕士,(电话)15357886268，(电子信箱)94366511@qq.com； 王亚兵，主任医师，(电子信箱)Wangeb3@sina.com，通信作者.

R 737.9

A