清咽利肺散剂的止咳、化痰、抗炎和止痛作用研究Δ

张 丽，张一云，符 洪，王开裕，雷玲芳，王春桃#（.海南省中医院药学部，海口 57003；.海南省药物研究所，海口 5706）

清咽利肺散剂的止咳、化痰、抗炎和止痛作用研究Δ

张 丽1＊，张一云2，符 洪2，王开裕1，雷玲芳1，王春桃2#（1.海南省中医院药学部，海口 570203；2.海南省药物研究所，海口 570216）

目的：考察清咽利肺散剂的止咳、化痰、抗炎和止痛作用。方法：将小鼠分为模型组、阳性对照组（炎见宁片，0.29 g/kg）和清咽利肺散剂低、中、高剂量组（13.7、27.3、54.6 g/kg），每组10只。模型组小鼠ig等体积生理盐水，各给药组小鼠ig相应药物，每天1次，连续7 d。给药结束后，分别采用小鼠氨水引咳实验、气管酚红排泌实验、二甲苯致耳肿胀实验和醋酸扭体实验考察清咽利肺散剂的止咳、化痰、抗炎、止痛作用。结果：与模型组比较，除清咽利肺散剂低剂量组小鼠外，其余各组小鼠的咳嗽次数均明显减少，且清咽利肺散剂高剂量组小鼠的咳嗽潜伏期明显延长（P＜0.05或P＜0.01）；阳性对照组和清咽利肺散剂高剂量组小鼠的酚红排泌量、20 min内扭体次数明显减少，耳肿胀度明显减轻（P＜0.05或P＜0.01）。结论：清咽利肺散剂对小鼠具有良好的止咳、化痰、抗炎、消肿止痛的作用。

清咽利肺散剂；止咳；化痰；消炎；止痛；小鼠

清咽利肺合剂为海南省中医院张永杰教授通过长期的临床实践后总结优化得出的经验方，由千里光、鱼腥草、桑白皮、牛蒡子、杏仁、款冬花等18种中药材组成，具有润肺止咳、清火排毒之功效，适用于咳嗽咽痒、咳痰不爽、胸肺壅塞、头身困重等症，临床上多用于风热袭肺咳嗽和痰湿壅肺型咳嗽的治疗，作用明显[1]。但由于该药剂型为合剂，在保存和携带上存在一定的不便。鉴于此，笔者拟将其剂型改为散剂，采用小鼠氨水引咳实验、气管酚红排泌实验、二甲苯致耳肿胀实验和醋酸扭体实验考察清咽利肺散剂的止咳、化痰、抗炎、止痛作用，并以具有清热消炎、镇痛[2]、利尿[3]作用，用于治疗上呼吸道感染，与本方适应病症相似的炎见宁片为阳性对照，旨在为新药开发提供前期研究基础。

1 材料

1.1 仪器

UV-2401PC紫外分光光度计、AUW220D十万分之一天平（日本岛津公司）；402AI超声雾化机（江苏鱼跃医疗设备股份有限公司）。

1.2 药品与试剂

清咽利肺散剂（海南省中医院自制，批号：150801，规格：15 g/包）；炎见宁片（广州梧州制药股份有限公司，批号：140502，规格：0.25 g/片）；间二甲苯（国药集团化学试剂有限公司，批号：20130526，化学纯）；氨水（西陇化工股份有限公司，批号：141207，分析纯）；冰醋酸（广东光华科技股份有限公司，批号：20141215，分析纯）。

1.3 动物

KM小鼠180只，SPF级，♀♂各半，体质量18～22 g，购自海南省实验动物中心[许可证号：SCXK（琼）2015-0007]。小鼠饲养于海南省药物研究所SPF动物房内，室温为（23±1）℃，通风良好，饲养期间大鼠自由饮食。

2 方法

2.1 分组与给药

将小鼠随机分为模型组、阳性对照组和清咽利肺散剂低、中、高剂量组。模型组小鼠ig等体积生理盐水，阳性对照组小鼠ig炎见宁片0.29 g/kg（人临床用量的等效剂量）[2]，清咽利肺散剂低、中、高剂量小鼠ig咽利肺散剂2.93、5.85、11.7 g/kg（分别为人临床用量的0.5、1、2倍剂量），每天给药1次，连续给药7 d。

2.2 氨水引咳实验[4-5]

随机取小鼠80只（♀♂兼有）进行预实验。分别将小鼠放入500 ml烧杯中，用超声波雾化器通入13%浓氨水雾化气，5 s后停止。取出小鼠，从通入浓氨水雾化气开始计时，3 min内不发生咳嗽的小鼠（对氨水不敏感者）及咳嗽次数超过50次者（过于敏感）弃之不用[5]。剩余小鼠随机取50只，休息3 d后按“2.1”项下方法进行分组、给药。于末次给药30 min后，同法再次进行氨水引咳实验，记录小鼠从通入氨气开始至3 min内初次咳嗽的时间（即咳嗽潜伏期）及咳嗽次数。

2.3 气管酚红排泌实验[6-7]

