Genexpert MTB/RIF 技术在菌阴肺结核支气管灌洗液检测中的应用价值研究

张杨 潘璞 重庆市万州区人民医院 （重庆 404000）

Genexpert MTB/RIF 技术在菌阴肺结核支气管灌洗液检测中的应用价值研究

张杨 潘璞 重庆市万州区人民医院 （重庆 404000）

目的：利用Genexpert MTB/RIF 检测菌阴肺结核患者的支气管灌洗液中的结核分枝杆菌（MTB）与利福平（RIF）耐药基因，探讨支气管灌洗液使用Genexpert MTB/RIF 技术在菌阴疑似肺结核诊疗中的应用价值。方法：收集50例疑似肺结核菌阴患者的支气管灌洗液，同时采用Genexpert MTB/RIF、抗酸染色法进行检测，将检测结果进行分析，判断其临床应用价值与临床意义。结果：50例菌阴肺结核患者的支气管灌洗液中有35例患者采用Genexpert MTB/RIF 技术检测MTB阳性，阳性检出率70%，利福平敏感35例；支气管灌洗液的抗酸染色中有6例患者检出MTB阳性，两种方法检测结果利用X2检验，有显著统计学意义（P＜0.05）。结论：支气管灌洗液使用Genexpert MTB/RIF 技术能够提高疑似菌阴肺结核患者的结核分枝杆菌的检出率，能够在短时间（2小时）内帮助明确诊断和判断利福平是否耐药，在菌阴肺结核的患者诊疗中具有重要的应用价值和临床意义。

Genexpert MTB/RIF 技术 纤支镜灌洗液 结核病

结核病是主要通过空气传播的危害人类健康的传染病之一，其早期诊断更具有临床意义，以便控制传染源，预防结核病的传播。在我们国家，由于基层医疗条件有限，结核病实验室诊断仍然以快速、准确而最符合成本效益的痰涂片普通光学显微镜检为主，但该方法敏感度低，变异度大，且无法进行菌型鉴定及检测细菌的耐药性[1～2]。查阅相关文献资料，人们往往探讨的是痰液在诊断结核病的相关报告，然而在临床工作中，结核病感染患者往往不能获取优质的痰标本而降低了痰涂片阳性率；或是由于含菌量少而多次痰涂片结果为阴性，有碍于结核病的早期诊断，延误了治疗，不利于传染源的控制。如何提高菌阴肺结核患者的结核杆菌检出率为临床提供可靠的病原学依据，是结核病防治的关键。近年来开展的Genexpert MTB/RIF技术是集结核病和利福平耐药基因伽马突变检测于一体的快速、准确检测方法。经纤支镜检查灌洗标本，进行结核杆菌的病原学及相关检测，为菌阴肺结核的临床诊断及治疗提供了帮助[3]。在菌阴肺结核患者中，我们常规开展纤支镜检查，将灌洗液分别行Genexpert MTB/RIF技术和传统抗酸染色，结果发现Genexpert MTB/RIF技术比传统抗酸染色更能提高菌阴肺结核患者临床检出率，有利于结核病的早期诊断及治疗。

1.资料和方法

1.1 临床资料：收集50例2015年12月至2016年5月在本院就诊的临床疑似肺结核（有结核感染高危因素，有相应结核感染中毒症状及胸部影像学改变）且痰涂片阴性的患者的纤支镜灌洗液标本，其中男性35例，女性15例，年龄22～73岁。行常规纤支镜检查且配合好。根据胸部影像学资料，在肺相关叶、段行灌洗，在病变部位注入常温灭菌注射用水，每次20ml，注入3次，送检灌洗液标本不少于20ml。

1.2 方法：所有标本同时采用Genexpert MTB/RIF检测、抗酸染色法检测。取纤支镜灌洗液标本20ml行Genexpert MTB/RIF检测，约2h后系统自动检测结果。纤支镜灌洗液标本同时进行抗酸染色，操作参照《结核病实验室标准化操作与网络建设》进行。

1.3 统计学分析

研究数据资料均采用SPSS19.5进行统计分析，计量资料用（±s）表示，用t检验；计数资料用（%）表示，用χ2检验，P＜0.05表示有统计学意义。

2.结果

支气管灌洗液使用Genexpert MTB/RIF检测MTB结果，50例菌阴疑似肺结核患者中，有35例患者检测MTB阳性，阳性检出率为70%，利福平敏感35例（表1）。支气管灌洗液的抗酸染色MTB阳性检出6例，阳性检出率12%，Genexpert MTB/RIF检测MTB结果比较，χ2检验，有显著统计学意义（P＜0.05）。

