脑康灵C胶囊质量标准研究*

孙婷婷 张 红 党秋萍 刘建峰

陕西省中医药研究院中药研究所(西安 710003)



脑康灵C胶囊质量标准研究*

孙婷婷 张 红△党秋萍 刘建峰

陕西省中医药研究院中药研究所(西安 710003)

目的：建立脑康灵C胶囊的质量标准，为控制脑康灵C胶囊的质量提供依据。方法：采用薄层色谱法对该胶囊中的黄芪和山茱萸进行定性鉴别。采用HPLC-ELSD法对君药黄芪中黄芪甲苷进行含量测定。色谱柱为DIKMA Diamonsil C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流动相为乙腈-水(32:68)；进样体积10μl，检测器为蒸发光散射检测器，气体流速：2.8 L/min；漂移管温度：105℃。结果：定性鉴别中黄芪薄层鉴别斑点清晰，阴性样品在相应的位置无斑点。含量测定中黄芪甲苷在1.0328～6.1968μg范围内呈良好的线性关系，阴性无干扰，平均加样回收率为100.44%，RSD为1.93%。结论：本实验建立的方法操作简单，灵敏度高，可作为脑康灵C胶囊的质量控制方法。

脑康灵C胶囊由黄芪、山茱萸、鹿角胶等中药组成，该制剂是西安中医脑病医院临床应用较好的医院制剂，具有补脑益髓，健脾利水，促进脑细胞再生，增强脑组织活力的功效，临床用于外部性脑积水，各型脑积水恢复期，脑发育不全，记忆力减退等属脾肾阳虚证型者。黄芪为该制剂中君药，现代药理研究表明黄芪具有改善大脑退行性病变、提高记忆力以及改善全脑再灌注组织损伤等作用，黄芪甲苷既是黄芪中指标性成分又是活性成分[1]。在不改变脑康灵C原处方的基础上将其改成胶囊剂，为更专属、灵敏的控制该制剂的质量、保障临床用药的有效性，本研究中采用薄层色谱法对该制剂中黄芪和山茱萸进行薄层鉴别，用HPLC-ELSD法对黄芪中黄芪甲苷进行含量测定并对测定方法进行优化，并在此基础上制定了质量标准，现将结果报道如下。

1 材 料

Waters 2695高效液相色谱仪(蒸发光散射检测器)，GCK3308全自动空气源(北京中惠普分析技术研究所)，Empower操作软件，数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)、电子分析天平(北京赛多利斯天平有限公司)。黄芪甲苷标准品、马钱苷对照品均购自中国食品药品鉴定研究院(批号分别为：110781-200613，11640-200503)，甲醇、乙腈为色谱纯(美国Fisher公司产)，水为重蒸水(美国MILLIPORE)，其它试剂为分析纯。薄层色谱中所用硅胶板为普通硅胶G板(青岛海洋化工有限公司)。本研究中所用脑康灵C胶囊由西安中医脑病医院药剂科生产，60粒/瓶，生产批号为140901、140902、140903。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱定性鉴别 山茱萸定性鉴别[2]：精密称取胶囊内容物2g，研细，加无水乙醇20ml，超声提取15min，过滤，挥干溶剂，残渣加无水乙醇2ml溶解，即为样品溶液。按照处方比例称取缺山茱萸药材的阴性对照药材，同法制得阴性样品溶液[3]。取马钱苷对照品适量，加无水乙醇制得浓度为1mg/ml的马钱苷对照溶液。各样品及对照品溶液分别点样5μl，以乙酸乙酯-乙醇-冰醋酸(50∶10∶1)为展开剂，喷以5%香草醛硫酸溶液，于105℃加热至斑点显色清晰。样品色谱条带中，检出马钱苷，缺山茱萸阴性样品无干扰。

黄芪定性鉴别[4]：精密称取胶囊内容物5g，加甲醇30ml，超声提取30min，过滤，挥干溶剂，加水使溶解，水溶液用水饱和的正丁醇提取2次各40ml，正丁醇液继用浓氨试液洗涤2次各15ml，正丁醇液用水洗涤2次各40ml，合并正丁醇溶液，挥干溶剂，残渣加1ml甲醇溶解，为样品溶液。精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成浓度为1mg/ml的黄芪甲苷对照品溶液。按处方比例称取缺黄芪药材的阴性对照药材严格按照样品制备方法制得阴性样品溶液。点样量各5μl，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)10℃静置下层溶液为展开剂，以10%硫酸乙醇溶液于105 ℃显色。样品色谱条带中检出黄芪甲苷，缺黄芪阴性样品未见干扰。

