高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定养阴生津片中黄芪甲苷含量

张火旺，蔡勇科，吴志国，郑　惠

（1.广东省河源市药品检验所，广东 河源　517000；　2.河源市中医院，广东 河源　517000）

高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定养阴生津片中黄芪甲苷含量

张火旺1，蔡勇科2，吴志国1，郑惠2

（1.广东省河源市药品检验所，广东 河源517000；2.河源市中医院，广东 河源517000）

目的 建立测定养阴生津片中黄芪甲苷含量的高效液相色谱-蒸发光散射检测法（HPLC-ELSD）。方法 色谱柱为Inertsil C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈-水（32∶68），流速为1.0 mL／min，柱温为35℃，ELSD检测器漂移管温度为60℃，载气（空气）流速为2.0 L／min。结果 黄芪甲苷进样量在0.496 8～9.936 0 μg范围内与峰面积线性关系良好，平均回收率为99.64%，RSD为0.22%（n=6）。结论 该方法简便、灵敏、稳定、准确，无其他成分干扰，可作为养阴生津片的质量控制方法。

养阴生津片；黄芪甲苷；高效液相色谱-蒸发光散射检测法

养阴生津片由黄芪、麦冬、地黄、天花粉、山药、枸杞子、石膏、石斛、牡丹皮、黄连、茯苓、（北）五味子、红参13味中药组方，具有滋补肝肾、生津止渴、益气降糖的功效，适用于成年人轻、中型非胰岛依赖性糖尿病。原注册标准（粤药制字Z20070697）只有显微特征和黄芪的薄层色谱鉴别，尚无含量测定项目。黄芪甲苷是方中主药黄芪的活性物质［1-3］。为有效地控制其内在质量，拟采用高效液相色谱-蒸发光散射检测（HPLC-ELSD）法测定养阴生津片中黄芪甲苷的含量，现报道如下。

1　仪器与试药

1.1仪器

LC-20AT型高效液相色谱仪（日本岛津公司）；Chromachem蒸发光散射检测器（美国 ESA公司）；CP225D型电子天平（梅特勒公司）；SB2200型超声处理器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2试药

乙腈（色谱纯，美国Tedia公司）；水为超纯水；黄芪甲苷对照品（批号为110781-201515，供含量测定用，含量为100%）购自中国食品药品检定研究院；养阴生津片（河源市中医院自制，批号分别为 20150401，20150604，20150302）。

2　方法与结果

2.1色谱条件［4］

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶柱Inertsil C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水（32∶68）；流速：1.0 mL／min；柱温：35℃；漂移管温度：60℃；载气流速：2.0 L／min；进样量：20 μL。峰面积对数方程定量。

2.2溶液制备

对照品溶液：称取黄芪甲苷对照品12.42 mg，精密称定，置25 mL容量瓶中，用甲醇溶解至刻度，作为黄芪甲苷对照品贮备液。

供试品溶液：取重量差异项下的本品，研细，取约6 g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇适量，加热回流提取7 h，提取液回收甲醇至干，残渣加水25 mL，微热使溶解，用乙醚轻摇洗涤2次，每次20 mL，水溶液再用水饱和的正丁醇振摇提取6次，每次20 mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次40 mL，正丁醇回收溶液至干，残渣用甲醇溶解，定容至10 mL容量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

阴性对照品溶液：按处方工艺取缺黄芪的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3方法学考察

干扰试验：分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液，按拟订色谱条件进样测定，记录HPLCELSD图谱。结果在对照品溶液色谱主峰处，供试品溶液有相同保留时间的色谱峰，阴性对照品溶液则无此色谱峰，表明阴性对照品溶液对测定无干扰。见图1。

图1　HPLC-ELSD色谱图

线性关系考察：分别精密吸取对照品贮备液1，5，10，15，20 μL，按拟订色谱条件分别进样，测定峰面积，以峰面积对数（A）为纵坐标、黄芪甲苷对照品质量浓度对数（C）为横坐标绘制标准曲线对数方程，得回归方程A=1.451 5C+3.867 8，r=0.999 8（n=5）。结果表明，黄芪甲苷进样量在0.496 8～9.936 0 μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：取同一对照品溶液，连续重复进样6次，进样量为 20 μL，测定峰面积。结果的 RSD为0.18%（n=6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：精密吸取同一批样品，制备供试品溶液，依法进样6次，测定含量。结果的 RSD为0.83%（n=6），表明方法重复性良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，每隔2 h进样测定1次，连续测定6次。结果黄芪甲苷含量的 RSD为0.71%（n=6），表明供试品溶液在12 h内稳定。

加样回收试验：精密称取已知含量的样品（批号为20150401，黄芪甲苷含量为0.231 2 mg／g）适量，置索氏提取器中，分别加入2.2项下黄芪甲苷对照品贮备液（黄芪甲苷含量为0.363 4 g／L）1，2，3 mL，依法制得供试品溶液。精密吸取供试品溶液6份，各20 μL，注入高效液相色谱议，测定，计算黄芪甲苷的回收率。结果见表1。

表1　黄芪甲苷加样回收试验结果（n=6）

2.4样品含量测定

取3批养阴生津片，按2.2项下方法制备供试品溶液，依法进样20 μL，记录峰面积，按标准曲线对数方程计算含量，结果见表2。根据3批样品所测得结果，暂定养阴生津片中黄芪甲苷的含量标准为每1 g含黄芪甲苷不得低于0.10 mg。

表2　3批样品含量测定结果（n=3）

3　讨论

据文献报道，黄芪甲苷的含量测定方法有比色法［5］、示差折光检测器法［6］、薄层扫描法［7］、高效液相色谱法和HPLC-ELSD法［8-15］等。本研究中选用ELSD法对养阴生津片中的黄芪甲苷进行定量测定，结果准确。

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Content Determination of AstragalosideⅣ Yangyin Shengjin Tabletsby HPLC-ELSD

Zhang Huowang1，Cai Yongke2，Wu Zhiguo1，Zheng Hui2
（1.Heyuan Institute for Drug Control，Heyuan，Guangdong，China517000；2.Heyuan Hospital of Traditional Chinese Medicine，Heyuan，Guangdong，China517000）

ObjectiveTo establish an HPLC-ELSD method for the content determination of astragalosideⅣin Yangyin Shengjin Tablets.MethodsTheHPLC-ELSD method was adopted and the Inertsil C18column（150 mm×4.6 mm，5 μm）was used.The mobile phase was acetonitrile-water（32∶68）.The flow rate was 1.0 mL／min.The column temperature was 35℃ The drift tube temperature of ELSD detector was 60℃，and the carrier gas（air）flow rate was 2.0 L／min.ResultsThe linear range of astragalosideⅣ was 0.496 8-9.936 0 μg.The average recovery rate was 99.64%，RSD was 0.22%（n=6）.ConclusionThe method is simple，sensitive，stable and accurate，which can be used for the quality control of Yangyin Shengjin Tablets.

YangyinShengjin Tablets；astragalosideⅣ；HPLC-ELSD

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2016）20-0053-03

张火旺（1974-），男，广东河源人，副主任药师，研究方向为药品检验及质量标准，（电子信箱）zhw1011＠163.com。

（2016-07-13）