取完成氨水引咳实验的小鼠，于当日ip 0.5%酚红溶液（0.1 ml/10 g）。30 min后脱颈椎处死小鼠，分离从喉结至支气管分叉段气管条，剥离周围组织。放入2 ml 5%碳酸氢钠（NaHCO3）溶液中，剪开气管段，轻微震摇。放置10 min后，以400×g离心10 min，取上清于546 nm波长处测光密度（OD546）值表示酚红排泌量，5%NaHCO3溶液为空白对照。

2.4 二甲苯耳肿胀实验[8]

取50只小鼠（♀♂各半），按“2.1”项下方法进行分组、给药。末次给药30 min后，用40 μl二甲苯涂抹于小鼠右耳，30 min后脱颈处死小鼠，剪下双耳，以5 mm打孔器打下相同位置耳片，记录左右耳片质量，计算耳肿胀度[耳肿胀度（%）＝（右耳片质量－左耳片质量）/左耳片质量×100%]和肿胀抑制率[肿胀抑肿率（%）＝（模型组小鼠耳肿胀度－给药组小鼠耳肿胀度）/模型组小鼠耳肿胀度×100%]。

2.5 醋酸扭体实验[8]

取50只小鼠（♀♂各半），按照“2.1”项下方法进行分组和给药。末次给药20 min后，各组小鼠ip 0.7%醋酸溶液（10 ml/kg），观察20 min内小鼠的扭体次数。

2.6 统计学方法

3 结果

3.1 止咳、化痰作用考察结果

与模型组比较，各给药组小鼠的咳嗽潜伏期均有所延长、咳嗽次数以及酚红排泌量均有所减少。其中，清咽利肺散剂高剂量组小鼠的咳嗽潜伏期较模型组显著延长（P＜0.05），阳性对照组和清咽利肺散剂高剂量组小鼠的酚红排泌量、咳嗽次数以及清咽利肺散剂中剂量组小鼠的咳嗽次数较模型组均显著减少（P＜0.01）。各组大鼠咳嗽潜伏期、咳嗽次数和酚红排泌量测定结果见表1。

3.2 抗炎、止痛作用考察结果

与模型组比较，各给药组小鼠的耳肿胀度均有不同程度降低，扭体次数均有不同程度减少。其中，阳性对照组和清咽利肺散剂高剂量组小鼠的耳肿胀度较模型组显著减轻（P＜0.05），扭体次数较模型组显著减少（P＜0.05）。各组小鼠的耳肿胀度、肿胀抑制率和20 min内扭体次数测定结果见表2。

表1 各组大鼠咳嗽潜伏期、咳嗽次数和酚红排泌量测定结果（±s，n＝10）Tab 1 Cough incubation period，cough times and phenol red excretion amount of mice in each group（±s，n＝10）

表1 各组大鼠咳嗽潜伏期、咳嗽次数和酚红排泌量测定结果（±s，n＝10）Tab 1 Cough incubation period，cough times and phenol red excretion amount of mice in each group（±s，n＝10）

注：与模型组比较，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01Note：vs.model group，＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

酚红排泌量0.162±0.096 0.063±0.031＊＊0.117±0.051 0.102±0.037 0.051±0.030＊＊组别模型组阳性对照组清咽利肺散剂低剂量组清咽利肺散剂中剂量组清咽利肺散剂高剂量组剂量，g/kg 0.29 2.93 5.85 11.70咳嗽潜伏期，s 74.97±28.69 98.80±26.76 76.50±27.66 80.62±31.59 105.39±28.28＊咳嗽次数8.3±3.1 4.1±2.3＊＊5.6±2.8 4.2±2.6＊＊3.7±2.3＊＊

表2 各组小鼠的耳肿胀度、肿胀抑制率和20 min内扭体次数测定结果（±s，n＝10）Tab 2 Ear edema，inhibitory rate of ear edema and writhing time within 20 min of mice in each group（±s，n＝10）

表2 各组小鼠的耳肿胀度、肿胀抑制率和20 min内扭体次数测定结果（±s，n＝10）Tab 2 Ear edema，inhibitory rate of ear edema and writhing time within 20 min of mice in each group（±s，n＝10）

注：与模型组比较，＊P＜0.05Note：vs.model group，＊P＜0.05

组别模型组阳性对照组清咽利肺散剂低剂量组清咽利肺散剂中剂量组清咽利肺散剂高剂量组20 min内扭体次数21.7±7.8 12.6±6.2＊17.1±7.1 16.4±7.9 14.8±6.4＊剂量，g/kg 抑制率，% 0.29 2.93 5.85 11.70耳肿胀度，% 66.73±22.32 27.47±12.62＊50.33±21.17 42.35±18.29 34.58±11.36＊58.83 24.58 36.54 48.18

