肺腺癌新分类各亚型与EGFR突变的相关性

卢徐涟，郦秀芳，张海勇，吕艳婷，胡孟钧

（诸暨市人民医院 病理科，浙江 绍兴 311800）

肺腺癌新分类各亚型与EGFR突变的相关性

卢徐涟，郦秀芳，张海勇，吕艳婷，胡孟钧

（诸暨市人民医院 病理科，浙江 绍兴 311800）

目的：探讨肺腺癌新分类[2011年国际肺癌研究会（IASLC）/美国胸科协会（ATS）/欧洲呼吸协会（ERS）肺癌多学科协作组更新的非小细胞肺腺癌的分型标准]各亚型与表皮生长因子受体（EGFR）突变之间的关系。方法：共纳入240例手术切除的非小细胞肺腺癌患者。采用ARMS法对所有手术标本行EGFR突变检测。卡方分析比较不同病理亚型与患者EGFR突变发生率的关系。结果：纳入EGFR突变检测的240例患者中，大部分属于腺泡状（占89%）和乳头状（占56%）肺腺癌类型。EGFR在腺泡状、贴壁状、乳头状以及微乳头为主腺癌亚型的发生率高于非该亚型的肺腺癌（P＜0.05）；实性为主腺癌亚型EGFR突变发生率低于非实性为主腺癌亚型（P＜0.05）。结论：不同的腺癌病理亚型EGFR突变发生率存在差异，其中腺泡状为主亚型、微乳头为主亚型、乳头状为主亚型和贴壁状为主亚型的突变发生率较高，实性为主腺癌亚型突变发生率较低。[关键词] 肺腺癌；癌，非小细胞肺；病理分型；表皮生长因子受体

据统计，2013年，肺癌人数在男女患癌症人群中分别占28%和26%[1]。根据组织学特征和应对传 统治疗的方法的不同，可以把肺癌分为两大类：非小细胞肺癌（non-small-cell lung cancer，NSCLC）和小细胞肺癌。NSCLC分为3个主要的细胞类型：腺癌、鳞癌和大细胞癌，并进一步分为不同的亚型和变异[2]。在肺癌患者中，大部分是NSCLC（约占85%），其中腺癌是主要的细胞类型。2011年由国际肺癌研究会（IASLC）/美国胸科协会（ATS）/欧洲呼吸协会（ERS）肺癌多学科协作组联合对非小细胞肺腺癌的病理类型进行了更新。该分类将腺癌分为原位腺癌（5年生存率为100%）、微浸润腺癌（5年生存率为100%）和浸润腺癌。浸润腺癌包括贴壁样、腺泡样、乳头样、微乳头样、实性为主型和黏液型、胚胎型、胶样和肠型变异。浸润性肺癌的发生是连续积累基因突变和表观遗传变异的结果，肿瘤的形态学也能反映这一改变[3]。

肺癌目前被认为是一种具有自身特异性的疾病。研究发现肺腺癌中表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）突变，以及EGFR酪氨酸激酶抑制剂（tyrosine kinase inhibitors，TKIs）能有效延长EGFR突变阳性患者的无进展生存期，这对肺癌的治疗具有划时代的意义[4-7]。美国病理学协会（CAP）、IASLC和分子病理学协会最近出版了肺癌EGFR突变的分子检测的建议，指出患有晚期腺癌的所有患者，无论性别、种族、是否有吸烟史或其他临床危险因素，都应该进行EGFR检测[8]。

尽管近年来已经发表了一些有关EGFR突变的腺癌亚型的报道，但是新的肺腺癌病理亚型分类与EGFR突变的关系尚未明确。因此，本研究通过检测240例肺腺癌患者EGFR的突变情况，探讨新的肺腺癌分类中不同病理亚型与EGFR突变之间的关系。

1 资料和方法

1.1 一般资料 共纳入我院2008年6月至2014年10月间240例经手术切除的非小细胞肺腺癌患者手术标本。其中男122例，女118例；年龄3～76岁，中位年龄59岁，65岁以下135例，65岁及以上105例。根据吸烟史统计，既往或现在吸烟者119例，不吸烟者121例。根据病理分期，I期89例（占37.1%），I I期46例（占19.2%），I I I期105例（占43.7%）。根据病理亚型区分，微浸润腺癌4例，贴壁状腺癌29例，腺泡状为主腺癌89例，乳头状为主腺癌56例，微乳头为主腺癌35例，实性为主亚型腺癌24例，浸润性腺癌变异亚型3例。

1.2 方法

1.2.1 核酸提取：选取含有肿瘤病变细胞的石蜡包埋病理组织，且肿瘤细胞尽量在蜡块中部。将石蜡包埋组织切成厚为5 μm的切片，根据肿瘤病变细胞数量多少，取3～8片石蜡切片，按照石蜡切片样品核酸提取试剂盒（厦门艾德生物医药科技股份有限公司）说明书提取核酸。将核酸样本作好标记用于后续PCR扩增或放置于-20 ℃以下保存。

1.2.2 分子分析：本方法利用人类EGFR基因突变检测试剂盒（厦门艾德生物医药科技股份有限公司）， 基于实时荧光定量PCR平台结合了特异引物和双环探针两种技术，检测石蜡包埋病理切片组织中提取的DNA样品中含有的突变基因。利用特异引物对突变靶序列进行高精准PCR扩增放大，与此同时，利用双环探针对扩增产物进行检测，结合特别的PCR反应程序和高特异Taq酶的使用，在实时荧光定量PCR平台上实现对样品DNA中突变序列的检测，以达到对稀有突变检测的高特异性和高灵敏度。