2.2 样品中黄芪甲苷含量测定 色谱条件：色谱柱：DiamonsilC18柱(250mm×4.6mm，5μm)，流动相：乙腈-水(32:68)；ELSD条件(检测器温度：105℃；气体流速：2.8 L/min)，进样体积10μl。样品溶液配制：对照品溶液配制 精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成含黄芪甲苷0.5164 mg/ml的对照品溶液。供试品溶液配制[5-6]：精密称取同一批号样品内容物适量，研细，精密称取5份，每份约18g，精密称定置索氏提取器，加甲醇120ml回流4h，提取液挥去溶剂，残渣加水溶解，水溶液用水饱和的正丁醇提取3次各40ml，正丁醇液继用氨试液洗涤2次各40ml，合并正丁醇液，挥干溶剂，残渣加水溶解，水溶液通过D101型大孔吸附树脂柱，先用水50ml洗脱，继用40%乙醇50ml洗脱，最后用70%乙醇溶液50ml洗脱，挥干溶剂，残渣加甲醇5ml溶解，滤过，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜滤过，精密吸取10μl，测定黄芪甲苷含量。每份样品平行做3份。阴性对照样品的配制：按照原处方称取除黄芪以外的各药材，严格按照本品制备工艺进行制备，按供试品项下方法进行操作，制得阴性样品。系统适用性：对照品、供试品以及阴性样品按照色谱条件进行测定，发现供试品中黄芪甲苷峰分离度好，阴性样品没有干扰，故确定流动相比例为乙腈-水(18∶82)。

线性范围考察：精密吸取0.5164 mg/ml黄芪甲苷对照溶液2μl、4μl、6μl、8μl、10μl、12μl进行测定，以峰面积自然对数为纵坐标(Y)，进样量自然对数为横坐标(X)，得回归方程 y=1.8519x-5.2004，r =0.9997，黄芪甲苷在1.0328～6.1968μg范围内，峰面积值与进样量呈良好的线性关系。精密度：精密吸取黄芪甲苷对照溶液10μl，连续进样5次测定，计算得RSD为2.0%。稳定性：取样品内容物适量，研细，按供试品项下制得样品溶液，放置0、2、4、6、8、10、12h进行测定并计算含量，测得RSD为0.2%。结果表明本样品溶液在12h内稳定。重复性：取样品批号(140901)内容物适量，研细，精密称取5份，每份约18g，精密称定，制得供试品，依次测定，计算黄芪甲苷均值为0.1289 mg/g，RSD1.48%，该方法重现性良好。

加样回收率：精密称取已知含量(0.1289 mg/g)的样品共6份，置三角瓶中，分别精密加入黄芪甲苷对照品(0.5164 g/ml) 2.2、2.2、1.76、1.76、2.64、2.64 ml，按供试品制备方法制成加样回收供试品溶液，进行测定，结果见下表。试验结果表明，平均回收率为100.44%，结果显示RSD为1.93%，黄芪甲苷回收率在95%～105%之间，表明加样回收率良好。

样品测定：精密称取批号为140901、140902、140903脑康灵C胶囊样品适量，按供试品项下方法制备供试品溶液，测定，结果见下表。

表1 黄芪甲苷回收试验结果(n=6)

表2 样品的含量测定结果

3 讨 论

脑康灵C胶囊是西安中医脑病医院根据中医辨证论治的理论和实践总结出的中药复方制剂。由于本制剂中药物多、成分复杂，质量控制指标的选择一直是该制剂质量标准研究中的难点，使其临床应用受到一定的限制，为此需要对其质量标准进行系统深入的研究[7]。本研究参考相应的文献对该方中黄芪、熟地、山茱萸、牡丹皮、鹿角胶依次进行了定性鉴别，结果显示只有黄芪和山茱萸的主斑点清晰，分离效果好，阴性对照无干扰。含量测定色谱结果显示黄芪甲苷能与其他成分良好的分离且保留时间适合，阴性对照无干扰，能够准确的反映出产品的内在质量[9]。本研究建立的薄层色谱方法以及含量测定方法结果稳定可靠、专属性强、方法简单可行，可作为脑康灵C胶囊的质量控制。

[1] 刘 爽.黄芪药理作用的研究进展[J].北方药学，2015，12(12)：95-96.

[2] 王桂红，周松迪，张 骏，等.苗山消渴康复颗粒质量标准研究[J].中药材，2012,35(3)：482-483.

[3] 李 爽，贾 媛，范 玲，等.芪葵颗粒定性定量方法研究[J].药物分析杂志，2012,32(9)：1564-1565.

[4] 赵 勇，王 艳，龙海燕，等.阿归养血颗粒质量标准研究[J].中国药业，2014,23(18)：43-44.

[5] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版(一部)[S].北京: 中国医药科技出版社,2015: 302.

[6] 吴高芬.高效液相色谱-蒸发光散射器法测定芪芳气血颗粒中黄芪甲苷含量[J].中国药业，2015,24(12)：60-61.

[7] 林玉红，杨娟英，谢 伟，等.益心解毒颗粒质量标准研究[J].陕西中医，2011，32(9):1235-1236.

(收稿2016-09-20；修回2016-10-17)

*陕西省科技厅科技攻关项目(201219-03-06)

△通讯作者

色谱法 @脑康灵 C胶囊

R96

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2016.12.051