比较采用X2检验，X2=34.77，自由度=1，P＜0.05为差异有统计学意义。

在利福平耐药基因检测方面，由于抗酸染色不能获取相关信息，故两者未行相关比较。

根据上述检测结果，给予MTB阳性结果者行抗结核治疗（方案：异烟肼、利福平、吡嗪酰胺、乙胺丁醇，顿服），约1周左右患者临床症状（发热、纳差、乏力等）逐渐减轻，2个月后复查胸部影像学，提示肺部病灶均有吸收减少，治疗有效。

3.讨论

在我国大部分地区，结核病的早期诊断主要依靠痰涂片抗酸染色，由于涂片对标本含菌量要求高，荧光抗酸染色，40倍镜下进行观察，发现1条以上/300视野报告阳性，全片300个视野无抗酸杆菌报告阴性[4]，导致其针对结核病的敏感度低，引起漏诊，从而延误治疗；还可能发生误诊，造成过度诊疗，增加了患者医疗经济负担。Genexpert MTB/ RIF技术是将样品准备、定量PCR扩增和荧光扩增检测基于一身的核酸扩增检测分析系统。只需要在独立的反应孔中加入待检测样品，2h便能快速测出标本中是否有结核分枝杆菌，以及是否对利福平耐药。同时，该系统具有高度全自动化、速度快、生物安全性好等优点。WHO已于2010年底批准其应用。截止2012年7月，2/3的结核病高负担国家、1/2耐多药结核病高负担国家均将Genexpert MTB/ RIF的应用列入国家结核病规划指南。2013年7月，Genexpert MTB/RIF通过美国食品药品监督管理局（FDA）的认证。在肺内相应叶、段行纤支镜灌洗技术，扩大了检测范围，更适用于临床上疑似肺结核的患者，提高了结核分枝杆菌的检出率。我们所得出的结论也与李妍等[5]研究结果：不同类型样本采用Genexpert MTB/RIF技术检测的阳性率依次为灌洗液＞痰样本＞胸水是一致的。尽管Genexpert MTB/RIF检测技术硬件设施费用较贵，基层医疗机构不能自行购买，但纤支镜灌洗技术成熟且标本获取容易，可将标本送往Genexpert MTB/RIF相关检测机构，也能快速获取检测结果，对结核病的早期诊断意义重大。支气管灌洗液使用Genexpert MTB/RIF技术对菌阴疑似肺结核患者的结核分枝杆菌检出率明显高于抗酸染色法，能够在短时间内（2小时）内帮助明确诊断和判断利福平是否耐药。Genexpert MTB/RIF检测的结核分枝杆菌阳性的35

表1. 两种方法对纤支镜灌洗液标本阳性检出率比较

例标本中，均对利福平敏感，这与杨慧娟等[6]研究结果：

Genexpert MTB/RIF检测痰标本中结核分枝杆菌敏感率为

76.8 %有差异，可能与样本量少有关，后续会继续观察研究。总之，纤支镜下取得的支气管灌洗液使用Genexpert

MTB/RIF检测MTB与利福平耐药基因，能够大大提高结

核杆菌与利福平耐药基因的检出率，其敏感性及特异性均

较高于痰液、胸水等标本，用于临床对结核病的诊断与治

疗具有深远意义，而且对结核病的流行趋势也会产生控制

作用。

[1] 逢宇, 赵雁林. 加强结核病的科学研究[J]. 中国防痨杂志, 2013,35(9):639-642.

[2] 尚美, 刘冠. 发光二极管荧光显微镜实验室诊断效果评价[J]中国防痨杂志, 2010,32(5):275-279.

[3] 郭新枝, 陈裕, 于永敏, 等. 支气管肺泡灌洗液BACTEC-MGIT 960 结核菌快速培养的临床研究[J]. 北京医学, 2013,35(3):221-222.

[4] 陈海强, 唐柳生. Xpert MTB/RIF 法和涂片法检测痰液结核分枝杆菌的比较[J]中外医疗, 2015,34(13):186-187.

[5] 李妍, 张天华. Xpert MTB/RIF 技术在MTB监测中的应用价值[J]. 检验医学, 2016,31(1):52-55.

[6] 杨慧娟, 马利, 陈连勇, 等. Xpert MTB/RIF技术对结核分枝杆菌检测和耐多药结核快速筛查的研究[J]. 中国卫生检验杂志, 2015,25(23):4056-4059.

1006-6586(2016)06-0098-02

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