1.3 统计学处理方法 使用SPSS13.0软件分析获得统计结果。采用x2分析比较分类变量。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 临床病理特征 患者的临床病理特征见表1。

表1 240例患者的临床病理特征

2.2 不同病理亚型与EGFR突变发生率的关系 x2分 析显示贴壁状为主亚型腺癌的EGFR发生率高于非贴壁状为主亚型腺癌（68.8% vs 36.9%，P=0.001）；微乳头为主亚型腺癌发生率高于非微乳头为主亚型腺癌（71.4% vs 35.6%，P=0.0001），实性为主亚型腺癌EGFR突变发生率低于非实性为主亚型腺癌（12.5% vs 43.9%，P=0.0029），见表2。

3 讨论

TKIs的出现给NSCLC患者的治疗带来了革命性的变化，尤其是肺腺癌患者[5]。众所周知，EGFR突变与TKIs的疗效密切相关。2011年由IASLC/ATS/ ERS肺癌多学科协作组联合对非小细胞肺腺癌病理类型的更新在肺癌邻域具有革命性的里程碑意义。协作组通过多学科方法紧密结合形态学、临床和影像学数据、免疫组织化学和分子分析。这一新的分类标志着肺癌治疗跨入了真正的个性化医学时代。关于新的分类国内外已有部分报道。Shim等[9]通过对107例肺腺癌标本的研究指出，EGFR突变与贴壁状和微乳头状腺癌密切相关。Sun等[10]表示EGFR突变除与贴壁状腺癌有关外，还与乳头状、实性为主型和黏腺癌有关，而与微乳头状腺癌无关。另外，Zhang等[11]通过349例女性不吸烟肺腺癌患者的研究表明，腺泡状腺癌的EGFR突变率很高。其他的研究[12-14]结果也不完全一致。

表2 不同病理亚型与EGFR突变发生率的关系（例）

研究[15-16]表明，EGFR突变主要在微乳头状腺癌中比较常见，其次是乳头状、腺泡状和贴壁状为主的腺癌。EGFR突变少见于实性为主型腺癌。本研究中，腺泡状（占26.53%）、微乳头状（占25.51%）、乳头状（占22.45%）以及贴壁状（占20.41%）这几种肺腺癌类型的EGFR突变率明显高于实性为主型（占3.06%），与之前的报道并不完全一致。

虽然近年来已经报道了一些EGFR突变的肺腺癌相关的组织学类型[17-18]，但是EGFR突变和腺癌亚型的关系尚不清楚。研究[9-10]表明，EGFR突变率在白人肺腺癌患者中为5%～20%，在亚洲肺腺癌患者中为20%～60%。EGFR突变常见于非吸烟女性患者的浸润性腺癌，病理亚型主要为贴壁状，其次是腺泡状和乳头状腺癌变异型。本研究收集的患者中贴壁状腺癌（占68.8%）的EGFR突变率高于非贴壁状为主亚型腺癌（占36.9%），与之前的研究结果一致。

在本研究中，微浸润腺癌占所有患者的比率不到2%，贴壁状腺癌样本共29例，占12.08%，浸润性腺癌样本共207例，占86.25%。这些浸润性的腺癌样本是一类大的肿瘤类型，提出了一种新的分类。因为它们由一个复杂多样的组织形式组成。通过使用全面的组织学分类方法，我们可以根据主要的亚型分类并确定影响预后的重要的组织类型。越来越多的数据证明实性为主亚型腺癌、微乳头腺癌、黏液性腺癌的预后均较差[19-21]。微乳头为主腺癌的不良预后不仅证实了多个先前研究的观察结果，同时也是对这个新的亚型分类的支持[16，22-25]。

总之，在肺腺癌分化明确的亚型，如贴壁状、乳头状和腺泡状，它们的EGFR突变率更高，而实性为主型、变异型等亚型却较低。然而，不管哪种肺腺癌的组织学亚型，都不能完全预测EGFR的突变状态，因此，任何情况下肺腺癌的EGFR突变检测都是有必要的。

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（本文编辑：丁敏娇）

The corrleation between the new lung adenocarcinoma classification and the EGFR mutation

LU Xulian, LI Xiufang, ZHANG Haiyong, LYU Yanting, HU Mengjun. Department of Pathology, Zhuji People’s Hospital, Shaoxing, 311800

Objective: To evaluate the correlation of EGFR mutation and histological subtypes of lung adenocarcinoma based on the IASLC/ATS/ERS classification 2011. Methods: 240 resected lung adenocarcinoma specimens were analyzed by ARMS, then the differences between histological subtypes and EGFR mutation were compared by the x2test. Results: EGFR mutation was detected in 240 specmens, most of which were acinar and papillary predominant adenocarcinoma, 89% and 56% respectively. EGFR mutation rate of the specimens with acinar, lepidic, papillary, or micropapillary component was higher than that of without these components (P＜0.05), and with solid or mucinous component was lower than that without the component (P＜0.05). Conclusion: There is heterogeneity of EGFR mutation in lung adenocarcinoma. The presence of well-differentiated components in lung adenocarcinoma, such as acinar, micropapillary, papillary and lepidic, indicates a higher EGFR mutation rate, while the solid and mucinous component indicates a lower EGFR mutation rate.

lung adenocarcinoma； carcinoma, non-small-cell lung； pathological type； epidermal growth factor receptor

R734.2

B

10.3969/j.issn.2095-9400.2016.10.016

2015-09-10

卢徐涟（1987-），女，浙江诸暨人，技师，硕士。