复方黄栌口服液对小鼠黄疸型肝炎模型血清中指标的影响

苏 峰，郝少君，孙建华，马珍珍，李文俊，黎丹东，张正臣



·论著·

复方黄栌口服液对小鼠黄疸型肝炎模型血清中指标的影响

苏 峰，郝少君，孙建华，马珍珍，李文俊，黎丹东，张正臣*

目的 观察复方黄栌口服液对异硫氰酸-萘酯致小鼠黄疸型肝炎模型的影响。方法 将72只KM小鼠随机分为空白组、模型组、护肝宁片组(1.012 5 g/kg)及大、中、小剂量复方黄栌口服液组(30、15、30 mL/kg)，每组12只，空白组和模型组灌胃相同体积生理盐水，其余组连续灌胃相应药物10 d。各组于实验第8天，灌胃ANIT造模，48 h后取血，分离血清，取血清并检测血清ALT、AST、TNF-α等生化指标，观察肝脏病理组织学改变。结果 小鼠黄疸型肝炎模型造模成功；与模型组相比，大、中、小剂量复方黄栌口服液组血清中ALT、AST、TNF-α水平均显著降低(P<0.01)。结论 复方黄栌口服液对ANIT诱导的小鼠急性肝损伤具有很好的保护作用。

复方黄栌口服液；小鼠；异硫氰酸-萘酯；急性肝损伤

0 引言

黄栌(Continuscoggygriascop.)具有治疗黄疸性肝炎的作用。371医院及相关人员对黄栌进行了制剂及药理研究[1]，并进行了临床观察。为增强其疗效，我们在其基础上研制了复方黄栌口服液，该制剂由黄栌[2]、五味子、垂盆草、栀子[3]、枸杞、大枣等六味中药组成。诸药合用具有除湿清热[4]、退黄降酶、保肝等作用，临床用于急性黄疸型肝炎[5]，慢性肝炎及丙肝等引起的黄疸偏高、转氨酶高等疗效较好。为验证其作用，并探讨其作用特点，笔者观察其对黄疸型肝炎小鼠血清中的各项生化指标及肝脏组织形态的影响，现报道如下。

1 材料和方法

1.1 实验动物 小鼠，种系：KM，等级：SPF级，雌雄各半，18～22 g，合格证号：37009200000791，提供单位：山东鲁抗医药股份有限公司。小鼠饲养在河南中医学院实验动物中心，许可证号：SYXK(豫)2015-0005。消毒饲料、消毒垫料均由河南省实验动物中心提供。饮水为消毒蒸馏水。饲养条件：温度20～25 ℃，相对湿度40%～60%，自然光照，每笼6只，常规饲养，隔天更换垫料。

1.2 实验药品和试剂 复方黄栌口服液，解放军第三七一医院，批号：20150420，内服，20 mL/次,3次/d；护肝宁片，广东宝丹制药有限公司，批号:20150701；橄榄油，西班牙亿芭橄榄油公司生产，批号:20150701；Mouse AST Elisa kit，DG，批号：23037906；Mouse ALT Elisa kit，DG，批号：23037907；Mouse TNF-α Elisa kit，DG，批号：23037905。

1.3 实验仪器 FA(N)/JA(N)系列电子天平，上海民桥精密仪器有限公司；HWS12型电热恒温水浴锅，上海一恒科学仪器有限公司；KDC-160HR高速冷冻离心机，科大创新股份有限公司中佳分公司；680型酶标仪，美国BIO-RAD公司；可调式移液器，上海雷勃分析仪器有限公司。

1.4 实验方法 取小鼠72只，随机分为6组，每组12只，雌雄各半，随机分为空白组，模型组，护肝宁片组(1.012 5 g/kg，相当于临床用量的15倍，0.3 mL/20 g)，大、中、小剂量复方黄栌口服液组(30、15、7.5 mL/kg，相当于临床用量的30、15、7.5倍，0.3 mL/20 g)，每天给药1次，连续给药10 d。于第8天给药后2 h，各给药组及模型组灌服0.4% ANIT橄榄油溶液(100 mg/kg),空白组给予同体积的橄榄油，48 h后取材,取材前禁食不禁水12 h。全部小鼠摘眼球取血并处死，离心、分离血清，所采血液室温静置后3 000 r/min 4 ℃离心15 min，取留血清用于生化检查，按试剂盒说明分别测血清AST、ALT、TNF-α水平。剥离肝脏，取肝脏正中叶相同部位的组织，4%多聚甲醛固定，石蜡包埋，切片，苏木素-伊红(HE)染色，观察肝脏组织形态学变化。

2 结果

2.1 复方黄栌口服液对小鼠黄疸型肝炎模型血清中指标ALT、AST、TNF-α的影响 与空白组比较，模型组血清中ALT、AST、TNF-α水平显著升高(P<0.01)，说明造模成功。与模型组比较，大、中、小剂量复方黄栌口服液组和护肝宁片组均可显著降低血清中ALT、AST、TNF-α水平(P<0.01)。见表1。