4 讨论

研究药物镇咳作用时多采用机械刺激法、化学刺激法、电刺激法及抗原致敏引咳法来诱发咳嗽。本研究采用化学刺激法，用氨水刺激小鼠呼吸道引发咳嗽，该法不仅快速、简便、耗药量少[5，9]，而且还可以在一定程度上模拟外界刺激因素。本实验结果显示，给予高、中剂量清咽利肺散剂均能显著减少小鼠的咳嗽次数，但是仅高剂量清咽利肺散剂能显著延长氨水诱发咳嗽的潜伏期，中、低剂量效果不显著。这表明清咽利肺散剂主要的作用途径在于抑制咳嗽频率，而对于咳嗽敏感性的贡献相对较弱，猜测该药可能通过作用于神经中枢或降低咳嗽反射而达到减少咳嗽次数的作用。本次实验所用小鼠均为当天氨水引咳实验小鼠，由于氨水刺激后的痰液分泌更贴近病原刺激所致的生理情形，相比单纯酚红痰泌量实验，更能反映药物在病理条件下对呼吸道炎症的改善作用。实验结果显示，高剂量清咽利肺散剂能显著减少小鼠气管酚红排出量，即可明显减少小鼠气管痰液分泌，与阳性对照药的作用相似；而中剂量抑制痰液分泌效果具有边缘效应（P＝0.054）。鼠耳肿胀及醋酸扭体实验结果显示，高剂量清咽利肺散剂能显著减轻二甲苯致耳肿胀度，抗炎效果明显；同时能显著减少小鼠醋酸扭体次数，具有一定止痛效果。但中剂量清咽利肺散剂在抗炎和止痛这两个方面作用不明显。

综合来看，清咽利肺散剂主要的药理作用是止咳和化痰。在止咳上，清咽利肺散剂中、高两个剂量均对小鼠咳嗽有显著的抑制作用；在化痰上，高剂量清咽利肺散剂能显著减少

痰液分泌量，中剂量清咽利肺散剂抑制痰泌量则具有边缘效应。而在缓解急性炎症及止痛方面效果相对一般，均只有高剂量清咽利肺散剂能明显减轻炎性反应及止痛效果。本处方所应用的药物包含千里光、鱼腥草、桑百叶等多种药材，其中多数性微寒，行清热解毒之功效[10]。而根据处方各个药材组分作用来看，理论上本处方应当具有良好的抗炎[4，11-13]、镇咳[14]作用。在本次抗炎实验中，可能是因为数据间离散度过大而掩盖了其真实的抗炎效果。由于鼠耳肿胀实验中耳片应当尽量打于相同区域，稍有偏差则鼠耳自身厚度差异会掩盖部分肿胀效果，需要更熟练的打孔技巧来提高打孔位置精确度，以减小耳片数据误差。本研究所用的模型及实验大多为经典止咳、化痰、消炎、止痛的基础模型与实验，主要通过考察药效学方面的内容验证药物的药效，未涉及药物的作用机制等深入内容，在后续研究中笔者将进一步探讨。

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Study on the Effects of Relieving Cough，Reducing Phlegm，Inhibiting Inflammatory and Relieving Pain of Qingyan Lifei Powder

ZHANG Li1，ZHANG Yiyun2，FU Hong2，WANG Kaiyu1，LEI Lingfang1，WANG Chuntao2（1.Dept.of Pharmacy，Hainan Provincial Hospital of TCM，Haikou 570203，China；2.Hainan Institute for Pharmaceutical Research，Haikou 570216，China）

OBJECTIVE：To investigate the effects of Qingyan lifei powder（QYLFP）on relieving cough，reducing phlegm，inhibiting inflammatory and relieving pain.METHODS：The mice were divided into model group，positive control group（Yanjianning tablet，0.29 g/kg），QYLFP low-dose，medium-dose and high-dose groups（13.7，27.3，54.6 g/kg），with 10 mice in each group.Model group was given constant volume of normal saline intragastrically，and treatment groups were given relevant medicine intragastrically，once a day，for 7 days.After medication，the effects of relieving cough，reducing phlegm，anti-inflammatory and analgesic of QYLFP were investigated through ammonia-induced cough method，phenol red method，xylene-caused mice ear edema test and acetic acid writhing test.RESULTS：Compared with model group，the cough times of those groups decreased significantly，except for QYLFP low-dose group；the cough incubation period in QYLFP high-dose group prolonged significantly（P＜0.05 or P＜0.01）.The phenol red excretion amount and writhing times within 20 min of mice decreased significantly and ear edema relieved significantly in positive control and QYLFP high-dose group（P＜0.05 or P＜0.01）.CONCLUSIONS：QYLFP has good effects on relieving acough，reducing sputum and inhibiting inflammatory and relieving pain.

Qingyan lifei powder；Relieving cough；Reducing phlegm；Inhibiting inflammatory；Relieving pain；Mice

R943

A

1001-0408（2016）31-4376-03

2016-05-01

2016-09-13）

（编辑：林 静）

海南省中药现代化专项项目（No.ZY201428）

＊副主任中药师。研究方向：中药制剂、医院药学。电话：0898-66244599。E-mail：1047559396@qq.com

#通信作者：副主任药师。研究方向：药品检验、药品质量标准研究。电话：0898-66832918。E-mail：1721170395@qq.com

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2016.31.17