表1 复方黄栌口服液对小鼠黄疸型肝炎模型血清中指标的影响

注：与模型组比较，**P<0.01

2.2 黄栌口服液对肝脏组织形态的影响[6-8]各组肝脏组织学观察显示，空白对照组小鼠肝组织的肝小叶分界清晰，肝细胞索以中央静脉为中心呈放射状排列，肝细胞正常。模型组小鼠肝组织肝小叶分界不清晰，肝细胞索排列紊乱，肝细胞出现局灶性坏死和嗜酸性变及点状坏死，可见有胆栓形成。护肝宁片组小鼠肝组织的肝小叶分界不清晰，可见肝细胞出现局灶性坏死和点状坏死，汇管区出现炎细胞浸润，及少量胆栓形成。大剂量复方黄栌口服液组小鼠肝组织肝小叶分界欠清晰，可见部分肝细胞索以中央静脉为中心呈放射状排列，部分排列紊乱；肝细胞出现局灶性坏死和点状坏死，同时可见部分再生的肝细胞，胆栓明显减少。中剂量复方黄栌口服液组小鼠肝组织的肝小叶分界较为清晰，肝细胞索以中央静脉为中心呈放射状排列，可见少个肝细胞局灶性坏死，以及大量的再生的肝细胞。小剂量复方黄栌口服液组小鼠肝组织的少部分肝小叶分界清晰，而大部分分界不清楚；肝细胞出现局灶性坏死和点状坏死及少个胆栓形成，可见大量的再生肝细胞。见图1。

3 讨论

复方黄栌口服液由黄栌、五味子[9]、垂盆草[10]、栀子、枸杞[11]、大枣等六味中药组成。该方剂由药械科、感染科合作结合多年临床经验，根据中医理论和现代药理研究成果拟定的院内协定处方。诸药合用具有除湿清热、退黄降酶、护肝等作用。经临床观察，复方黄栌口服液治疗黄疸型和无黄疸型肝炎具有降酶、保肝的作用，疗效显著。本研究观察大、中、小剂量复方黄栌口服液组对小鼠黄疸型肝炎模型血清中指标的影响，并观察其是否存在量效关系。

图1 复方黄栌口服液对黄疸型肝炎模型小鼠肝组织形态的影响

本研究采用0.4% α-萘异硫氰酸酯(ANIT)橄榄油溶液(100 mg/kg)建立模型。ANIT是一种间接肝毒剂[12]，主要损伤肝内胆管上皮细胞，引起毛细胆管增生及小叶间胆管周围产生炎症，从而造成胆管阻塞，形成明显的胆汁淤积，并伴以点状坏死为主的肝实质细胞损害，产生胆汁淤积性黄疸，出现高胆红素血症和胆汁分泌减少。目前常用黄疸动物模型为灌胃给予实验动物ANIT造成[13]，通常实验动物为小鼠[14]和大鼠[15]。ANIT诱发的小鼠肝损伤的生物化学和病理形态学改变类似于人类肝内胆汁淤积病变，本实验采用先给药后造模的方法观察复方黄栌口服液对小鼠黄疸型肝炎的预防作用。

ALT[16]与AST主要分布在肝细胞内，肝细胞坏死，则ALT和AST升高，且升高程度与肝细胞受损程度相一致，是最常用的肝功能指标。ANIT灌服后，先发生胆管周围微环境的改变，巨噬细胞和树突状细胞受刺激后触发其免疫、吞噬及细胞毒作用,导致胆管上皮细胞和肝实质细胞受损或坏死，继之以胆红素、胆酸和胆盐的代谢紊乱，最终导致胆汁淤积性肝损伤。TNF-α是一种重要的前炎性因子[17]，适量时可发挥免疫调节功能,分泌过多或调节失控时，则引起免疫病理损伤。TNF-α与肝损伤密切相关。

本研究表明，复方黄栌口服液可以显著降低血清中ALT、AST、TNF-α水平，表明其有明显的降酶作用。黄疸型肝炎动物实验中常用的阳性药为护肝宁片，护肝宁片对实验动物具有保肝降酶作用。复方黄栌口服液对黄疸模型小鼠具有退黄降酶作用，在治疗肝病方面有良好的开发应用前景，其作用机制可能与保护肝细胞、加强胆红素结合与排泄、降低毛细胆管压、促进胆汁的排泄有关。本试验为临床提供了应用依据，可作为增加药源的参考，但其作用机制还有待进一步研究。

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Effects of compound sumac oral liquid on serum indexes of mouse model of icterohepatitis

SU Feng，HAO Shao-jun，SUN Jian-hua，MA Zhen-zhen，LI Wen-jun，LI Dan-dong，ZHANG Zheng-chen*

(The 371st Central Hospital of the Chinese People′s Liberation Army，Xinxiang 453000,China)

Objective To observe the effect of compound sumac oral liquid on cotinusisothiocyanate-naphthyl acetate induced mouse model of icteric hepatitis.Methods Totally 72 KM mice were randomly divided into control group,model group,Huganning tablets group (1.012 5 g/kg) and large,medium and small dose of compound sumac oral liquid group (30,15,30 mL/kg),12 rats in each group.Control group and model group were given intragastric administration of the same volume of saline;continuous intragastric administration of corresponding drugs was performed in the other groups for 10 d. After 8 days of experiment,the model of ANIT was made by filling the stomach,blood was taken after 48 h,the serum was separated and taken,and the serum ALT,AST,TNF-α and other biochemical indexes were detected. The pathological changes of liver were observed. Results The building of icterohepatitis model of mouse was successful.Compared with the model group,large,medium and small dose of compound sumac oral liquid could obviously reduce the levels of serum ALT,AST,TNF-α (P<0.01).Conclusion Compound sumac oral liquid can obviously protect mouse liver damaged by ANIT.

Compound sumac oral liquid;Mouse；Isothiocyanate-naphthyl;Acute liver damage

2016-05-06

中国人民解放军第三七一中心医院，河南 新乡 453000

河南新乡重点科技攻关(ZG14012)

10.14053/j.cnki.ppcr.201611001

*通信作者